本試驗(yàn)旨在研究?jī)?nèi)毒素(LPS)對(duì)奶牛乳腺組織免疫狀態(tài)及乳脂肪和乳蛋白合成的影響以及維生素E、丙酮酸乙酯和谷氨酰胺緩解內(nèi)毒素作用的效果,為減少內(nèi)毒素對(duì)乳腺泌乳性能的影響提供試驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)一：以泌乳荷斯坦奶牛乳腺組織塊為模型,研究?jī)?nèi)毒素對(duì)奶牛乳腺組織中酪蛋白、甘油三酯、白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、EL-8以及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)合成量及Toll樣受體4(TLR4)、細(xì)胞核因子-κBp65(NF-κBp65)、過(guò)氧化物酶增殖體激活受體γ(PPARγ)、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)以及酪蛋白和脂肪合成酶基因mRNA表達(dá)的影響。生長(zhǎng)培養(yǎng)基中分別添加0、1、10、100、1000 ng/mL的內(nèi)毒素,培養(yǎng)72 h,收集乳腺組織,進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。結(jié)果顯示： (1)1ng/mL內(nèi)毒素極顯著提高奶牛乳腺組織中TNF-α基因的表達(dá)量(P0.01),顯著提高IL-6的基因表達(dá)量(P0.05),極顯著降低了乙酰輔酶A羧化酶A(ACACA)、脂肪酸合酶(FASN)、長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶3(ACSL3)、αs1-酪蛋白(CSN1S1)、8-酪蛋白(CSN2)基因的表達(dá)量(P0.01)。(2) 10 ng/mL內(nèi)毒素顯著提高奶牛乳腺組織中NF-κBp65基因的表達(dá)量(P0.05),極顯著提高奶牛乳腺組織中TNF-α、IL-6、IL-8基因的表達(dá)量(P0.01),對(duì)IL-1β基因表達(dá)量有提高的趨勢(shì)(P0.05),極顯著降低了乳脂肪(ACACA、FASN、ACSL3)、乳蛋白(CSN1S1、CSN2)的基因表達(dá)量(P0.01),顯著降低了κ-酪蛋白(CSN3)的基因表達(dá)量(P0.05)。(3) 100 ng/mL和1000ng/mL的內(nèi)毒素與10ng/mL的內(nèi)毒素差異不顯著(P0.05)。(4)1ng/mL的內(nèi)毒素顯著提高了乳腺組織中IL-1β的合成(P0.05),對(duì)IL-6、IL-8、TNF-α的合成有提高的趨勢(shì)(P0.05),對(duì)甘油三酯和酪蛋白的合成有降低的趨勢(shì)(P0.05)。(5)10 ng/mL內(nèi)毒素極顯著提高了IL-1β、IL-6、TNF-α的合成(P0.01),顯著提高了IL-8的合成量(P0.05),對(duì)甘油三酯的合成有降低的趨勢(shì)(P0.05),極顯著降低了酪蛋白的合成(P0.01)。(6)100 ng/mL和1000ng/mL的內(nèi)毒素對(duì)IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、甘油三酯以及酪蛋白的作用效果與10ng/mL的內(nèi)毒素差異不顯著(P0.05)。結(jié)果表明：培養(yǎng)基中添加內(nèi)毒素使奶牛乳腺組織中的免疫活化狀態(tài)升高、乳脂肪和乳蛋白合成降低。實(shí)驗(yàn)二：以泌乳荷斯坦奶牛乳腺組織塊為模型,在含10ng/mL內(nèi)毒素的情況下,研究添加維生素E、丙酮酸乙酯、谷氨酰胺對(duì)乳腺組織中酪蛋白、甘油三酯、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α)合成量及TLR4、NF-κBp65、PPARγ、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)以及酪蛋白和脂肪合成酶基因mRNA表達(dá)的影響,并對(duì)這三種物質(zhì)所產(chǎn)生的效果進(jìn)行比較。