食線蟲(chóng)性真菌Duddingtonia flagrans作為家養(yǎng)動(dòng)物寄生線蟲(chóng)病生物防治的候選菌種,得到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注。鑒于此,本研究的目的是在中國(guó)分離D.flagrans,研究當(dāng)?shù)胤蛛x株的生物學(xué)特性和遺傳學(xué)特性;研究分離株的超微結(jié)構(gòu)及該菌與寄生線蟲(chóng)之間的相互作用;研究分離株體外捕食線蟲(chóng)效果和體內(nèi)通過(guò)綿羊消化道后的存活能力。本研究從1532份不同類(lèi)型的樣品中檢出D.flagrans的總頻率為1.70%(26/1532)。其中在牛、羊糞便、糞堆、牧場(chǎng)土壤中檢出真菌,圈舍土壤未檢出。純化后共得到D.flagrans純培養(yǎng)物13株。形態(tài)學(xué)研究表明,分離株能夠產(chǎn)生兩隔或兩隔以上、棍棒形、彎月?tīng)詈汀癡”形等文獻(xiàn)中從未記載的分生孢子,分生孢子梗偶爾多育。分離株的部分18S rRNA和28S rRNA及ITS1–5.8S rRNA–ITS2的基因序列對(duì)比表明,分離株與GenBank中記載的D.flagrans序列相似度為98%–100%;系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)分析,有4個(gè)分離株與其它的7個(gè)D.flagrans分離株分別在一個(gè)亞支上。所試驗(yàn)的3株D.flagrans分離株在11–35℃均可生長(zhǎng),最佳生長(zhǎng)溫度30℃;在pH4–12可生長(zhǎng),pH≤3和pH≥13不生長(zhǎng),最佳生長(zhǎng)pH為7–8。11個(gè)分離株于2%CMA、WA、2%WBA(麩皮浸出液瓊脂培養(yǎng)基)、PDA上的生長(zhǎng)試驗(yàn)表明,除2株外,9株于2%CMA和WA上菌絲徑向生長(zhǎng)快于2%WBA和PDA(p0.05)。通過(guò)掃描電鏡的研究,獲得了D.flagrans的分生孢子及不同發(fā)育階段的厚垣孢子超微結(jié)構(gòu)以及該菌捕食毛圓科線蟲(chóng)L3(感染性幼蟲(chóng))動(dòng)態(tài)學(xué)過(guò)程,L3在添加后6–8 h被捕捉,L3在捕捉后的第6 h被菌絲穿透、捕捉后24 h開(kāi)始被消化、捕捉后48 h被完全消化,同時(shí)在蟲(chóng)體內(nèi)可產(chǎn)生厚垣孢子。10株分離株在體外殺蟲(chóng)試驗(yàn)中對(duì)綿羊糞便中Trichostrongylus colubriformis(蛇形毛圓線蟲(chóng))L3的減少率為57.21–99.83%,對(duì)Haemonchus contortus(捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng))L3的減少率為62.12–99.88%。代表性菌株口服綿羊后12–96 h從糞便中排出孢子,其中飽腹比空腹口服排出時(shí)間滯后24 h;3株分離株口服家兔,2株在口服后4–24 h從糞便中排出孢子,1株(SFG170)在18 h孢子已經(jīng)從糞便中消失。10株菌經(jīng)綿羊口服后表明,在通過(guò)綿羊消化道后均能存活,同時(shí)對(duì)糞便中H.contortus L3的減少率為55.15–98.82%。
【學(xué)位單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S852.66
【部分圖文】：

蟲(chóng)真菌概述線蟲(chóng)真菌的分類(lèi)線蟲(chóng)真菌目前根據(jù)其殺蟲(chóng)機(jī)制的不同可以劃分為四種[5]，即捕食線蟲(chóng)性ematode–trapping fungi）、機(jī)會(huì)性真菌（Opportunistic fungi）、內(nèi)寄生性ndoparasitic fungi）和產(chǎn)毒性真菌（Toxin–producing Fungi）。其中，捕食菌是以形成各種捕食結(jié)構(gòu)為特征，在自然界中廣泛存在。當(dāng)環(huán)境中沒(méi)有的情況下，這些真菌就存在于土壤中，營(yíng)腐生生活或處于休眠狀態(tài)。一有線蟲(chóng)出現(xiàn)，它們就會(huì)通過(guò)產(chǎn)生典型的捕食結(jié)構(gòu)，對(duì)線蟲(chóng)進(jìn)行捕殺。捕真菌的捕食結(jié)構(gòu)主要包括收縮性環(huán)、粘性球、粘性網(wǎng)、粘性菌絲及非收[6]（圖 1–1）。

