豬偽狂犬病病毒（PRV）感染引起的豬偽狂犬�。≒R）是一種嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的傳染病。免疫逃逸是PRV感染的重要特征,也是PRV持續(xù)性感染和難以被根除的主要原因。已有研究證實,PRV可通過下調(diào)宿主細胞表面豬白細胞抗原Ⅰ類分子（SLA-Ⅰ）（豬源MHCⅠ類分子）的表達而產(chǎn)生免疫逃逸,但引起SLA-Ⅰ表達下調(diào)的分子機制尚未闡明。本研究以臨床分離的PRV變異株HB1201為研究對象,圍繞PRV誘導SLA-Ⅰ分子下調(diào)的分子機制進行深入研究,并確定下調(diào)SLA-Ⅰ分子表達的重要病毒蛋白,為解析PRV的致病機制提供科學依據(jù)。為研究PRV對SLA-Ⅰ分子表達的影響,利用本實驗室分離的PRV變異株HB1201感染豬腎細胞（PK-15）,通過流式細胞術分析發(fā)現(xiàn),PRV感染能夠明顯下調(diào)PK-15細胞表面SLA-Ⅰ分子的表達水平。進一步分析了 PRV對宿主PK-15、原代豬肺泡巨噬細胞（PAMs）及豬睪丸細胞（ST）SLA-Ⅰ重鏈（HC）和SLA-Ⅰ輕鏈（β2m）蛋白表達的影響,證實PRV能夠明顯下調(diào)以上三種宿主細胞SLA-ⅠHC的表達水平,但對SLA-Ⅰβ2m的表達并無明顯影響。同時,研究發(fā)現(xiàn)PRV對SLA-Ⅰ... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－２?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１對感染細胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和Ｐ２ｍ蛋白水平的影響??將ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０ＭＯＩ分別模擬感染或感染ＰＫ－１５細胞（Ａ）、ＳＴ細胞（Ｂ）和ＰＡＭｓ?（Ｃ）

ＰＫ－１５細胞，感染后１２?ｈ后收取細胞樣品，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白水平的變化。??結(jié)果顯示，與對照組相比，ＰＲＶ－ＨＢ１２０１能明顯下調(diào)細胞中ＳＬＡ－ＩＨＣ蛋內(nèi)的表達水平，而紫外??滅活的ＨＢ１２０１對細胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白的表達水平卻并沒有明顯影響（圖２－３）。這些結(jié)果說??明ＰＲＶ下調(diào)細胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ分子的表達依賴病毒在細胞屮的復制。??ＷＳ、??ＫＤａ?＜?冬??４０?＾ＳＬＡ－．ＨＣ??１?０．１７?０．９９??５５—霸曜：、ｇ（．??Ｂ－ａｃｔｉｎ??４０???圖２－３?ＰＲＶ的復制對病毒下調(diào)ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ表達水平的影響??分別將ＰＲＶ－ＨＢ１２０１或紫外滅活的ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０?Ｍ０Ｉ模擬感染或感染ＰＫ－Ｉ５細胞。感染后１２?ｈ收取細胞??樣品，對如圖所示蛋白進行Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析。利用ＩｉｎａｇｅＪ軟件對ＳＬＡ－丨ＨＣ和ｐ－ａｃｔｉｎ的灰度值比值進行分析，??并把模擬感染組ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和卩－ａｃｔｉｎ的灰度值比值設為１。??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｖｉｒａｌ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｍｏｃｋ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１?ｏｒ?ＵＶ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ?ＨＢ１２０１?ａｔ?１０?ＭＯＩ．?Ａｔ?１２?ｈｐｉ

??圖２－４?ＰＲＶ經(jīng)典株Ｆａ對ＰＫ－１５細胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白水平的影響??分別將？１＾－服１２０１或？１＾不３以１０１＾０丨模擬感染或感染卩１＾１５細胞，感染后１２匕收取細胞樣品，對如圖所??示蛋白進彳亍Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析利用ＩｍａｇｅＪ軟件對ＳＬＡ－丨ＨＣ和ｐ－ａｃｔｉｎ的灰度值比值進行分析，并把模擬感染??組ＳＬＡ－１?ＨＣ和ｐ－ａｃｔｉｎ的灰度值比值設為１。??Ｆｉｇ．２－４?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＰＲＶ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｓｔｒａｉｎ?Ｆａ?ｏｎ?ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ??ＰＫ．－１５?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｍｏｃｋ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１?ｏｒ?ＰＲＶ－Ｆａ?ａｔ?１０?ＭＯＩ．?Ａｔ?１２?ｈｐｉ，?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ??ｈａｒｖｅｓｔｅｄ?ａｎｄ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ．?Ｔｈｅ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｒａｔｉｏｓ?ｏｆ?ＳＬＡ－Ｉ??ＨＣ／ｐ－ａｃｔｉｎ?ｗｅｒｅ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?ｕｓｉｎｇ?ＩｍａｇｅＪ．?Ｔｈｅ?ｏｐｔｉｃａｌ?ｄｅｎｓｉｔｙ?ｒａｔｉｏ?ｏｆ?ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ／（３－ａｃｔｉｎ?ｆｏｒ?ｍｏｃｋ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌｓ?ｗａｓ?ｓｅｔ??ｔｏ?１．??２．３．５?ＰＲＶ通過溶酶體途徑下調(diào)ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ的表達??為了進一步研究ＰＲＶ下調(diào)ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ表達水平所利用的途徑


本文編號：2913588