研究目的:為了探索狂犬病毒單克隆抗體表達(dá)條件,為后續(xù)深入研究制備穩(wěn)定、高效價(jià)和質(zhì)量?jī)?yōu)良的抗體提供經(jīng)驗(yàn),同時(shí)建立膠體金試劑盒用于檢測(cè)狂犬病毒,為狂犬病毒提供一種簡(jiǎn)便、快速和靈敏度高的檢測(cè)方法,因此本文對(duì)抗狂犬病毒單克隆抗體的制備以及膠體金試劑盒進(jìn)行了初步的研究。本文以雜交瘤細(xì)胞為研究對(duì)象,對(duì)雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)條件、抗狂犬病毒單克隆抗體的制備、抗狂犬病毒雜交瘤細(xì)胞純化篩選的制備、生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件和膠體金試劑盒的建立進(jìn)行了研究。結(jié)果:1、靜置培養(yǎng)條件下,用顯微鏡觀察雜交瘤細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),表面光滑透亮,圓潤(rùn),傾向于聚集生長(zhǎng),生長(zhǎng)速度快;細(xì)胞經(jīng)過(guò)低血清馴化培養(yǎng)后在2%、5%和10%血清濃度中生長(zhǎng)情況差異不大,在無(wú)血清條件下仍不能正常生長(zhǎng);細(xì)胞起始培養(yǎng)密度在2.5×10~5個(gè)/mL時(shí)能正常生長(zhǎng),低于1×10~5個(gè)/mL時(shí)不能正常生長(zhǎng);細(xì)胞能在1640培養(yǎng)基和DF12培養(yǎng)基中生長(zhǎng),不能在DMEM和F12培養(yǎng)基中生長(zhǎng);細(xì)胞株分泌抗體不穩(wěn)定,出現(xiàn)退化。2、通過(guò)體內(nèi)誘生法得到兩株細(xì)胞株注射的小鼠腹水呈陽(yáng)性,抗體效價(jià)為1:1600;PCR檢測(cè)69和102細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)存在支原體污染。3、通過(guò)單克隆篩選得到B6、... 

【文章來(lái)源】：廣西師范大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞株支原體污染檢測(cè)

e f圖 4-1 雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)a.細(xì)胞培養(yǎng) 0h 時(shí)的狀態(tài)； b.細(xì)胞培養(yǎng) 24h 時(shí)的狀態(tài)；c.細(xì)胞培養(yǎng) 48h 時(shí)的狀態(tài)；d.細(xì)胞培養(yǎng) 72h 時(shí)的狀態(tài)；e.細(xì)胞培養(yǎng) 96h 時(shí)的狀態(tài)；f.細(xì)胞培養(yǎng) 120h 時(shí)的狀態(tài)；Figure 4-1 Hybridoma cell growth statusa. State of cell culture at 0h; b. State of cell culture at 24h; c. State of cell culture at 48h;d. State of cell culture at 72h; e. State of cell culture at 96h; f. State of cell culture at 120h;4.3.2 單克隆篩選雜交瘤細(xì)胞結(jié)果從 96 孔板中選擇顯色效果較好，OD 值較高的細(xì)胞在 24 孔板中擴(kuò)大培養(yǎng)，HT 篩選，待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后 ELISA 檢測(cè)。

試紙條的檢測(cè)：樣品的制備：取已標(biāo)記抗體的膠體金 100 μL，15000 10 min，棄上清，沉淀用加有 1 %甘油的 PBST（0.5 %吐溫+PBS）懸 1 μL 1:1000 稀釋的抗原，陰性對(duì)照不加抗原。在試紙條上劃好檢測(cè)線后，在樣品釋放墊中滴入樣品，待樣品漫至吸水墊，觀察檢測(cè)線與質(zhì)控情況。 結(jié)果1 膠體金的穩(wěn)定性測(cè)試膠體金放置在 37℃、室溫和 4℃一個(gè)月 ，未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。


本文編號(hào)：2913826