腸炎沙門菌（Salmonella enteritis）為腸道胞內(nèi)菌,能引起胃腸炎、腹瀉,感染嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡,是一種嚴(yán)重的人畜共患菌�？股爻３３蔀榭刂粕抽T菌的首選,近幾年沙門菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性,不能有效的治療沙門菌。疫苗接種是一種很好的控制措施,本試驗(yàn)利用同源重組技術(shù),敲除靶基因,并對(duì)nmpC基因進(jìn)行了初步研究,為研制減毒活疫苗提供參考。本研究利用分子生物技術(shù)獲得重組質(zhì)粒pET-28a-nmpC,將其轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌株BL21經(jīng)IPTG誘導(dǎo),得到His-NmpC原核蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分析與Western blot驗(yàn)證,NmpC原核蛋白純化后免疫小鼠對(duì)其免疫保護(hù)力及抗體水平進(jìn)行Western blot鑒定和ELISA檢測(cè)。結(jié)果顯示,NmpC為包涵體表達(dá)且分子質(zhì)量約為38kD,免疫印跡分析結(jié)果顯示,NmpC原核蛋白可與His標(biāo)簽抗體和多抗血清特異性識(shí)別,說(shuō)明NmpC蛋白具有良好的免疫原性,且對(duì)小鼠免疫保護(hù)力達(dá)到70%,是一個(gè)很好的疫苗靶點(diǎn)。利用λ-Red同源重組技術(shù),將攜帶氯霉素敏感性的pKD3質(zhì)粒對(duì)腸炎沙門菌基因組上的nmpC基因進(jìn)行置換,通過(guò)PCR檢測(cè)方法得出腸炎沙門菌nmpC基... 

【文章來(lái)源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增沙門菌nmpC基因Fig2-1TheamplificationofnmpCgeneinSalmonella

因和 pET-28a 質(zhì)粒，分別用 BamHⅠ和 salⅠ進(jìn)接轉(zhuǎn)化入 DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，通過(guò) PCR 得到日，提取質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng) NCBI BL明 pET-28a-nmpC 表達(dá)載體構(gòu)建成功。蛋白的原核表達(dá)及驗(yàn)證a-nmpC 重組載體以化學(xué)轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)入 BL21 工程37℃，誘導(dǎo) 5h，得到重組 His-NmpC（rNmpC） SDS-PAGE 電泳驗(yàn)證，結(jié)果（圖 2-2）顯示，在而空載對(duì)照沒(méi)有出現(xiàn)條帶。為了試驗(yàn)準(zhǔn)確性，進(jìn)一這一結(jié)果，以鼠源抗His標(biāo)簽單克隆抗體為一抗（P-IgG 為二抗（1:20000 稀釋），結(jié)果（圖 2-4）顯帶，與 SDS-PAGE 結(jié)果一致，說(shuō)明得到表達(dá)重

Westernblot鑒定rNmpCFig2-3WesternblotidentificationofrNmpC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]沙門菌密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)六型分泌系統(tǒng)調(diào)控的相關(guān)研究[D]. 楊登輝.河南科技大學(xué) 2015
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