本文關(guān)鍵詞：重組粒細胞集落刺激因子對小鼠大腸桿菌性乳房炎的預(yù)防效果研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳房炎是母畜的常見疾病之一,尤其奶牛乳房炎給養(yǎng)殖業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。奶牛臨近分娩時,血液中的白細胞減少,尤其是中性粒細胞顯著減少是引起奶牛產(chǎn)后感染疾病如子宮內(nèi)膜炎、乳房炎的關(guān)鍵因素之一。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)是參與調(diào)節(jié)骨髓粒系造血的主要細胞因子,能夠促進骨髓中粒系祖細胞的增殖、分化,增加外周血的中性粒細胞數(shù)量和促進成熟中性粒細胞的游走、吞噬、殺菌能力及對外來物質(zhì)的粘附。因此,G-CSF可望作為防治圍產(chǎn)期奶牛乳房炎等感染性疾病的藥物。通過建立小鼠大腸桿菌性乳房炎模型,探討G-CSF對小鼠大腸桿菌性乳房炎的預(yù)防效果。方法：(1)選取泌乳8-10天的初產(chǎn)昆明小鼠24只,隨機平均分成4組,與幼鼠隔離2h后, Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組小鼠第四對乳房兩側(cè)分別灌注25gL1.5×105CFU/mL1.5×107CFU/mL和1.5×109CFU/mL菌液,ⅣV組灌注等量滅菌生理鹽水,建立小鼠大腸桿菌性乳房炎模型。(2)另選取120只泌乳8-10天的初產(chǎn)昆明小鼠,隨機平均分為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、ⅣV組和V組。與幼鼠隔離2h后,Ⅰ、Ⅱ組皮下注射0.1mL生理鹽水,Ⅲ、Ⅳ、V組分別按10g/kg、20μg/kg、30μg/kg體重皮下注射0.1mLrhG-CSF;24h后,Ⅰ組第四對乳房灌注50μl(25μL/側(cè))的生理鹽水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、組灌注含1.5x107CFU/mL大腸桿菌的菌液；在乳房灌注后的0h、24h、72h、120h,每組隨機選取6只小鼠進行采樣,檢測血液生理指標(biāo)、測定血清中TNF-α含量、乳腺組織大腸桿菌計數(shù)及乳腺組織病理學(xué)變化。結(jié)果：(1)小鼠大腸桿菌乳房炎模型建立：攻菌后24h,與IV組比較,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組小鼠血清中的TNF-α極顯著升高(P0.01);Ⅱ、Ⅲ組血清中的TNF-αa極顯著高于Ⅰ組(P0.01)：Ⅲ組血清中的TNF-α極顯著高于Ⅱ組(P0.01)。Ⅱ組乳腺出現(xiàn)廣泛的充血,并伴有出血,乳腺局部紅腫、變硬,有淡黃色的炎性滲出物和凝乳塊：腺泡腔和小葉間質(zhì)內(nèi)嗜中性粒細胞顯著增多,上皮細胞脫落、壞死,腺泡結(jié)構(gòu)紊亂與周圍組織界限不清,間質(zhì)充血、出血,呈典型的乳房炎癥狀：Ⅰ組乳腺病變較Ⅱ組輕微,Ⅲ組乳腺病變較Ⅱ組更嚴(yán)重：Ⅳ組乳腺未見有異常病變。(2)rhG-CSF對小鼠大腸桿菌性乳房炎的保護效果：Ⅲ組小鼠精神不振,食欲輕微降低,被毛稍蓬亂,乳頭發(fā)紅：乳腺充血,稍腫脹；腺泡腔及間質(zhì)有炎性細胞浸潤：0h、24h、72h、120h,Ⅲ組小鼠WBC及GRA均極顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P0.01),72h-120h有2只小鼠臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)。ⅣV組小鼠精神正常,乳房紅、腫、痛等臨床癥狀表現(xiàn)較微弱;乳腺輕微充血,無明顯腫脹：乳腺組織結(jié)構(gòu)清晰,上皮細胞排列整齊；0h、24h、72h、120h,ⅣV組小鼠WBC及GRA均極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組(P0.01)；24h-120h,Ⅳ組有3只小鼠臨床癥狀逐漸消失。V組小鼠精神食欲良好,乳腺組織結(jié)構(gòu)清晰,上皮細胞排列整齊,部分腺泡充滿乳汁,無明顯的乳房炎引起的組織損傷；0h、24h、72h、120h,V組小鼠的WBC及GRA均極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組(P0.01)：至120h,該組小鼠臨床癥狀基本消失。結(jié)論：(1)泌乳8-10天的初產(chǎn)昆明小鼠,第四對乳頭灌注1.5×107CFU/mL大腸桿菌25ul/側(cè),可成功構(gòu)建小鼠乳房炎模型。(2)20μg/kg、30μg/kg體重給予小鼠皮下注射0.1mLrhG-CSF對小鼠急性感染大腸桿菌性乳房炎均具有顯著的預(yù)防效果。
【關(guān)鍵詞】：粒細胞集落刺激因子 大腸桿菌 小鼠 乳房炎 預(yù)防效果
