發(fā)布時間：2020-11-03 07:31

　　 單核細(xì)胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes;L.monocytogenes),簡稱單增李斯特菌,是六種常見李斯特菌中感染性最強(qiáng)的一種,是臨床上常見李斯特菌病的主要病原體,為兼性厭氧的機(jī)會致病菌,有較強(qiáng)的運(yùn)動能力。單增李斯特菌廣泛存在于自然環(huán)境當(dāng)中,常見于人類及動物的糞便、不同地區(qū)的土壤、水生環(huán)境以及各類植物和動物來源的食物(如奶酪、牛奶、雞蛋、香腸、蔬菜等),可機(jī)會性的感染老人,孕婦,小孩等免疫力低下人群,相關(guān)感染性疾病具有較高的死亡率。隨著抗生素不斷地濫用和亂用,細(xì)菌耐藥性逐漸成為了臨床感染疾病治療中的重要難題,單增李斯特菌作為常見的革蘭氏陽性致病菌也被視為人類和動物健康的重要威脅。近年來,隨著抗毒力策略的不斷發(fā)展,細(xì)菌毒力因子在侵襲過程中作用越來越受到人們的關(guān)注。同其它革蘭氏陽性菌一樣,單增李斯特菌在侵襲過程中會表達(dá)多種毒力因子用于菌體的生存和增殖。當(dāng)菌體被宿主細(xì)胞吞噬后,會被困于細(xì)胞吞噬泡中最終被溶酶體降解,而此時單增李斯特菌會大量表達(dá)適應(yīng)吞噬泡中酸性環(huán)境的李斯特菌溶血素(listeriolysin O;LLO),用于協(xié)助菌體逃逸至細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)而完成增殖過程。已有研究表明,當(dāng)單增李斯特菌敲除LLO編碼基因后,菌體不再具備從吞噬泡中逃逸的能力,且會幾乎完全喪失對模型動物的致病能力。因此LLO是單增李斯特菌感染疾病的潛在治療靶點(diǎn)。本研究通過溶血實(shí)驗(yàn)、生長曲線和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃芩提取物在較低濃度范圍內(nèi)(8-64μg/ml)即可顯著抑制培養(yǎng)物上清的溶血活性,但藥物在這一濃度范圍不影響細(xì)菌生長,也不影響細(xì)菌成孔毒素LLO的表達(dá),而是直接中和LLO介導(dǎo)的成孔活性。體外細(xì)胞感染試驗(yàn)中,黃芩提取物處理下,降低細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌增殖,細(xì)菌介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用也顯著下降。體內(nèi)動物感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃芩提取物治療后可降低靶組織內(nèi)細(xì)菌菌落定植,對細(xì)菌感染所致的動物死亡具有一定的抑制作用。黃芩具有抗腫瘤,殺菌,抗炎和清除自由基等生物學(xué)活性,是我國中醫(yī)藥寶庫中最常用的藥物之一。本研究為黃芩提取物抑制LLO溶血活性的機(jī)制研究提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為單增李斯特菌感染疾病的治療研究提供了重要的理論基礎(chǔ)和物質(zhì)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【部分圖文】：

圖 1.1 黃芩提取物對細(xì)菌培養(yǎng)物上清液溶血活性的影響 The inhibition of Scutellaria baicalensis extract on the hembacterial supernatant物對單增李斯特菌的抑菌作用黃芩提取物是否通過抑制單增李斯特菌的生長從而影響，我們對黃芩提取物的最小抑菌濃度進(jìn)行了測定，并繪制。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，黃芩提取物的 MIC 數(shù)值約為 8-64 μg/ml）對單增李斯特菌的生長并沒有顯著的影響（，黃芩提取物對單增李斯特菌并沒有顯著的殺菌活性，且芩提取物對單增李斯特菌的生長幾乎沒有影響，因此可以液上清溶血活性下降的因素。

圖 1.2 黃芩提取物處理下單增李斯特菌生長曲線Fig.1.2 The grown-curve of L.monocytogenes in the presence of varioconcentrations of Scutellaria baicalensis extract提取物對培養(yǎng)液上清中 LLO 表達(dá)的影響驗(yàn)證黃芩提取物對 LLO 表達(dá)的影響，我們隨后進(jìn)行了蛋白免疫印中我們將與不同濃度的黃芩提取物（8-64 μg/ml）孵育后的單增李上清進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳、電轉(zhuǎn)后孵育 LLO 的特異性抗體。從實(shí)，不同濃度的黃芩提取物與單增李斯特菌共同孵育后，培養(yǎng)液上清并沒有受到顯著的影響（見圖 1.3）。既在測試濃度內(nèi)的溶血活性黃芩提取物抑制單增李斯特菌分泌 LLO 造成。

.2 黃芩提取物處理下單增李斯特菌生長own-curve of L.monocytogenes in the presentrations of Scutellaria baicalensis extrac養(yǎng)液上清中 LLO 表達(dá)的影響物對 LLO 表達(dá)的影響，我們隨后進(jìn)行同濃度的黃芩提取物（8-64 μg/ml）孵S-PAGE 電泳、電轉(zhuǎn)后孵育 LLO 的特異黃芩提取物與單增李斯特菌共同孵育后著的影響（見圖 1.3）。既在測試濃度內(nèi)制單增李斯特菌分泌 LLO 造成。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2868281