發(fā)布時(shí)間：2020-12-23 08:18

　　子宮內(nèi)膜炎是一種重要的產(chǎn)科疾病,是造成奶產(chǎn)業(yè)效益低下的重要原因。大腸桿菌是引起子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌之一,大腸桿菌LPS作為一種致病因子,在感染中起到關(guān)鍵性的作用。研究顯示,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與UPR在子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生發(fā)展中起到重要的調(diào)節(jié)作用,Luman作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍不明確。本試驗(yàn)通過構(gòu)建Luman慢病毒干擾的山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞系,探究在LPS刺激下Luman對UPR的調(diào)控機(jī)制及相關(guān)炎性因子的表達(dá)情況,進(jìn)一步明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與UPR在先天性免疫中的調(diào)節(jié)作用,為子宮內(nèi)膜炎的治療提供理論依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下:（1）構(gòu)建山羊Luman慢病毒干擾載體,qPCR,Western Blot和免疫熒光檢測干擾效率,干擾效率可達(dá)70%;CCK8試劑盒和BeyoClick?EdU-555試劑盒檢測細(xì)胞的增殖情況,發(fā)現(xiàn)Luman干擾后能顯著提高細(xì)胞的增殖水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,qPCR檢測周期蛋白Cyclin A,Cyclin B,Cyclin D的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)Luman干擾后G1期顯著降低,周期蛋白Cyclin D表達(dá)量顯著增加。（2）應(yīng)用免疫熒光對gEECs中的Luman進(jìn)行定... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 Luman和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的研究進(jìn)展
    1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.1.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與未折疊蛋白反應(yīng)
        1.1.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與疾病
    1.2 Luman的研究概況
        1.2.1 Luman基因的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 Luman基本結(jié)構(gòu)及其家族成員
        1.2.3 Luman的生物學(xué)功能
        1.2.4 Luman在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用
第二章 UPR與先天性免疫
    2.1 先天性免疫的研究概況
        2.1.1 模式識別受體概述
        2.1.2 先天性免疫信號通路
    2.2 UPR與先天性免疫
        2.2.1 UPR與細(xì)菌性感染
        2.2.2 UPR與神經(jīng)免疫性疾病
第三章 山羊Luman基因shRNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)菌、質(zhì)粒和細(xì)胞
        3.1.2 試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 山羊Luman shRNA慢病毒干擾載體的構(gòu)建
        3.2.3 山羊Luman shRNA慢病毒顆粒的包裝
        3.2.4 山羊Luman shRNA干擾片段的篩選
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 Luman干擾慢病毒載體的鑒定
        3.3.2 慢病毒包裝結(jié)果鑒定
        3.3.3 山羊EECs Luman干擾效果的鑒定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 Luman介導(dǎo)的UPR對炎癥反應(yīng)的影響
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 免疫熒光檢測Luman在 gEECs中的定位表達(dá)
        4.2.2 Luman對 gEECs增殖及周期的影響
        4.2.3 LPS對 gEECs UPR相關(guān)蛋白及相關(guān)炎性因子分泌的影響
        4.2.4 LPS對 gEECs Luman干擾細(xì)胞系UPR相關(guān)蛋白及相關(guān)炎性因子分泌的影響
        4.2.5 4-PBA對 gEECs Luman干擾細(xì)胞系IRE1 及炎性因子分泌的影響
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 Luman在 gEECs中的定位表達(dá)
        4.3.2 Luman對 gEECs增殖、周期及周期蛋白的影響
        4.3.3 LPS對 gEECs UPR相關(guān)蛋白及相關(guān)炎性因子分泌的影響
        4.3.4 LPS對 gEECs Luman干擾細(xì)胞系UPR標(biāo)志因子及炎性因子的影響
        4.3.5 4-PBA對 gEECs Luman干擾細(xì)胞系IRE1 及相關(guān)炎性因子的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與介導(dǎo)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞凋亡[J]. 季英磊,閆駿,王艷莎,劉夷嫦,谷振勇.  法醫(yī)學(xué)雜志. 2014(01)



本文編號：2933380