研究目的:為了探索狂犬病毒單克隆抗體表達條件,為后續(xù)深入研究制備穩(wěn)定、高效價和質(zhì)量優(yōu)良的抗體提供經(jīng)驗,同時建立膠體金試劑盒用于檢測狂犬病毒,為狂犬病毒提供一種簡便、快速和靈敏度高的檢測方法,因此本文對抗狂犬病毒單克隆抗體的制備以及膠體金試劑盒進行了初步的研究。本文以雜交瘤細胞為研究對象,對雜交瘤細胞體外培養(yǎng)條件、抗狂犬病毒單克隆抗體的制備、抗狂犬病毒雜交瘤細胞純化篩選的制備、生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件和膠體金試劑盒的建立進行了研究。結(jié)果:1、靜置培養(yǎng)條件下,用顯微鏡觀察雜交瘤細胞貼壁生長,表面光滑透亮,圓潤,傾向于聚集生長,生長速度快;細胞經(jīng)過低血清馴化培養(yǎng)后在2%、5%和10%血清濃度中生長情況差異不大,在無血清條件下仍不能正常生長;細胞起始培養(yǎng)密度在2.5×10~5個/mL時能正常生長,低于1×10~5個/mL時不能正常生長;細胞能在1640培養(yǎng)基和DF12培養(yǎng)基中生長,不能在DMEM和F12培養(yǎng)基中生長;細胞株分泌抗體不穩(wěn)定,出現(xiàn)退化。2、通過體內(nèi)誘生法得到兩株細胞株注射的小鼠腹水呈陽性,抗體效價為1:1600;PCR檢測69和102細胞株發(fā)現(xiàn)存在支原體污染。3、通過單克隆篩選得到B6、... 

【文章來源】：廣西師范大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞株支原體污染檢測

e f圖 4-1 雜交瘤細胞生長狀態(tài)a.細胞培養(yǎng) 0h 時的狀態(tài)； b.細胞培養(yǎng) 24h 時的狀態(tài)；c.細胞培養(yǎng) 48h 時的狀態(tài)；d.細胞培養(yǎng) 72h 時的狀態(tài)；e.細胞培養(yǎng) 96h 時的狀態(tài)；f.細胞培養(yǎng) 120h 時的狀態(tài)；Figure 4-1 Hybridoma cell growth statusa. State of cell culture at 0h; b. State of cell culture at 24h; c. State of cell culture at 48h;d. State of cell culture at 72h; e. State of cell culture at 96h; f. State of cell culture at 120h;4.3.2 單克隆篩選雜交瘤細胞結(jié)果從 96 孔板中選擇顯色效果較好，OD 值較高的細胞在 24 孔板中擴大培養(yǎng)，HT 篩選，待細胞長滿后 ELISA 檢測。

試紙條的檢測：樣品的制備：取已標記抗體的膠體金 100 μL，15000 10 min，棄上清，沉淀用加有 1 %甘油的 PBST（0.5 %吐溫+PBS）懸 1 μL 1:1000 稀釋的抗原，陰性對照不加抗原。在試紙條上劃好檢測線后，在樣品釋放墊中滴入樣品，待樣品漫至吸水墊，觀察檢測線與質(zhì)控情況。 結(jié)果1 膠體金的穩(wěn)定性測試膠體金放置在 37℃、室溫和 4℃一個月 ，未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。


本文編號：2913826