豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起豬嚴重的腹瀉并可導致仔豬死亡,尤其是2周齡以內仔豬死亡率高達100%,很容易和其它腸道病毒發(fā)生混合感染,并且和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的臨床癥狀極為相似,給病原的檢測造成困擾。本實驗用抗TGEV重組N蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體建立一種捕獲抗原的雙抗體夾心ELISA檢測方法,經(jīng)過檢驗,效果良好,可以做為病原診斷的可靠簡便的方法。本研究從以下幾個方面展開:1、抗TGEV重組N蛋白單克隆抗體的制備。利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達TGEV重組N蛋白,經(jīng)過純化和鑒定后免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞按常規(guī)方法融合篩選后得到2株能穩(wěn)定分泌抗重組N蛋白抗體的雜交瘤細胞株2G7和2C2。2株單抗亞類均為IgG1;間接免疫熒光表明2株單抗能識別細胞中的TGEV,感染細胞呈現(xiàn)亮綠色熒光;雜交瘤細胞培養(yǎng)上清效價穩(wěn)定在1:12800;腹水的間接ELISA效價均為1:10~8。結果表明2株單抗細胞株遺傳穩(wěn)定,分泌的抗體特異性好。2、抗TGEV全病毒和重組N蛋白多抗血清的制備。將純化的病毒和重組N蛋白分別免疫家兔,采集血清經(jīng)過蛋白A親和層析純化得到2種多抗血... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學湖南省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

單抗亞類鑒定結果

圖 5-1 特異性實驗結果Fig5-1. Results of specialization test法敏感性毒（1337μg/ml）稀釋度 1:20、1:40、1:80、的臨界值和 P/N 值可得該 ELISA 方法可以原濃度為 13.37μg/ml，即該方法最低病毒檢表 5-9 夾心 ELISA 方法敏感性Table 5-9 The sensitivity of the sanwich ELISAmetho 40 80 100 51 0.437 0.275 0.260 65 3.564 2.244 2.122

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學 2011
[2]豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉快速診斷方法的建立及S基因的表達[D]. 劉鄧.新疆農(nóng)業(yè)大學 2009
[3]小鼠抗蛋清提取物單克隆抗體的制備與初步鑒定[D]. 許靜.南昌大學 2007



本文編號：2916336