禽巴氏桿菌病(Avian pasteurellosis)又稱禽霍亂,是由禽多殺性巴氏桿菌引起的主要侵害雞、火雞禽類的一種急性、接觸性、敗血性傳染病。臨床上感染的病禽主要表現(xiàn)為急性死亡,死亡率極高。早期使用磺胺類、氯霉素等抗生素預(yù)防治療禽巴氏桿菌病有一定效果。但隨著抗生素的長期大量使用,一方面導致禽蛋禽肉等禽產(chǎn)品的藥物殘留,另一方面導致細菌耐藥性增強。預(yù)防控制本病的最有效途徑和發(fā)展趨勢是免疫預(yù)防。禽多殺性巴氏桿菌(Avian pasteurella,Pm)有15種血清型,用不同血清型的巴氏桿菌制備疫苗免疫,發(fā)現(xiàn)各血清型之間并不能提供交叉保護。當前我國使用的禽多殺性巴氏桿菌疫苗是滅活疫苗,最好的商業(yè)化滅活疫苗對同源血清型菌株感染的免疫保護率不到80%,保護期短。因此,迫切需要提高滅活疫苗的免疫保護效果和免疫保護期,或者研發(fā)新型高效的新疫苗,以滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要。部分學者對某些細菌在限鐵和非限鐵培養(yǎng)進行比較蛋白質(zhì)組學的比較分析,發(fā)現(xiàn)限鐵培養(yǎng)的菌液中有大量的免疫原性蛋白,與非限鐵培養(yǎng)的菌液相比呈明顯的上調(diào)表達�；谶@樣的發(fā)現(xiàn),我們推測禽巴氏桿菌在限鐵培養(yǎng)條件下也可能會產(chǎn)生大量的免疫原性相關(guān)蛋白... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

宿主阻止鐵吸收的機制Fig.1-1Felimitationduringbacterialinfections

細菌對鐵元素的吸收利用包含兩個步驟，一是對鐵元素的捕獲，二是對鐵元運輸。鐵離子捕獲方式是由鐵基團、血紅蛋白和游離鐵離子組成的捕獲系統(tǒng)(圖 基團是細菌分泌的低分子量鐵螯合劑，與鐵離子結(jié)合的親和力超過轉(zhuǎn)鐵蛋白和蛋白。由于這些分子太大，無法通過革蘭氏陰性細菌外膜的非選擇性孔進行擴此核團的能量依賴轉(zhuǎn)運是通過碳依賴受體介導的。革蘭氏陰性細菌的周質(zhì)缺TP 或離子梯度，這些梯度可以驅(qū)動外膜的轉(zhuǎn)運。因此，由 TonB-ExbB-ExbD 系用內(nèi)膜產(chǎn)生的質(zhì)子動能的能量介導外膜的轉(zhuǎn)運（Noinaj et al., 2010）。在細胞質(zhì)物結(jié)合蛋白(SBPs)是 ATP 結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運蛋白家族的成員，它識別鐵素體鐵復(fù)合物，并最終將該復(fù)合物運送到同源的 ABC 轉(zhuǎn)運蛋白。革蘭氏陽性細菌也表BPs，但這些蛋白被捆綁在細胞質(zhì)膜上。在革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中，當團到達細胞質(zhì)時，結(jié)合的鐵離子通過還原為二價鐵離子或通過鐵質(zhì)團的酶降解放，最終釋放出鐵離子作為營養(yǎng)來源。為了脊椎動物產(chǎn)生中性粒細胞明膠酶相脂質(zhì)運載蛋白(NGAL；也被稱為脂脂質(zhì)運載蛋白或 siderocalin)，它結(jié)合并隔離鐵蛋白(圖 1-2），對抗鐵離子介導的鐵離子獲取。但一些細菌會產(chǎn)生“隱形”的通過化學修飾來逃避 NGAL（Bao et al., 2010）。

圖 2-1 限鐵環(huán)境和普通環(huán)境中 Pm 生長曲線Fig. 2-1 Pm growth curves in iron-limited environment and common environment2.4.2 疫苗的制備疫苗無菌檢驗結(jié)果：將制備的兩種滅活疫苗無菌接種于 TSA 平板，37℃培養(yǎng)48h，TSA 平板無細菌生長，表明滅活疫苗完全滅活，沒有雜菌。疫苗保質(zhì)期檢驗結(jié)果： 取制備的滅活油乳劑疫苗 4℃放置 12 個月后，無分層現(xiàn)象，外觀、性狀均無變化，表明滅活疫苗保質(zhì)期可達 12 月，性狀穩(wěn)定。穩(wěn)定性檢驗結(jié)果：取制備的滅活油乳劑疫苗疫苗滴于水面上不擴散，經(jīng)離心后無分層現(xiàn)象，外觀、性狀均無變化，表明疫苗乳化效果良好。疫苗安全性檢測結(jié)果：各組雞均無臨床癥狀和發(fā)病死亡情況，接種部位無紅腫等炎性癥狀，三組雞在第 7d 進行解剖觀察，內(nèi)臟組織無明顯的病變；無菌接種臟器組織均無細菌生長，表明所制備的疫苗安全性好。2.4.3 疫苗免疫后抗體監(jiān)測對免疫后的雞群，每周采血一次，分離血清。血清經(jīng) 1:50 稀釋后，通過 ELISA

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬源多殺性巴氏桿菌的分子流行病學與致病性研究[D]. 湯細彪.華中農(nóng)業(yè)大學 2010

碩士論文
[1]1型鴨疫里默氏桿菌比較蛋白質(zhì)組學研究及抗體檢測方法的建立[D]. 楊依霏.華中農(nóng)業(yè)大學 2012



本文編號：2899837