牛奶體細(xì)胞數(shù)(SCC)是一個(gè)非常重要的指標(biāo),它不僅可以用來(lái)衡量牛奶的衛(wèi)生與質(zhì)量,并且在臨床上可以診斷奶牛是否患有隱性乳房炎以及奶牛乳房的健康狀況。當(dāng)奶�；加须[性乳房炎時(shí),便會(huì)造成乳中SCC升高,進(jìn)而導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)下降等一系列問(wèn)題,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大損失。最近,農(nóng)業(yè)部在《飼料原料目錄》中收錄了115種藥食同源的中藥至可飼用天然植物。這些可飼用天然植物具有傳統(tǒng)中草藥綠色、毒副作用低等特點(diǎn),利用其保健功能來(lái)調(diào)節(jié)奶牛的乳房機(jī)能,降低牛乳中SCC,改善乳品質(zhì),同時(shí)還避免了新獸藥在申報(bào)過(guò)程中費(fèi)用高、周期長(zhǎng)的弊端,這種做法將極大的促進(jìn)奶牛業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。本研究旨在通過(guò)試驗(yàn)研究,為臨床控制、治療奶牛隱性乳房炎,降低牛乳中的SCC,提升乳品質(zhì)提供一個(gè)安全有效的可飼用天然植物組方,同時(shí)對(duì)其抗炎機(jī)制作初步探討,以期為后續(xù)試驗(yàn)提供一定理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)首先從《飼料原料目錄》中選取不同種類的可飼用天然植物,組成4個(gè)備選中藥組方。然后篩選出SCC50萬(wàn)/mL的奶牛乳區(qū),平均分成5組,每組10個(gè)乳區(qū)。試驗(yàn)組每天各在飼料中添加飼喂4種中藥200 g,連續(xù)用藥7 d,各組在開(kāi)始飼喂可飼用天然植物組方的第0,3,5,7 d分別采集各乳區(qū)的乳汁,測(cè)定體細(xì)胞數(shù)和乳成分,分析結(jié)果確定出最佳可飼用天然植物組方。為了確定最佳可飼用天然植物組方的臨床推薦劑量,以及對(duì)奶牛血液以及乳汁指標(biāo)的作用,篩選出SCC50萬(wàn)/mL的奶牛乳區(qū),平均分成4組,每組10個(gè)乳區(qū)。試驗(yàn)組每天各在飼料中添加飼喂不同劑量的最佳中藥組方,連續(xù)用藥7 d,各組在開(kāi)始用藥的第0,3,5,7 d分別采集各乳區(qū)的乳汁,測(cè)定各乳區(qū)的體細(xì)胞數(shù)、乳成分,記錄每個(gè)乳區(qū)的日產(chǎn)奶量,分析結(jié)果確定臨床用藥推薦劑量。采集血液和乳液,分離出血清和乳清,使用微板法測(cè)定血清中AST、ALT,使用微量酶標(biāo)法測(cè)定乳清中ALP、LDH、NAG,使用比色法測(cè)定血清中GSH-Px,使用TBA法測(cè)定血清中MDA,使用WST-1法測(cè)定血清中SOD,使用ELISA法測(cè)定血清、乳清中TNF-α、IL-6。為了研究最佳可飼用天然植物組方降低奶牛SCC的藥理機(jī)制,本論文通過(guò)建立小鼠耳腫脹和足趾腫脹模型進(jìn)行抗炎試驗(yàn),探討了最佳可飼用天然植物組方的抗炎效果。以細(xì)菌脂多糖刺激狀態(tài)良好的RAW264.7細(xì)胞建立細(xì)胞炎癥模型,用不同濃度的最佳可飼用天然植物組方預(yù)處理RAW264.7細(xì)胞4 h,然后使用細(xì)菌脂多糖致炎24 h,使用Griess法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO的含量,使用ELISA法測(cè)定上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的含量。Western-blot法,測(cè)定P65和IκBα以及P-P65和P-IκBα蛋白表達(dá)水平。試驗(yàn)結(jié)果表明,以魚(yú)腥草、黨參、益母草和瓜蔞為主藥組成的組方Ⅲ,效果最佳,可以顯著降低高SCC奶牛乳區(qū)乳中的體細(xì)胞數(shù)(P0.05),提高乳區(qū)日產(chǎn)奶量以及乳中乳成分的含量(P0.05)。臨床推薦劑量為200 g/頭·d;藥理學(xué)試驗(yàn)顯示,最佳可飼用天然植物組方可顯著降低奶牛血清當(dāng)中AST、ALT、MDA、IL-6以及TNF-α的含量(P0.05),提高GSH-PX、SOD含量(P0.05),顯著降低奶牛乳清當(dāng)中ALP、LDH、NAG、IL-6、TNF-α含量(P0.05)。顯著降低由二甲苯導(dǎo)致的小鼠耳腫脹以及10%雞蛋清溶液導(dǎo)致的足趾腫脹的腫脹度、腫脹率、提高腫脹抑制率(P0.05);體外試驗(yàn)表明,當(dāng)最佳可飼用天然植物組方濃度≤6 mg/mL時(shí),對(duì)RAW264.7細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用。