豬鏈球菌（Streptococcus suis）是一種重要的人獸共患病病原菌,目前共分為29個血清型,其中2型豬鏈球菌（S.suis serotype 2,SS2）的致病性最強,可導致豬和人的多種疾病和死亡,給養(yǎng)豬業(yè)和人類生命造成嚴重威脅,引起國內(nèi)外學者的廣泛關注。本文對2型豬鏈球菌05ZYH33表面蛋白糖苷水解酶SSU05₀630的功能進行了系統(tǒng)研究:通過SSU05₀630結構域分析、基因克隆、蛋白表達和純化,獲得了SsCBM、SsGH16、SsGH20和SsCBM+GH16四個結構域的蛋白,利用上述其中3種蛋白分別免疫日本大耳兔,制備了SsCBM、SsGH16和SsGH20結構域蛋白的多克隆抗體,抗體效價均達到了1:204800;應用信息肽GE9誘導片段轉(zhuǎn)化和同源重組方法,構建了ssu05₀630基因缺失菌株,通過測定生長曲線和小鼠實驗,對05ZYH33野生菌株（WT）和ssu05₀630^Δ基因缺失株的生長特性和毒力進行了比較。結果顯示,二者菌落形態(tài)、生長曲線及對小鼠致病力... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

豬鏈球菌的顯微鏡觀察

.3 宿主糖蛋白及病原菌糖苷水解酶糖蛋白是由蛋白質(zhì)和糖或糖的衍生物所組成的一類復雜蛋白，是蛋白質(zhì)翻譯后修飾常見形式之一，在哺乳動物體內(nèi)含量豐富，廣泛存在于細胞表面、血液和體液中，參胞定位、吞飲、識別、遷移、信息傳遞、免疫、受體、酶調(diào)節(jié)機制等重要生命過程。體內(nèi)，糖蛋白和糖脂存在于細胞外表面上，有助于形成包裹細胞的復雜的富含碳水化的糖萼，促進細胞和細胞之間的相互作用、細胞信號傳導和物理保護等關鍵功能[72]。發(fā)現(xiàn)，糖蛋白不僅是細胞的一種結構組分，具有支持、保護、潤滑機體的功能，而且催化、細胞和分子間識別，以及生物體的抗凍等作用密切相關[73]。根據(jù)糖基化的位點的不同，糖蛋白的糖鏈分為 N-聚糖（Asn 位點）和 O-聚糖 （Ser/T點）。其中 N-聚糖糖基化最普遍，其特征是五糖核心結構，根據(jù)核心結構外分支的糖成不同，分為高甘露糖型、復雜型和介于兩者之間的雜合型（圖 1-2）。

6）每孔中加入 100 μLTMB 底物顯色液。37℃避光孵育 10 min。7）每孔加入 50 μL 2 M 硫酸終止反應。8）酶標儀讀取 OD450 nm。.3 結果.3.1 SSU05_0630 結構域分析及克隆策略采用肺炎鏈球菌的StrH氨基酸序列，通過BLAST搜索SS2 05ZYH33基因組注釋蛋示其同源蛋白只有一個，編號 SSU05_0630。對 SSU05_0630 進行結構域分析，發(fā)現(xiàn)其有 4 個結構域：2 個結合結構域（carbohydrate binding module）CBM1 和 CBM2，2 個水解酶催化結構域，分別屬于糖苷水解酶家族 GH16 和 GH20（圖 2-1）。為了分別研究不同結構域的功能，我們對 4 個結構域根據(jù)功能進行了分段克隆和表體如圖 2-1 所示，為保證結構域完整性，每個克隆均向兩端進行了延長，分別命名sCBM、SsGH16、SsGH20 和 SsCBM+GH16。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]利用信息肽誘導和Cre/LoxP系統(tǒng)構建豬鏈球菌基因缺失株[J]. 劉冉,陳福廣,陳平,黃萌萌,朱金魯,謝芳,孟慶文,劉思國,劉建華,張躍靈.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(02)
[2]豬2型鏈球菌病疫苗的研究進展[J]. 王斌,聶建,李旭廷.  今日養(yǎng)豬業(yè). 2012(01)
[3]豬鏈球菌2型分選酶srtBCD基因敲除株的構建及其生物學特性分析[J]. 陳紅娜,廖輝,王長軍,潘秀珍,唐家琪.  微生物學報. 2011(03)
[4]豬鏈球菌2型毒力相關因子的研究進展[J]. 郭莉莉,徐成剛,張建民,李靜怡,陳濟鐺,廖明.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(01)

碩士論文
[1]生物凈化技術用于重建SPF級日本大耳兔生產(chǎn)群[D]. 黃瑾.上海交通大學 2014



本文編號：2902056