本文關(guān)鍵詞：DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡及氧化損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)、玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)是飼料中兩種最常見的霉菌毒素。DON、ZEA不僅降低飼料營養(yǎng)價值、降低動物生長和繁殖性能,而且還損傷機體免疫能力,導(dǎo)致疾病。霉菌毒素的免疫毒性日漸受到重視。本研究以原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞為模型,應(yīng)用CCK-8法測得豬脾臟淋巴細(xì)胞染毒48h后,DON、ZEA的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為1.48±0.20μg/mL和2.03±0.3μg/mL,表明DON、ZEA均能夠影響豬脾臟淋巴細(xì)胞的增殖活性。在此基礎(chǔ)上設(shè)計DON單獨染毒劑量水平為0.06μ/mL,0.3μg/mL/1.5μg/mL, ZEA單獨染毒劑量水平為0.08μg/mL,0.4μg/mL、2μg/mL、10μg/mL, DON和ZEA聯(lián)合染毒劑量為0.06μg/mL和0.08μg/mL、0.3μg/mL和0.4μg/mL、1.5μg/mL和2μg/mL,另設(shè)對照組。豬脾臟淋巴細(xì)胞單獨或聯(lián)合染毒DON、ZEA 48h后,檢測抗氧化功能、細(xì)胞凋亡、凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8 mRNA表達(dá)水平及培養(yǎng)液上清中相關(guān)的凋亡基因蛋白含量,以此來探知DON、ZEA單獨或聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡和氧化損傷的影響及機制,為闡明其免疫毒性機制提供依據(jù)。試驗結(jié)果：(1)與對照組比較,除DON、ZEA單獨染毒最低劑量組個別指標(biāo)外,其余染毒組SOD、CAT、GSH-Px活性和GSH含量均顯著降低(P0.05或P0.01),MDA含量極顯著增加(P0.01),且具有一定劑量依賴關(guān)系；聯(lián)合染毒組對5個指標(biāo)的作用效應(yīng)大于相應(yīng)劑量單獨染毒組,呈亞加性效應(yīng)。(2)DON、ZEA單獨染毒組細(xì)胞凋亡率均極顯著高于對照組(P0.01),且呈劑量依賴效應(yīng)；聯(lián)合染毒組中細(xì)胞凋亡率均極顯著高于相應(yīng)的單獨染毒組(P0.01),表現(xiàn)出亞加性效應(yīng)。(3)與對照組比較,除DON、ZEA單獨染毒最低劑量組個別指標(biāo)外,各染毒組p53、Bax、Caspase-3及Caspase-8含量和mRNA表達(dá)水平均顯著增加(P0.05或P0.01),而Bcl-2含量和mRNA表達(dá)水平則顯著降低(P0.05或P0.01),這種變化呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系；聯(lián)合染毒組對上述指標(biāo)的影響大于相應(yīng)劑量單獨染毒組,呈亞加性效應(yīng)。結(jié)論：(1)DON、ZEA單獨染毒可劑量依賴性導(dǎo)致體外培養(yǎng)的豬脾臟淋巴細(xì)胞氧化損傷,氧化損傷與細(xì)胞凋亡程度一致,表明氧化損傷途徑是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的機制之一。(2)DON、ZEA單獨染毒可劑量依賴性使Bax表達(dá)水平升高,Bcl-2表達(dá)水平降低,上調(diào)p53、Caspase-3和Caspase-8的基因表達(dá),表明DON和ZEA通過激活p53和Caspase通路而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且凋亡受到Bcl-2家族蛋白的調(diào)控。(3)聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞氧化損傷及細(xì)胞凋亡的影響主要表現(xiàn)出亞加性效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON) 玉米赤霉烯酮(ZEA) 脾臟淋巴細(xì)胞 氧化損傷 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.8
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英文縮寫詞表8-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-23
• 1 DON毒性作用研究進(jìn)展13-16
• 1.1 DON的免疫毒性13-14
• 1.2 DON與氧化損傷14-15
• 1.3 DON與細(xì)胞凋亡15-16
• 1.3.1 DON的細(xì)胞凋亡毒性機制16
• 2 ZEA毒性作用研究進(jìn)展16-20
• 2.1 ZEA的免疫毒性17
• 2.2 ZEA與氧化損傷17-18
• 2.3 ZEA與細(xì)胞凋亡18-20
• 2.3.1 ZEA的細(xì)胞凋亡毒性機制19-20
