豬肝羧酸酯酶（pig liver carboxylesterase,PLE）是哺乳動物同類酶中最復(fù)雜的酶家族。目前本研究團隊已克隆到包括已報道7種亞型在內(nèi)的108種PLE同工酶,其中出現(xiàn)頻率較高的有55種。哺乳動物羧酸酯酶具有高度的酶活性和底物靈活性,可以水解多種內(nèi)外源性物質(zhì)而發(fā)揮不可替代的藥理學(xué)和毒理學(xué)作用,但對其生理作用卻知之甚少,這與羧酸酯酶在體內(nèi)分布的豐度不相稱。另有研究表明,人類CES可以水解內(nèi)源性大麻素,這給PLE在生理作用方面的研究提供了思路。常見的內(nèi)源性大麻素有2-AG和AEA兩種,其在機體內(nèi)按需合成并具有抑炎的作用,主要由經(jīng)典的大麻降解酶MAGL和FAAH水解。PLE與經(jīng)典的大麻素降解酶同屬于絲氨酸水解酶家族,且2-AG和AEA分別含有可供PLE水解的酯鍵和酰胺鍵,有理由推測PLE可能通過水解大麻素調(diào)控炎癥水平。為證明PLE在炎癥反應(yīng)中的作用并闡明其作用機制,本研究首先原核功能性表達(dá)PLE1和PLE6兩種亞型,進(jìn)行體外水解內(nèi)源性大麻素研究,發(fā)現(xiàn)PLE1和PLE6都能夠水解大麻素2-AG,且PLE6水解2-AG酶活力水平高達(dá)62.7nmol/min/mg。這為研究PLE... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CB2受體結(jié)構(gòu)（MalfitanoAMetal2014）

圖 1-2 AEA 轉(zhuǎn)運模式圖（McFarland MJ et al 2004）Fig.1-2 The mode of anandamide transport（McFarland MJ et al 2004）1.3.5 大麻素樣物質(zhì)對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)近年來，研究人員高度重視大麻素對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。其中，多數(shù)研究表大麻素發(fā)揮免疫抑制作用（Lourbopoulos Aet al 2011；G Krishnan et al 2012；Y et al 2014），少數(shù)研究提示大麻素發(fā)揮免疫促進(jìn)作用。大麻類物質(zhì)主要通過以幾個途徑發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用：（1）調(diào)節(jié)促炎因子、抑炎因子、趨化因子的生成（2）調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞增殖分化；（3）抑制抗原提呈；（4）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；（調(diào)節(jié)免疫球蛋白；（6）誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞（Tregs）（張淑娟和唐望先 2014；平 et al 2016）。對動物感染模型進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，THC 感染動物之后，可下IFN-γ、IL-12 水平，上調(diào) IL-4、IL-10 水平，調(diào)節(jié) Th 細(xì)胞向 Th2 方向分化（KlTW et al 2003）。例如，用嗜肺軍團病桿菌感染小鼠前，先用四氫大麻酚感染鼠，則可以下調(diào) IFN-γ和 IL-12 水平，上調(diào) IL-4 和 IL-10 水平，促進(jìn) Th 細(xì)胞Th2 細(xì)胞方向分化，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答（Klein TW et al 2000）。另外，2-AG

圖 4-1 花生四烯酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4-1 Standard curve of arachidonic acid-MS/MS 檢測，AA 檢測靈敏度為 6.25 ng/mL，AA 在 7.峰面積為 90.8，響應(yīng)值為 3.55e3，峰形尖銳，檢測靈敏度圖 4-2 花生四烯酸色譜圖Fig.4-2 The chromatogram of arachidonic acid功能性表達(dá)的 PLE 體外水解大麻素

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大麻素2型受體在免疫調(diào)節(jié)中的作用[J]. 李平,李熳,陳惠君,高芳.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2016(04)
[2]大麻素及其受體在免疫調(diào)節(jié)中的作用[J]. 張淑娟,唐望先.  華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2014(02)
[3]內(nèi)源性大麻素—生物合成、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及生物降解[J]. 唐雙奇,陸陽.  中國藥理學(xué)通報. 2013(08)
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[5]大麻受體1阻滯劑的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 卞紅平,周后元.  中國新藥雜志. 2008(06)
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碩士論文
[1]豬IL-6對關(guān)鍵藥物代謝酶CYP2C33的表達(dá)調(diào)控研究[D]. 解麗霞.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]豬肝羧酸酯酶主要亞型功能性表達(dá)及其酶活性比較研究[D]. 楊路.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]通城豬與大白豬豬肝羧酸酯酶表達(dá)譜與品種差異研究[D]. 肖啟玲.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]豬肝羧酸酯酶1水解磺胺類藥物的特性研究[D]. 閆慧平.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]大麻素受體1在扣帶回和海馬的表達(dá)分析[D]. 劉婷.南華大學(xué) 2011



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