血清4型禽腺病毒(FAdV-4)屬于禽腺病毒屬。近年來,國內(nèi)雞群由FAdV-4引起的包涵體肝炎、心包積液病例逐漸增多。FAdV-4不僅感染3-7周齡肉雞,還感染10-20周齡的蛋雞,給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。由于滅活疫苗的研制及應用,今后如何來鑒別雞群是自然感染還是處于免疫狀態(tài),對FAdV-4有效及時防控至關重要。本研究以FAdV-4的非結(jié)構蛋白中的22K和52K為靶點,通過多肽合成,建立分別檢測22K和52K蛋白抗體的基于多肽表位的ELISA方法,并評價其能否用于區(qū)分檢測自然感染雞群與滅活疫苗免疫雞群。1.檢測FAdV-4非結(jié)構蛋白22K、52K抗體的ELISA方法建立為區(qū)分檢測自然感染雞群與滅活疫苗免疫雞群,本研究在利用DNA Star對FAdV-4非結(jié)構蛋白22K及52K進行抗原性分析的基礎上,進行了多肽合成、篩選,并建立了檢測22K及52K蛋白抗體的ELISA方法。多肽篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn),22K-4P和52K-4P合成多肽與FAdV-4陽性血清反應性最佳。通過條件優(yōu)化,分別建立了基于22K-4P和52K-4P多肽的檢測 FAdV-4 抗體的 ELISA 方法,22K-4P-ELISA 以及 52K-4P-ELISA。22K-4P-ELISA 以及52K-4P-ELISA的CUT-OFF值分別為0.1668以及0.182。特異性試驗證明所建立的兩個ELISA僅與FAdV-4多抗血清反應,而不與所檢測的抗其它禽類病毒包括雞貧血病毒(CAV)、血清8型禽腺病毒(FAdV-8)、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)、傳染性支氣管炎病毒(IBV)、馬立克氏病病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)的多抗血清反應。重復性試驗表明所建立的兩個ELISA的批內(nèi)及批間的變異系數(shù)均小于10%。檢測FAdV-4抗體的22K-4P-ELISA以及52K-4P-ELISA方法的建立,為區(qū)分檢測自然感染雞群與滅活疫苗免疫雞群提供了技術可能。2.檢測FAdV-4非結(jié)構蛋白22K、52K抗體的ELISA方法的初步應用為評價所建立的22K-4P-ELISA以及52K-4P-ELISA方法能否用于區(qū)分檢測自然感染雞群與滅活疫苗免疫雞群,將22K-4P-ELISA以及52K-4P-ELISA對FAdV-4人工感染雞群,臨床發(fā)病雞群以及滅活疫苗免疫雞群血清進行了檢測:并與基于結(jié)構蛋白Fiber2的檢測FAdV-4抗體的ELISA以及IFA方法進行了比較。檢測結(jié)果表明:在檢測24份FAdV-4人工感染雞群雞血清樣品時,22K-4P-ELISA,52K-4P-ELISA,F2-ELISA和IFA的陽性率分別為87.5%、95.8%、100%和100%;在檢測189份臨床發(fā)病雞群雞血清樣品時,22K-4P-ELISA,52K-4P-ELISA,F2-ELISA 和 IFA 的陽性率分別為 85.7%、88.9%、96.3%和93.7%;在檢測81滅活疫苗免疫雞群血清中,22K-4P-ELISA,52K-4P-ELISA,F2-ELISA和IFA的陽性率分別為2.5%,0%,100%和100%。以上結(jié)果表明,本研究建立的22K-4P-ELISA和52K-4P-ELISA方法可以鑒別雞群是FAdV-4自然感染還是處于FAdV-4滅活疫苗免疫狀態(tài),可為FAdV-4的防控與凈化提供技術支撐。
【學位單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S852.65
【部分圖文】：

圖１－２?５２Ｋ抗原性分析??

冬令?冬多?冬冬??５２Ｋ多肽編號??圖１－４?５２Ｋ非結(jié)構蛋白分段后的多肽與血清的反應??Ｆｉｇｕｒｅ?１－４?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｐｅｐｔｉｄｅｓ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｆｒｏｍ?５２Ｋ?ａｎｄ?ｓｅｒｕｍ??３．３間接ＥＬＩＳＡ方法的建立及優(yōu)化??３．３．１最佳封閉及稀釋液的選擇??封閉液及待檢血清稀釋液分別為２％?ＢＳＡ／２％?ＢＳＡ、８％?ＲＳ／８％?ＲＳ、５％脫脂乳＋１％小??牛血清／Ｉ％脫脂乳稀釋和５％脫脂乳＋１％小牛血清／ＰＢＳＴ稀釋時，２２Ｋ－４Ｐ多肽最佳封閉及稀??釋液的選擇結(jié)果見表１－３，圖１－５；?５２Ｋ－４Ｐ多肽最佳封閉及稀釋液的選擇結(jié)果見表１－４，圖??１－６。從表格以及圖中數(shù)據(jù)可見，２２Ｋ－４Ｐ多肽和５２Ｋ－４Ｐ多肽用２％ＢＳＡ作為封閉、稀釋液??時非特異性較低