該試驗(yàn)分為4個(gè)處理(10 ng/mL的LPS；10 ng/mL的LPS+4 IU的生育酚乙酸酯；10 ng/mL的LPS+1 mmol/L的丙酮酸乙酯；10 ng/mL的LPS+1 mmol/L的谷氨酰胺),培養(yǎng)72 h,檢測(cè)上述相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示：(1)維生素E顯著降低了乳腺組織中NF-κBp65、IL-1p、IL-8基因的表達(dá)量(P0.05),對(duì)于IL-6基因的表達(dá)量有降低的趨勢(shì)(P0.05)；谷氨酰胺顯著降低了乳腺組織中TLR4、IL-8基因的表達(dá)量(P0.05)；丙酮酸乙酯顯著降低了IL-1β、IL-8基因表達(dá)量(P0.05),但效果沒(méi)有維生素E好。(2)維生素E顯著提高了乳腺組織中ACACA基因的表達(dá)量(P0.05)；谷氨酰胺顯著提高了FASN基因的表達(dá)量(P0.05)；丙酮酸乙酯有提高ACACA以及FASN基因的表達(dá)量的趨勢(shì)(P0.05),極顯著提高了ACSL3基因的表達(dá)量(P0.01)。(3)維生素E極顯著提高了乳腺組織中乳蛋白CSN1S1、CSN2、CSN3基因的表達(dá)量(P0.01)；谷氨酰胺和丙酮酸乙酯極顯著提高了CSN2、CSN3基因的表達(dá)量(P0.01)。(4)維生素E對(duì)乳腺組織中IL-1β的合成有降低的趨勢(shì)(P0.05),顯著降低IL-6的合成(P0.05),極顯著降低IL-8的合成(P0.01),極顯著提高酪蛋白的合成(P0.01)；谷氨酰胺極顯著降低IL-8的合成(P0.01),極顯著提高酪蛋白的合成(P0.01)；丙酮酸乙酯有降低IL-1p、TNF-α合成的趨勢(shì)(P0.05),極顯著提高甘油三酯的合成(P0.01),對(duì)酪蛋白的合成有提高的趨勢(shì)(P0.05)。結(jié)果表明：在含LPS的培養(yǎng)基中添加維生素E、谷氨酰胺和丙酮酸乙酯均降低奶牛乳腺組織免疫活化狀態(tài)提高奶牛乳腺組織中乳脂肪乳蛋白的合成,且維生素E的效果好于谷氨酰胺和丙酮酸乙酯。
【學(xué)位單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S858.23
【部分圖文】：

乳脂肪和亂蛋白合成量的影響??７．１．１不同濃度ＬＰＳ對(duì)乳腺組織中乳脂肪和亂蛋白合成量的影響??隨ＬＰＳ濃度增加，乳腺組織中甘油三酯的合成量降低（圖１），但不同濃度（ｌＯｎｇ／ｍＬ、??１００?ｎｇ／ｍＬ和１０００?ｎｇ／ｍＬ）的ＬＰＳ處理組之間奶牛乳腺組織中甘油三酷合成量的差異不顯??著（？＞０．０５）。奶牛乳腺組織中酪蛋白合成量也隨著ＬＰＳ濃度的增加而減少（圖２）；當(dāng)??ＬＰＳ濃度達(dá)到ｌＯｎｇ／ｍｌ后，乳腺組織中酪蛋白合成量極顯著降低（ＰＯ．Ｏｌ），但不同濃度??（ｌＯｎｇ／ｍＫ?１００?ｎｇ／ｍｌ和ｌＯＯＯｎｇ／ｍｌ）?ＬＰＳ處理組之間酷蛋白合成量差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。??甘?１＂？］?；??智個(gè)丁?ＡＢ??＿?由ｄ■丄丄??合叫??成?＿Ｂ??」兩．??重??ｏｑＪ＿＿＾＿＿！??Ｏｎｇ／ｍｉ?Ｉｎｇ／ｍｌ?１０ｎｇ／ｍｌ?ｌＯＯｎｇ／ｍｌ?ｌＯＯＯｎｇ／ｍｌ??內(nèi)毒素??圖１不同濃度內(nèi)毒素對(duì)奶牛？Ｌ腺組織中乳脂肪合成量的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＬＰＳ?（ｎｇ／ｍＬ）?ｏｎ?ｔｈｅ?ｆａｔｔｙ?ａｃｉｄ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｉｎ?ｍａｍｍａｒｙ?ｏｆ?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗｓ??注：大寫字母沒(méi)有相同者的數(shù)值之間差異極顯著

