雞球蟲病是由一種或多種艾美爾球蟲感染雞腸道細(xì)胞而引起的一類原蟲疾病。艾美爾球蟲的生活史極其復(fù)雜,其不僅會(huì)掠奪腸道中的營養(yǎng)而且會(huì)對(duì)腸道細(xì)胞造成不同程度的損傷。當(dāng)前,雞球蟲病防控仍以藥物為主,但長時(shí)間的使用藥物使得耐藥蟲株不斷出現(xiàn),因此,球蟲耐藥性問題越演越烈。多年來,研究者們?cè)噲D通過其他途徑來解決這一問題,主要包括優(yōu)化使用抗球蟲藥物、新型抗球蟲藥物的篩選以及制備新型抗球蟲疫苗。雖然球蟲藥物篩選和新型抗球蟲疫苗制作的方法早已報(bào)道,但球蟲體外培養(yǎng)技術(shù)仍沒有完全建立和蟲株之間的交叉保護(hù)力較低導(dǎo)致抗球蟲藥物篩選和抗球蟲疫苗研發(fā)進(jìn)展緩慢。因此,本研究從找尋理想保護(hù)性抗原的角度出發(fā),克隆了E.tenella在入侵和生長發(fā)育中扮演重要作用的表面抗原家族基因EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22,將3個(gè)基因分別和共同插入到原核表達(dá)載體pET28a和真核表達(dá)載體pEGFP-N1之中。在此基礎(chǔ)之上進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn),旨在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫重組蛋白或重組質(zhì)粒后抗E.tenella感染的保護(hù)效果。研究主要包括以下幾個(gè)方面:（1）E.tenella野生株的分離和遺傳多態(tài)性分析從湖北省分離獲得的8個(gè)地區(qū)雞球蟲卵囊孢... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

樣品采集分布圖

72℃徹底延伸 10 min15℃冷卻 5 min反應(yīng)結(jié)束后，用 1%的瓊脂凝膠電泳檢測隨機(jī)片段，然后利用軟件對(duì)多肽片段進(jìn)行分析。2.4 結(jié)果與分析2.4.1 E. tenella 野生株形態(tài)學(xué)鑒定通過飽和食鹽水方法成功地從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盲腸中收集到了湖北省 8 個(gè)地區(qū)的球蟲卵囊，進(jìn)而根據(jù) E. tenella 形態(tài)學(xué)特征選擇性的收集卵囊，通過多次復(fù)壯從盲腸中進(jìn)一步獲取了 21 個(gè)雞場的 E. tenella 野生球蟲株。將收集的 E. tenella 野生球蟲株未孢子化卵囊在濕度、有氧和溫度條件下進(jìn)行卵囊孢子化，經(jīng)過多次試驗(yàn)條件的優(yōu)化獲得了本實(shí)驗(yàn)所收集的野生球蟲株的最優(yōu)孢子化條件，即：在濕度為 50%、溫度為 28.6℃和有氧條件下，卵囊的孢子化效率為 90%，未孢子化卵囊和孢子化的卵囊見圖 2-2。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆博士研究生學(xué)位論文tenella 野生株 ITS1 特異性鑒定文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)設(shè)計(jì)了鑒定不同艾美爾球蟲的 ITS1 特異性引物，以雞盲腸的隨州 1 野生株基因組作為模板，利用所設(shè)計(jì)的特異性引物進(jìn)行了艾S1 的 PCR 擴(kuò)增，PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂凝膠電泳檢測，電泳結(jié)果顯示 的 ITS1 能擴(kuò)增出目的條帶外(278bp)，其他種屬球蟲的 ITS1 均未能片段，電泳詳見圖 2-3。

【參考文獻(xiàn)】：
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