豬鏈球菌（Streptococcus suis）是一種重要的人獸共患病病原菌,目前共分為29個(gè)血清型,其中2型豬鏈球菌（S.suis serotype 2,SS2）的致病性最強(qiáng),可導(dǎo)致豬和人的多種疾病和死亡,給養(yǎng)豬業(yè)和人類生命造成嚴(yán)重威脅,引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。本文對(duì)2型豬鏈球菌05ZYH33表面蛋白糖苷水解酶SSU05₀630的功能進(jìn)行了系統(tǒng)研究:通過SSU05₀630結(jié)構(gòu)域分析、基因克隆、蛋白表達(dá)和純化,獲得了SsCBM、SsGH16、SsGH20和SsCBM+GH16四個(gè)結(jié)構(gòu)域的蛋白,利用上述其中3種蛋白分別免疫日本大耳兔,制備了SsCBM、SsGH16和SsGH20結(jié)構(gòu)域蛋白的多克隆抗體,抗體效價(jià)均達(dá)到了1:204800;應(yīng)用信息肽GE9誘導(dǎo)片段轉(zhuǎn)化和同源重組方法,構(gòu)建了ssu05₀630基因缺失菌株,通過測(cè)定生長(zhǎng)曲線和小鼠實(shí)驗(yàn),對(duì)05ZYH33野生菌株（WT）和ssu05₀630^Δ基因缺失株的生長(zhǎng)特性和毒力進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示,二者菌落形態(tài)、生長(zhǎng)曲線及對(duì)小鼠致病力... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

豬鏈球菌的顯微鏡觀察

.3 宿主糖蛋白及病原菌糖苷水解酶糖蛋白是由蛋白質(zhì)和糖或糖的衍生物所組成的一類復(fù)雜蛋白，是蛋白質(zhì)翻譯后修飾常見形式之一，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量豐富，廣泛存在于細(xì)胞表面、血液和體液中，參胞定位、吞飲、識(shí)別、遷移、信息傳遞、免疫、受體、酶調(diào)節(jié)機(jī)制等重要生命過程。體內(nèi)，糖蛋白和糖脂存在于細(xì)胞外表面上，有助于形成包裹細(xì)胞的復(fù)雜的富含碳水化的糖萼，促進(jìn)細(xì)胞和細(xì)胞之間的相互作用、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和物理保護(hù)等關(guān)鍵功能[72]。發(fā)現(xiàn)，糖蛋白不僅是細(xì)胞的一種結(jié)構(gòu)組分，具有支持、保護(hù)、潤(rùn)滑機(jī)體的功能，而且催化、細(xì)胞和分子間識(shí)別，以及生物體的抗凍等作用密切相關(guān)[73]。根據(jù)糖基化的位點(diǎn)的不同，糖蛋白的糖鏈分為 N-聚糖（Asn 位點(diǎn)）和 O-聚糖 （Ser/T點(diǎn)）。其中 N-聚糖糖基化最普遍，其特征是五糖核心結(jié)構(gòu)，根據(jù)核心結(jié)構(gòu)外分支的糖成不同，分為高甘露糖型、復(fù)雜型和介于兩者之間的雜合型（圖 1-2）。

6）每孔中加入 100 μLTMB 底物顯色液。37℃避光孵育 10 min。7）每孔加入 50 μL 2 M 硫酸終止反應(yīng)。8）酶標(biāo)儀讀取 OD450 nm。.3 結(jié)果.3.1 SSU05_0630 結(jié)構(gòu)域分析及克隆策略采用肺炎鏈球菌的StrH氨基酸序列，通過BLAST搜索SS2 05ZYH33基因組注釋蛋示其同源蛋白只有一個(gè)，編號(hào) SSU05_0630。對(duì) SSU05_0630 進(jìn)行結(jié)構(gòu)域分析，發(fā)現(xiàn)其有 4 個(gè)結(jié)構(gòu)域：2 個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域（carbohydrate binding module）CBM1 和 CBM2，2 個(gè)水解酶催化結(jié)構(gòu)域，分別屬于糖苷水解酶家族 GH16 和 GH20（圖 2-1）。為了分別研究不同結(jié)構(gòu)域的功能，我們對(duì) 4 個(gè)結(jié)構(gòu)域根據(jù)功能進(jìn)行了分段克隆和表體如圖 2-1 所示，為保證結(jié)構(gòu)域完整性，每個(gè)克隆均向兩端進(jìn)行了延長(zhǎng)，分別命名sCBM、SsGH16、SsGH20 和 SsCBM+GH16。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用信息肽誘導(dǎo)和Cre/LoxP系統(tǒng)構(gòu)建豬鏈球菌基因缺失株[J]. 劉冉,陳福廣,陳平,黃萌萌,朱金魯,謝芳,孟慶文,劉思國(guó),劉建華,張躍靈.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]豬2型鏈球菌病疫苗的研究進(jìn)展[J]. 王斌,聶建,李旭廷.  今日養(yǎng)豬業(yè). 2012(01)
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碩士論文
[1]生物凈化技術(shù)用于重建SPF級(jí)日本大耳兔生產(chǎn)群[D]. 黃瑾.上海交通大學(xué) 2014



本文編號(hào)：2902056