卵泡是哺乳動物卵母細(xì)胞發(fā)生發(fā)育過程中的核心功能單位。顆粒細(xì)胞是組成卵泡的重要細(xì)胞之一,在卵泡的形成和發(fā)育過程中,顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞之間的相互作用,會影響卵泡的發(fā)育、成熟以及閉鎖等生物學(xué)過程。利用外源激素處理4-10周齡綿羔羊,可獲得比同樣處理成年綿羊多10倍左右數(shù)量的發(fā)育卵泡,以羔羊?yàn)楣w不僅可以為胚胎體外生產(chǎn)提供大量的卵母細(xì)胞資源,大大縮短世代間隔,加快良種擴(kuò)繁速度。也為人們不斷深入探索綿羊卵泡發(fā)育提供了良好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�。本研究以中國美利奴（新疆軍墾型）成年母羊自然狀態(tài)下大卵泡（ELF）、小卵泡（ESF）和激素處理后大卵泡（EFF）以及羔羊激素處理前（LSF）、處理后（LFF）的卵巢顆粒細(xì)胞（GC）為材料,分別進(jìn)行了小RNA深度測序、轉(zhuǎn)錄組測序以及蛋白質(zhì)組測序分析。對差異表達(dá)miRNA、RNA及蛋白進(jìn)行聯(lián)合分析,并在體外培養(yǎng)的綿羊顆粒細(xì)胞上對特定miRNA及其預(yù)測靶基因進(jìn)行功能驗(yàn)證。本研究旨在通過對綿羊卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行多組學(xué)聯(lián)合分析以揭示其潛在分子調(diào)控機(jī)制,為更好地利用綿羊或羔羊體外胚胎資源,進(jìn)一步研究綿羊卵泡發(fā)育和生殖系統(tǒng)發(fā)育及調(diào)控提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下:1、成年綿... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

幼畜體外胚胎移植(Juvenileinvitroembryotransfer,JIVET)技術(shù)流程

圖 1-2 卵泡和卵母細(xì)胞發(fā)育過程（Das andArur., 2017）Fig. 1-2 Stages of follicle and oocyte development and meiotic resumption2.2.2 顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和 miRNA 研究進(jìn)展基因芯片技術(shù)和二代測序技術(shù)（Next-generation sequencing，NGS）飛速展的同時，也為研究卵泡發(fā)育過程中 GCs 的功能和激活途徑的研究開辟了新思路。研究人員通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)對 GCs 不同亞型的細(xì)胞進(jìn)行分析，以便挖掘在 GCs 中表達(dá)的具有卵母細(xì)胞調(diào)節(jié)功能的特定基因，很多研究都發(fā)現(xiàn)一在 GCs 中表達(dá)的基因可以作為鑒定卵母細(xì)胞質(zhì)量和發(fā)育能力的指標(biāo)。Munakata 等人利用 RNA-seq 分析了豬卵母細(xì)胞-顆粒細(xì)胞復(fù)合物（OGCs在體內(nèi)和體外的基因表達(dá)，結(jié)果顯示體內(nèi)和體外卵泡生長的轉(zhuǎn)錄組存在差異，中 HIF1 在 OGCs 發(fā)育過程中 mRNA 豐度較高，而 FLT1 （VEGFA 受體）、SP和 PCSK6 基因的低表達(dá)可能與體外發(fā)育效果較差有關(guān)（Munakata et al., 2016）基于基因芯片技術(shù)的幾項(xiàng)研究報道了一些基因能作為評估卵母細(xì)胞質(zhì)量潛在生物標(biāo)志物，如透明質(zhì)酸合成酶 2（HAS2）、抑制素 β- A （INHBA）、皮生長因子受體（EGFR）、gremlin 1（GREM1）、β-細(xì)胞蛋白（BTC）、CD4

圖 1-3 FSH/PKA/PI3K 通路模型（Knight and Glister., 2006）Fig. 1-3 The model of FSH/PKA/PI3K pathway發(fā)育相關(guān) miRNA 研究進(jìn)展croRNAs （miRNAs）是一類單鏈、內(nèi)源性的非編碼微小 RNA，廣核生物中，一般長度為 18-24 個核苷酸，調(diào)控轉(zhuǎn)錄后靶基因的表達(dá)，、真核生物的各種生理過程包括雌性動物繁殖活動、組織器官及個體發(fā)疾病的發(fā)生與細(xì)胞的分裂增殖及凋亡、各種新陳代謝活動等。93 年，Lee，F(xiàn)einbaum 和 Ambros 發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲中的 lin-4 沒質(zhì)，而是產(chǎn)生了一對短 RNA 轉(zhuǎn)錄本，每個轉(zhuǎn)錄本通過核蛋白質(zhì) lin-1制來調(diào)節(jié)線蟲幼蟲發(fā)育的時間 (Lee et al., 1993)。第二個發(fā)現(xiàn)的 miRN線蟲發(fā)育后期表達(dá)，并與 lin-14，lin-28，lin-41，lin-42 和 daf-12 UTR 互補(bǔ)，表明這些基因的表達(dá)可以通過 let-7 直接控制。lin-4 和源的并且以類似的方式起作用以觸發(fā)向晚期幼蟲和成蟲階段的rt et al., 2000)。自 let-7 發(fā)現(xiàn)以來，已經(jīng)在病毒，蠕蟲和靈長類等多，通過克隆、測序或軟件預(yù)測等方法鑒定出超過 10,000 種 miRNA(

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53 and NFκB regulate microRNA-34c expression in porcine ovarian granulosa cells[J]. XU Yuan,ZHANG Ai-ling,XIAO Guang,ZHANG Zhe,CHEN Zan-mou,ZHANG Hao,LI Jia-qi.  Journal of Integrative Agriculture. 2016(08)
[2]PI3K/AKT信號通路在維持血糖平衡中的作用[J]. 王笑,王甄真,陳雁.  生命科學(xué). 2013(02)



本文編號：2941592