７．１．２不同濃度ＬＰＳ對(duì)乳腺組織中乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響??與無(wú)ＬＰＳ的對(duì)照組比較，不同濃度的ＬＰＳ均極顯著降低奶牛乳腺組織中乳脂肪合成相??關(guān)基因的表達(dá)量（Ｐ＜０．０１）（圖３）。??Ｕ?Ａ?＊?ｌｉ－??ｈ?ｒ｜ｉ?ｂ?■?Ｉｓ?ｉｌ?Ｔ??丨：Ｗ幢??、Ｉ；?．?，?．１１?。，?＿＿＿＿＿?。，＿＿＿＿＿??°?ｔｍ＾ｌ?１ｔｉ＾?＼０＾?ｌＯｏｌｇＭＩＯＯｏｌＨｌＭ?＿?—?ｌＯＯｉｓｌｍｌｌＯＯＯｎｇＷ?＿?１ｎ？ｔｏｌ?ｌＯｎｊＷ?ｌＯＯｎｇｔａｌ?ｌＯＯＯｎｇＷ??內(nèi)毒素?內(nèi)毒素?內(nèi)毒素??圖３不同濃度內(nèi)毒素對(duì)奶牛乳腺組織中乳脂肪合成相關(guān)基因ｍＲＮＡ表達(dá)量的影響??Ｆｉｇｕｒｅ?３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＬＰＳ?（ｎｇ／ｍＬ）?ｏｎ?ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆａｔｔｙ?ａｃｉｄ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｇｅｎｅ?ｉｎ??ｍａｍｍａｒｙ?ｔｉｓｓｕｅ?ｏｆ?ｄａｉｒｙ?ｃｏｗｓ??注：ＡＣＡＣＡ＝乙酸輔酶Ａ幾化酶Ａ，?ＦＡＳＮ＝脂肪酸合酵，ＡＣＳＵ＝長(zhǎng)鏈脂酷輔藤Ａ合成酸３；大寫字母沒(méi)有相同者的數(shù)值之間??差異極顯著，？Ｐ＜０．０１。??７．１．３不同濃度ＬＰＳ對(duì)奶牛乳腺組織中乳蛋白相關(guān)基因表達(dá)量的影響??由圖４可知，ＬＰＳ極顯著降低奶牛乳腺組織中乳蛋白（ＣＳＮ１Ｓ１、ＣＳＮ２）基因的表達(dá)??量（ＰＣＯ．ＯＩ）；低濃度（Ｉｎｇ／ｍＤＬＰＳ對(duì)ｉｃ－賂蛋白（ＣＳＮ３）基因的表達(dá)量影響不顯著（／？＞０．０５）

差異極顯著，？Ｐ＜０．０１。??７．１．３不同濃度ＬＰＳ對(duì)奶牛乳腺組織中乳蛋白相關(guān)基因表達(dá)量的影響??由圖４可知，ＬＰＳ極顯著降低奶牛乳腺組織中乳蛋白（ＣＳＮ１Ｓ１、ＣＳＮ２）基因的表達(dá)??量（ＰＣＯ．ＯＩ）；低濃度（Ｉｎｇ／ｍＤＬＰＳ對(duì)ｉｃ－賂蛋白（ＣＳＮ３）基因的表達(dá)量影響不顯著（／？＞０．０５），??而其他濃度（１０?ｎｇ／ｍＬ、ｌＯＯｎｇ／ｍＬ．?ｌＯＯＯｎｇ／ｍＬ）的ＬＰＳ顯著（尸＜０．０１）降低ＣＳＮ３基因的表??達(dá)量。??７．２不同濃度ＬＰＳ對(duì)乳腺組織中細(xì)胞因子基因表達(dá)和細(xì)胞因子生成量的影響??７．２．１不同濃度ＬＰＳ對(duì)乳腺組織中細(xì)胞因子產(chǎn)生量的影響??由表３可見(jiàn)，ＬＰＳ使乳腺組織中ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６、１Ｌ－８、ＴＮＦ－ａ的數(shù)量增加。當(dāng)ＬＰＳ濃度??超過(guò)１０?ｎｇ／ｍＬ后，各細(xì)胞因子的產(chǎn)生量一般不再顯著增加（Ｐ＞０．０５）。??７．２．２不同濃度ＬＰＳ對(duì)乳腺組織中細(xì)胞因子基因表達(dá)量的影響??總的看來(lái)，ＬＰＳ使奶牛乳腺組織中相關(guān)細(xì)胞因子（ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６、ＩＬ－８）基因的??表達(dá)量增加（圖５）。當(dāng)ＬＰＳ濃度超過(guò)１?ｎｇ／ｍＬ后，奶牛乳腺組織中ＴＮＦ－ａ基因的表達(dá)量??不再顯著增加（ｉ？＞０．０５）；當(dāng)ＬＰＳ濃度超過(guò)１０?ｎｇ／ｍＬ后，ＩＬ－６、ＩＬ－８基因的表達(dá)量不再顯??著增加（ｉ＾
【參考文獻(xiàn)】

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1 王立志;熱應(yīng)激對(duì)奶牛、奶山羊體內(nèi)內(nèi)毒素含量的影響及緩解熱應(yīng)激的營(yíng)養(yǎng)技術(shù)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 張養(yǎng)東;脂多糖對(duì)泌乳奶牛乳脂肪和乳蛋白影響及其機(jī)理研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2858313