5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL的最佳組方提取物,均可極顯著地抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞后NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6含量的升高(P0.01),極顯著降低P65及IκBα的磷酸化水平(P0.01)。并且呈現(xiàn)劑量依賴性。結(jié)論:以魚(yú)腥草、黨參、益母草和瓜蔞為主藥的可飼用天然藥物組方黨參雙草瓜蔞散,可以顯著降低高SCC奶牛乳中的體細(xì)胞數(shù),改善乳品質(zhì),提高產(chǎn)奶量,臨床推薦劑量為200 g/頭·d。該組方可以顯著抑制小鼠急性炎癥導(dǎo)致的腫脹,抑制RAW264.7細(xì)胞釋放NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6。提示其抗炎機(jī)制可能是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路的激活,進(jìn)而降低了促炎因子的分泌量,進(jìn)而表現(xiàn)出抗炎活性。
【學(xué)位單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
1 引言
    1.1 奶牛乳房炎的研究進(jìn)展
        1.1.1 奶牛乳房炎簡(jiǎn)介
        1.1.2 奶牛乳房炎的病因
        1.1.3 奶牛乳房炎的危害
        1.1.4 奶牛乳房炎的預(yù)防和治療
    1.2 中藥防治奶牛乳房炎的作用機(jī)理
        1.2.1 抑菌作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 提高免疫機(jī)能
        1.2.4 補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，提高代謝
    1.3 中藥防治奶牛乳房炎的前景
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 奶牛
        2.1.2 小鼠
        2.1.3 細(xì)胞
        2.1.4 中藥
        2.1.5 主要藥品與試劑
        2.1.6 主要儀器與耗材
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 最佳中藥組方的篩選
        2.2.2 最佳組方臨床推薦劑量的篩選
        2.2.3 最佳組方藥理機(jī)制研究
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果
    3.1 最佳可飼用天然植物組方的篩選結(jié)果
        3.1.1 不同中藥組方對(duì)泌乳奶牛體細(xì)胞數(shù)的影響結(jié)果
        3.1.2 不同中藥組方對(duì)泌乳奶牛乳成分的影響
    3.2 最佳組方臨床推薦劑量的篩選結(jié)果
        3.2.1 不同劑量最佳組方對(duì)泌乳奶牛體細(xì)胞數(shù)的影響
        3.2.2 不同劑量最佳組方對(duì)泌乳奶牛乳成分的影響
        3.2.3 不同劑量最佳組方對(duì)泌乳奶牛產(chǎn)奶量的影響
        3.2.4 最佳組方臨床推薦劑量的確定
    3.3 最佳組方藥理機(jī)制探討結(jié)果
        3.3.1 最佳組方對(duì)奶牛血液和乳液指標(biāo)的影響
        3.3.2 最佳組方對(duì)小鼠體內(nèi)抗炎試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 最佳中藥組方對(duì)體外抗炎的影響
4 討論
    4.1 可飼用天然植物組方對(duì)乳中體細(xì)胞數(shù)的影響
    4.2 可飼用天然植物組方對(duì)乳成分的影響
    4.3 可飼用天然植物組方的抗炎作用
        4.3.1 可飼用天然植物組方的體內(nèi)抗炎效果
        4.3.2 可飼用天然植物組方的體外抗炎效果
    4.4 可飼用天然植物組方對(duì)奶牛理化功能的影響
        4.4.1 可飼用天然植物組方對(duì)奶牛血液指標(biāo)的影響
        4.4.2 可飼用天然植物組方對(duì)奶牛乳汁指標(biāo)的影響
    4.5 可飼用天然植物組方方解
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文情況
作者簡(jiǎn)介
致謝
詳細(xì)摘要

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2877604