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弓形蟲高遷移率族蛋白B1的鑒定及功能

發(fā)布時間:2020-12-05 04:35
  高遷移率族蛋白(High Mobility Group Box1, HMGB1)是廣泛存在于真核生物細胞核內(nèi)的非組蛋白,具有綁定DNA穩(wěn)定染色質(zhì)的功能。釋放到胞外的HMGB1可與細胞表面不同受體結(jié)合而發(fā)揮不同的生物學效應,主要包括促炎癥反應和免疫調(diào)節(jié),而阻斷HMGB1的釋放或中和胞外HMGB1已經(jīng)成為治療炎癥相關疾病的靶標。專性細胞內(nèi)寄生的弓形蟲(Toxoplasma gondii)基因組也編碼了此類同源蛋白(本研究命名為TgHMGB1a, TgHMGB1b和TgHMGB1c)。系統(tǒng)發(fā)育和生物信息學分析顯示TgHMGB1a、b和c只含有一個HMG box結(jié)構域,且在3個基因型蟲株內(nèi)保守一致。為揭示弓形蟲HMGB1蛋白功能及其作用機制,本研究選擇克隆了與哺乳動物HMGB1同源性最高的TgHMGB1a,對其生物學特性與miceHMGB1展開比較研究,并探索弓形蟲感染誘導的宿主HMGB1變化及其機制。本研究首先制備了鼠抗TgHMGB1a血清,以之進行western blot鑒定顯示TgHMGB1a分子量約34kD,不與HFF細胞HMGB1、TgHMGB1b和c發(fā)生交叉反應。間接免疫熒光證實T... 

【文章來源】:中國農(nóng)業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】:126 頁

【學位級別】:博士

【部分圖文】:

弓形蟲高遷移率族蛋白B1的鑒定及功能


人類HMGB結(jié)構特征和轉(zhuǎn)錄后修飾位點A.HMGBl分子Abox和Bbox的氛基酸序列位點和的翻譯后修飾位點

轉(zhuǎn)錄因子,架構,綁定,位點


.1.3 HMGBl的功育巨HMGBl是核內(nèi)高量表達的非組蛋白,也是唯一可以分泌到胞外發(fā)揮細胞因子樣作MGB分子。因此其功能主要包含胞內(nèi)和胞外兩方面。.1.3.1胞內(nèi)HMGB1的功能HMGB1組成性表達于各種組織細胞胞核內(nèi),非特異性地與DNA結(jié)合,可通過核孔而穿核與胞衆(zhòng)之間,是DNA的伴彳呂分子,在核內(nèi)參與影響DNA的轉(zhuǎn)錄、復制、重組和修復,與穩(wěn)定等多種生理過程,而參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控是其核內(nèi)功能的重要方面[丨8]。HMGB1與染色質(zhì)不穩(wěn)定結(jié)合,相互作用呈現(xiàn)高度動態(tài)性,在細胞分裂中期,HMGB1可的染色體上分離并擴散至胞楽中。HMGB1通過與核小體的作用替代H1組蛋白而改變?nèi)旧珣B(tài),可使染色質(zhì)解螺旋進而極度扭曲DNA雙螺旋以便各種轉(zhuǎn)錄因子或其他序列特異性蛋白質(zhì)相互作用,因此HMGB1被稱為染色體的架構蛋白(Architecturefactor)。如圖1-2所示,轉(zhuǎn)錄過程中,HMGB分子通過彎曲基因組特定的DNA位點,從而促進轉(zhuǎn)錄因子與之結(jié)合,成轉(zhuǎn)錄復合體,由此可見,HMGB1蛋白可能通過在轉(zhuǎn)錄復合體形成過程中發(fā)揮支架結(jié)構參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控[191。

模式圖,核小體,特定基,模式圖


HMGB蛋白促進核小體滑移,釋放特定基因DNA片段完成轉(zhuǎn)錄的模式圖I,和HMGB ?樣,結(jié)合在核小體的入口處(綠色為組蛋白八聚體,椅色為DNA),組蛋白III和H結(jié)合是相互排斥競爭的,IIMGB可以通過帶負電荷的C-tai丨與帶正電荷的組蛋白的側(cè)遙序列相互作蛋白HI與核小體的結(jié)合(第一步),IIMGB綁定在核小體邊緣導致DNA彎曲而形成緊密的??DNA-l的結(jié)構即足招募結(jié)合重構復合物(RC)的位點(第二步),1IMGB增強了RC與DNA的結(jié)合能力:


本文編號:2898886

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