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 主要縮略詞9-14
• 第一章 文獻綜述14-22
• 前言14-15
• 1 圍產(chǎn)期奶牛乳房炎的發(fā)生特點與防治15-19
• 1.1 圍產(chǎn)期奶牛的生理特點15
• 1.2 圍產(chǎn)期奶牛乳房炎的發(fā)生特點15-16
• 1.3 圍產(chǎn)期奶牛乳房炎的臨床癥狀16
• 1.4 大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌是引起奶牛乳房炎的主要細菌16-18
• 1.4.1 大腸桿菌17
• 1.4.2 葡萄球菌17-18
• 1.4.3 鏈球菌18
• 1.5 防治奶牛乳房炎的主要藥物18-19
• 1.5.1 抗生素18
• 1.5.2 中藥18
• 1.5.3 細胞因子18-19
• 1.5.4 疫苗19
• 1.5.5 其他19
• 2 G-CSF的生物學(xué)功能及應(yīng)用研究19-20
• 2.1 G-CSF的生物學(xué)功能19-20
• 2.2 G-CSF的臨床應(yīng)用20
• 2.2.1 配合抗生素治療嚴(yán)重感染性疾病20
• 2.2.2 其他作用20
• 2.3 在獸醫(yī)臨床上的研究20
• 3 研究目的及意義20-22
• 第二章 昆明小鼠大腸桿菌性乳房炎模型的建立22-36
• 1 材料與方法22-25
• 1.1 主要儀器設(shè)備22
• 1.2 試驗菌株和主要試劑22-23
• 1.3 試驗動物23
• 1.4 大腸桿菌的培養(yǎng)及計數(shù)23
• 1.5 試驗動物處理23-24
• 1.6 檢測指標(biāo)及方法24-25
• 1.6.1 臨床觀察24
• 1.6.2 乳房炎造模成功的臨床判定標(biāo)準(zhǔn)24
• 1.6.3 血液采集及血清腫瘤壞死因子(TNF-α)檢測24
• 1.6.4 病理組織學(xué)觀察24-25
• 1.6.5 乳腺組織中大腸桿菌計數(shù)25
• 1.7 數(shù)據(jù)處理25
• 2 結(jié)果與分析25-32
• 2.1 大腸桿菌乳房炎的臨床癥狀及評分25-27
• 2.2 病理組織學(xué)觀察27-31
• 2.2.1 眼觀病變27-28
• 2.2.2 組織學(xué)觀察28-31
• 2.3 乳腺組織中大腸桿菌計數(shù)31
• 2.4 血清腫瘤壞死因子(TNF-α)檢測31-32
• 3 討論32-34
• 3.1 成功構(gòu)建了昆明小鼠大腸桿菌乳房炎模型32-33
• 3.2 小鼠乳房炎造模的病原選擇33
• 3.3 小鼠乳房炎造模的方法與評價標(biāo)準(zhǔn)33-34
• 3.4 大腸桿菌乳房炎小鼠的血清TNF-α變化34
• 3.5 大腸桿菌乳房炎小鼠乳腺組織的病理學(xué)變化34
• 4 小結(jié)34-36
• 第三章 rhG-CSF對昆明小鼠大腸桿菌乳房炎的預(yù)防效果試驗36-52
• 1 試驗材料與方法36-38
• 1.1 主要儀器設(shè)備36
• 1.2 主要材料與試劑36
• 1.3 試驗動物36
• 1.4 試驗動物的分組及處理36-37
• 1.5 觀察指標(biāo)37-38
• 1.5.1 臨床評分37
• 1.5.2 血液生理指標(biāo)檢測37
• 1.5.3 病理組織學(xué)觀察37
• 1.5.4 乳腺組織中大腸桿菌計數(shù)37-38
• 1.5.5 血清腫瘤壞死因子(TNF-α)檢測38
• 1.6 數(shù)據(jù)處理38
• 2 結(jié)果38-49
• 2.1 rhG-CSF對小鼠大腸桿菌乳房炎臨床癥狀的預(yù)防效果38
• 2.2 rhG-CSF對小鼠乳房炎發(fā)生率統(tǒng)計38-39
• 2.3 rhG-CSF對乳房灌注大腸桿菌小鼠白細胞及白細胞分類的影響39-41
• 2.4 rhG-CSF對乳房灌注大腸桿菌小鼠紅細胞及血紅蛋白等的影響41
• 2.5 rhG-CSF對乳房灌注大腸桿菌小鼠血小板等的影響41-46
• 2.6 病理組織學(xué)觀察46-48
• 2.6.1 眼觀病變46
• 2.6.2 組織學(xué)觀察46-48
• 2.7 乳腺組織中大腸桿菌計數(shù)48
• 2.8 rhG-CSF對乳房灌注大腸桿菌小鼠血清TNF-α的影響48-49
• 3 討論49-51
• 3.1 rhG-CSF對小鼠乳房炎臨床癥狀的影響49-50
• 3.2 rhG-CSF對小鼠乳房炎發(fā)生率的影響50
• 3.3 rhG-CSF對乳房炎小鼠血液生理指標(biāo)的影響50-51
• 3.4 rhG-CSF對乳房炎小鼠TNF-α的影響51
• 3.5 rhG-CSF對小鼠乳腺感染大腸桿菌計數(shù)的影響51
• 4 小結(jié)51-52
• 全文總結(jié)52-53
• 參考文獻53-59
• 致謝59

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