肺炎衣原體（Chlamydia pneumoniae,C.pneumoniae,C.pn）是一種專性胞內(nèi)寄生的衣原體屬微生物,能夠感染人和馬、考拉等多種家養(yǎng)及野生動物,是一種重要的人畜共患病原體。C.pn急性感染會導(dǎo)致咽炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等一系列呼吸系統(tǒng)疾病,慢性持續(xù)感染則與肺癌、哮喘、阿爾茲海默病和冠心病等重要心血管疾病的致病原因密切相關(guān)。由于缺乏特征性臨床癥狀,因此需要在實驗室進一步進行鑒定。目前臨床檢測手段主要包括分離培養(yǎng)法、酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、微量免疫熒光試驗（Micro-immunofluorescence,MIF）、PCR分子檢測技術(shù)等。但分離培養(yǎng)法耗時長,對早期診斷意義不大。Cpn感染中特異性IgG、IgM上升緩慢,血清學(xué)檢測會貽誤檢測時間。PCR方法操作復(fù)雜,對檢測環(huán)境要求較高,易產(chǎn)生假陽性,導(dǎo)致難以商業(yè)化,一般用于實驗研究。目前缺乏一種對環(huán)境要求低,高靈敏、易操作的C.pn檢測技術(shù)。納米材料應(yīng)用于生物傳感器的設(shè)計已經(jīng)在生命科學(xué)等多個領(lǐng)域受到了廣泛研究,利用納米材料獨特的光學(xué)性質(zhì)、磁... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１細(xì)胞形態(tài)的變化

３．３?Ｃ．／ｗ的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法的建立??３．３．１?〇？？的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法特異性的判定??ＰＣＲ程序完成后，分析各檢測樣品的高分辨率熔解曲線（圖１－３），其中Ｃ．ｐ？樣品會??在相應(yīng)６５°Ｃ處形成溶解峰，同時此ＲＴ－ｑＰＣＲ方法不會擴增ｃｏ／；＇的核酸樣??品和妙／ｚ／ｍｗｒ／畫的核酸樣品。??０．３０?＂Ｉ???０?２５?／＼?￣?Ｃ，Ｐｎ??／?＼?—?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｗｌｕｍ??〇?０?２０－?／?＼?一￣?Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ??蕓?ｉ?Ｖ?—￣?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??！?°－１５－?ｙ?＼??ｉ?０－１０?■一＼??ｓ?０．０５－?＼??丫．????？０．０５－??５４?５６?５８?６０?６２?６４?６６?６８?７０?７２?７４?７６?７８??Ｔｅｍｐｅｒａ?ｔｉｌ?ｒｅ＾Ｃ）??圖１－３高分辨率熔解曲線。??Ｆｉｇ．?１－３?Ｈｉｇｈ?ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｃｕｒｖｅ．??３．３．２細(xì)胞培養(yǎng)Ｃ，樣品的檢測??采用己建立的ＲＴ－ｑＰＣＲ系統(tǒng)，擴增經(jīng)ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ法定量后梯度稀釋為１０５、Ｉ０４、１０３、??１０２、１０１、１０Ｑｃｏｐｉｅｓ／（ｘＬ的Ｃ．ｐ？核酸樣品，結(jié)果顯示，除ｌＯＧｃｏｐｉｅｓ／ｆｉＬＣ．／ｗ核酸樣品結(jié)果??為陰性，其他各濃度的樣品高分辨熔解曲線峰值和峰形保持一致，且擴增曲線峰形相似，??循環(huán)閾值（Ｃｔ值）均小于４０，判斷均為陽性，證明該方法重復(fù)性較好，可用于Ｃ．／ｗ定量??檢測。將如上核酸樣品作為標(biāo)準(zhǔn)品與細(xì)胞培養(yǎng)的新鮮核酸樣品同時進行ＰＣＲ反應(yīng)

３．結(jié)果??３．１探針制備及配比優(yōu)化??各種成分比例的探針電泳結(jié)果（圖２－１）顯示，ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ和抗體可以得到大小??不同的蛋白條帶，各探針中均包含兩種蛋白條帶，說明該探針制備方法是可行的，抗體己??成功修飾ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ。質(zhì)量比例為３：２、３：４和３：８的探針電泳條帶中抗體條帶逐漸變??濃，而質(zhì)量比例３：１０和３：１２的探針電泳條帶中抗體條帶濃度與前一條帶保持相同，說明??質(zhì)量比例為３：８的探針是最適比例，前兩種質(zhì)量比例中抗體量不足，而后兩種質(zhì)量比例則??是抗體量過剩�？贵w量過少會影響探針與Ｃ．ｐｎ的結(jié)合效率，而抗體量過多會造成金納米材??料聚團，影響其分散性。后續(xù)探針均采用３：?８的成分質(zhì)量配比，制備過程可見（圖２－２），??探針清洗過程中并未損耗太多ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎ?Ａ，重懸后的探針工作液與同濃度??ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ液體的均勾度基本一致，分散性未受太大影卩向。??ａｂｃｄｅｆ?ｇ?ｈ??１２０??ｉ〇〇?ｊｈｈ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2921151