的形態(tài)學(xué)觀察提出了關(guān)于各種關(guān)于捕食器官進(jìn)化的假說(shuō)（圖1–2）。在這個(gè)假說(shuō)中，捕食器官的進(jìn)化分為 2 個(gè)分枝，其一枝是從有柄的粘性球開(kāi)始，長(zhǎng)出粘性分枝，分枝融合成單個(gè)的粘性網(wǎng)，保留粘性物質(zhì)繼續(xù)進(jìn)化成二維粘性網(wǎng)，最后演化成三維粘性網(wǎng)（Arthrobotrys 屬的特征）。另一枝是從無(wú)柄的粘性球開(kāi)始，長(zhǎng)出粘性分枝，分枝融合后形成簡(jiǎn)單地捕食環(huán)，在此過(guò)程中喪失了粘性物質(zhì)，進(jìn)而演化成粘性球和非收縮性環(huán)的一些種，最后進(jìn)化成具有三個(gè)細(xì)胞的收縮環(huán)的種（Drechserrella 屬的特征）。Dactylellina 屬的種介于以上兩者之間，是上述兩枝進(jìn)化過(guò)程中的中間形態(tài)。圖 1–2 食線蟲(chóng)性真菌捕食結(jié)構(gòu)的進(jìn)化模式圖（引自 Li 等，2005）Figure 1–2 An evolutionary model of the predation structure of the nematophagous fungi (citedfrom Li et al., 2005 )2 食線蟲(chóng)真菌的分離、分布及生態(tài)學(xué)2.1 食線蟲(chóng)真菌棲息地和種的多樣性食線蟲(chóng)真菌為了在自然界中獲得營(yíng)養(yǎng)，絕大部分依靠自然條件中死亡的有機(jī)

圖 1–3 食線蟲(chóng)真菌 Arthrobotrys oligospora 捕食環(huán)形成的模式圖（引自 Yang 等，2011）Figure 1–3 A model for trap formation in Arthrobotrys oligospora (cited from Yang et al., 2011)3.3 細(xì)菌、線蟲(chóng)和食線蟲(chóng)真菌相互作用與食線蟲(chóng)機(jī)制關(guān)于捕食線蟲(chóng)性真菌捕食機(jī)理的研究方面，掃描電鏡觀察顯示，在線蟲(chóng)被真菌捕食器官穿透的位點(diǎn)，常常發(fā)現(xiàn)大量的桿狀細(xì)菌，一些研究將這種桿狀細(xì)菌稱(chēng)為食線蟲(chóng)真菌輔助性細(xì)菌（NHB）[79,80,82,93]。Wang 等[94]報(bào)道當(dāng)線蟲(chóng)被捕捉后，細(xì)菌通過(guò)上調(diào)精氨酸酶的表達(dá)來(lái)增加尿素的產(chǎn)生和釋放；分泌的尿素通過(guò)尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白被附近的捕食線蟲(chóng)性真菌的菌絲吸收，并最終通過(guò)菌絲體脲酶分解成氨，氨反作用于菌絲，促進(jìn)形成捕食結(jié)構(gòu)。同時(shí)，線蟲(chóng)釋放的蛔苷通過(guò)未知蛋白被轉(zhuǎn)運(yùn)到捕食線蟲(chóng)性真菌的菌絲體中，并直接誘導(dǎo)捕食結(jié)構(gòu)的形成。細(xì)菌—尿素和線蟲(chóng)—蛔苷介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)捕食結(jié)構(gòu)的形成起著協(xié)同效應(yīng)，導(dǎo)致線蟲(chóng)最終被捕殺（圖 1–4）。他們認(rèn)為這個(gè)過(guò)程不是簡(jiǎn)單的疊加效應(yīng)，粘性網(wǎng)的數(shù)量是線蟲(chóng)和尿素單獨(dú)作用相加的數(shù)倍以上，說(shuō)明尿素途徑和線蟲(chóng)途徑之間存在協(xié)同效應(yīng)。細(xì)菌面對(duì)線蟲(chóng)的捕食壓力時(shí)，自身分泌的尿素誘導(dǎo)產(chǎn)生的捕食器官數(shù)量不足以支
【參考文獻(xiàn)】

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1 徐春蘭;劉偉;王逢會(huì);王康英;房少新;李禤;王慧;孫龍杰;許強(qiáng);王波波;黎曉珊;陳明月;易林鑫;蔡葵蒸;;溫度和pH對(duì)捕食性線蟲(chóng)分離株-長(zhǎng)孢隔指孢菌生長(zhǎng)的影響及生物學(xué)特性的觀察[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2015年06期

2 王逢會(huì);王波波;徐春蘭;蔡葵蒸;;溫度和pH對(duì)捕食性線蟲(chóng)真菌分離株少孢節(jié)叢孢菌生長(zhǎng)的影響及生物學(xué)特性觀察[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2015年02期

3 王琳;王治才;瑪利亞木;;嗜線蟲(chóng)真菌Duddingtonia flagrans培養(yǎng)基的篩選[J];新疆畜牧業(yè);2006年05期

4 繆作清,劉杏忠;捕食線蟲(chóng)真菌在北京地區(qū)果園中的季節(jié)性分布(英文)[J];菌物系統(tǒng);2003年01期

5 秦澤榮,繆作清,李美子,劉杏忠,王金洛;新鮮牛糞便中食線蟲(chóng)真菌的分離和鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2001年01期

6 劉杏忠;裘維蕃;繆作清;;捕食線蟲(chóng)真菌在我國(guó)的分布[J];真菌學(xué)報(bào);1993年03期

本文編號(hào)：2872399