• 3 DON與ZEA在不同動物的毒性互作效應(yīng)研究20-22
• 3.1 豬20-21
• 3.2 鼠21
• 3.3 家禽21
• 3.4 其他動物21-22
• 4 研究的目的意義22-23
• 第二章 DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞氧化損傷的研究23-35
• 1 材料與方法23-25
• 1.1 材料23-24
• 1.1.1 試驗動物23
• 1.1.2 主要儀器23
• 1.1.3 主要試劑23-24
• 1.2 方法24-25
• 1.2.1 豬脾臟淋巴細(xì)胞懸液的制備24
• 1.2.2 試驗設(shè)計操作程序24-25
• 2 檢測指標(biāo)及方法25
• 2.1 DON、ZEA單獨染毒的細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(IC_(50))的檢測25
• 2.2 細(xì)胞內(nèi)抗氧化功能的檢測25
• 3 數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計25-26
• 4 結(jié)果與分析26-30
• 4.1 DON、ZEA單獨染毒的細(xì)胞半數(shù)抑制濃度(IC_(50))的結(jié)果26-27
• 4.2 細(xì)胞內(nèi)抗氧化功能的變化27-30
• 4.2.1 抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性及GSH含量的變化27-29
• 4.2.2 丙二醛(MDA)含量的變化29-30
• 5 討論30-34
• 5.1 DON、ZEA及其聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞增殖抑制率的影響30-32
• 5.2 DON、ZEA及其聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)抗氧化功能的影響32-34
• 6 小結(jié)34-35
• 第三章 DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡的研究35-53
• 1 材料與方法35-36
• 1.1 材料35-36
• 1.1.1 試驗動物35
• 1.1.2 主要儀器35
• 1.1.3 主要試劑35-36
• 1.2 方法36
• 1.2.1 豬脾臟淋巴細(xì)胞懸液的制備36
• 1.2.2 試驗設(shè)計操作程序36
• 2 檢測指標(biāo)及方法36-39
• 2.1 細(xì)胞凋亡率的檢測36
• 2.2 上清液中p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8含量的測定36-37
• 2.3 細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8的mRNA的表達(dá)37-39
• 2.3.1 引物設(shè)計與合成37
• 2.3.2 細(xì)胞總RNA的提取37-38
• 2.3.3 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA38-39
• 2.3.4 目的基因RT-qPCR條件的優(yōu)化39
• 2.3.5 Real Time PCR擴增39
• 3 數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計39-40
• 4 結(jié)果與分析40-49
• 4.1 細(xì)胞凋亡率的變化40-41
• 4.2 培養(yǎng)上清液中p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8含量的變化41-45
• 4.2.1 上清液中p53、Caspase-3及Caspase-8含量的變化41-43
• 4.2.2 上清液中Bcl-2及Bax含量的變化43-45
• 4.3 細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8的mRNA的表達(dá)45-49
• 4.3.1 p53、Caspase-3及Caspase-8基因mRNA表達(dá)的變化45-47
• 4.3.2 Bcl-2及Bax基因mRNA表達(dá)的變化47-49
• 5 討論49-52
• 5.1 DON、ZEA及其聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡的影響49-50
• 5.2 DON、ZEA及其聯(lián)合染毒對豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-8的影響50-52
• 5.2.1 Caspase基因家族50
• 5.2.2 bcl-2基因家族50-51
• 5.2.3 p53基因51-52
• 6 小結(jié)52-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文67

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：DON、ZEA聯(lián)合染毒對體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細(xì)胞凋亡及氧化損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：292342