?ｉｎｉ??＿?ｚ?／?／?／??／?／?ｖ??血清來源??圖１－６?５２Ｋ－４Ｐ多肽最偵封閉及稀釋液的選擇??Ｆｉｇｕｒｅ?１－６?Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｐｔｉｍａｌ?ｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｂｌｏｃｋｉｎｇ?ａｎｄ?ｄｉｌｕｔｉｏｎ?ｆｏｒ?５２Ｋ－４Ｐ??３．３．２最佳封閉時間的確定??按照５卜ｉｇ／ｍｌ的抗原濃度進行包被酶標板，用２％?ＢＳＡ封閉液進行封閉，封閉時間設立??以下幾個時間（３０ｍｉｎ、ｌｈ、２ｈ、３ｈ）。按間接ＥＵＳＡ程序進行試驗，測定其〇Ｄ４５０ｎｍ值，??并計算ＯＤ４５０ｎｍ的平均值，結(jié)果顯示封閉時間ｌｈ時，Ｐ／Ｎ值最大，封閉效果最好。因此，??最佳封閉時間為］ｈ。具體結(jié)果見表１－５，圖１－７。??
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 嚴歡;馬玉馨;信愛國;高華峰;;小反芻獸疫病毒P蛋白及非結(jié)構蛋白V表達特性研究[J];中國獸醫(yī)雜志;2017年08期

2 Gibson CA;張連印;;用病毒非結(jié)構蛋白制備亞單位疫苗的前景[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;1989年02期

3 羅寶正,薄清如,王偉毅,程鋼,何蘊韶;口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白3ABC基因的克隆與原核表達[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2005年02期

4 任武澤,潘潔,孫世鐸,莊娟,饒忠,徐泉興,尤永進;口蹄疫非結(jié)構蛋白3ABC的融合表達及純化研究[J];上海畜牧獸醫(yī)通訊;2004年03期

5 成軍,鐘彥偉,施雙雙,王剛,董菁,夏小兵,楊繼珍,陳菊梅;HCV非結(jié)構蛋白NS5A人源單鏈抗體可變區(qū)基因的篩選與鑒定[J];中華微生物學和免疫學雜志;2000年06期

6 陳秋勇;胡崇偉;陳如敬;陳曉珞;林群群;陳鵬強;修金生;;豬嵴病毒非結(jié)構蛋白2C的生物信息學分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年11期

7 周丹娜;夏菲;段正贏;劉學;郭銳;楊克禮;袁芳艷;劉澤文;孟麗;蔡行;田永祥;;乙型腦炎病毒非結(jié)構蛋白1單克隆抗體的制備[J];湖北農(nóng)業(yè)科學;2014年23期

8 楊小猛;趙丹;杜麗偉;陳相;江麗芳;;Ⅱ型登革病毒非結(jié)構蛋白1多克隆抗體制備和免疫特征分析[J];分子診斷與治療雜志;2016年04期

9 遲苗苗;宋娟;宋芹芹;于潔;羅小暖;張璐;王欣玲;韓俊;;鼻病毒非結(jié)構蛋白2B誘導細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激[J];微生物與感染;2015年03期

10 張松林;沈志強;劉磊;馬永彪;劉吉山;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒結(jié)構和非結(jié)構蛋白生物學功能研究進展[J];畜牧獸醫(yī)學報;2012年11期

相關博士學位論文 前10條

1 王德平;寨卡病毒兩種蛋白質(zhì)的結(jié)構和功能研究[D];天津大學;2017年

2 許曉瑩;寨卡病毒非結(jié)構蛋白NS1結(jié)構及其相關功能研究[D];中國科學技術大學;2018年

3 王真;禽傳染性支氣管炎病毒非結(jié)構蛋白16的生物學功能研究[D];長江大學;2017年

4 孫博興;H9N2亞型禽流感非結(jié)構蛋白NS1A基因的克隆、表達及其誘導Hela細胞凋亡的研究[D];吉林大學;2005年

5 卿柳庭;豬細小病毒非結(jié)構蛋白NS1和結(jié)構蛋白VP2的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2005年

6 胡濤;豬繁殖與呼吸綜合癥病毒非結(jié)構蛋白NSP4結(jié)構與功能的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2006年

7 楊璞;抑制非結(jié)構蛋白控制呼吸道合胞病毒感染小鼠氣道炎癥反應的研究[D];武漢大學;2015年

8 謝金鑫;豬瘟病毒非結(jié)構蛋白NS5A切割的機制研究[D];吉林大學;2016年

9 鄭威;口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白2C影響宿主先天性免疫的機理[D];東北師范大學;2014年

10 張寅杰;胡寧病毒核蛋白結(jié)構與功能的研究[D];南開大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 蘭繼勛;PRRSV具有跨膜特性的非結(jié)構蛋白參與病毒復制轉(zhuǎn)錄復合體形成機理的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

2 申秋平;檢測血清4型禽腺病毒非結(jié)構蛋白22K、52K抗體的ELISA方法建立及應用[D];揚州大學;2018年

3 李遠;豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構蛋白nsp8多克隆抗體的制備和nsp8與nsp9蛋白的互作分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2018年

4 紀美靜;乙型腦炎非結(jié)構蛋白NS1免疫原性的研究[D];長江大學;2018年

5 韓玉;南方水稻黑條矮縮病毒非結(jié)構蛋白P6是病毒復制的關鍵因子[D];福建農(nóng)林大學;2017年

6 吳磊;口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白2C'3AB抗體膠體金檢測試紙的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2010年

7 李永亮;口蹄疫病毒3B非結(jié)構蛋白單克隆抗體的制備及應用[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2009年

8 李建強;豬傳染性胃腸炎病毒非結(jié)構蛋白基因及非編碼區(qū)的克隆與分析[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2006年

9 王娜;口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白3A單抗結(jié)合肽的鑒定及阻斷ELISA方法的建立[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2014年

10 曹麗娟;口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白2B、3A對細胞凋亡的影響及干擾3D基因?qū)Σ《疽种频挠^察[D];石河子大學;2015年

本文編號：2887702