副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)屬于危害較大的細(xì)菌性傳染病之一,能夠?qū)е仑i全身性的炎癥反應(yīng),給養(yǎng)豬業(yè)造成不可逆轉(zhuǎn)的經(jīng)濟(jì)損失。HPS還常常與其它病毒、細(xì)菌混合感染,從而增加疾病的防控和治療難度。本實(shí)驗(yàn)室從2015年開(kāi)始對(duì)遼寧省各大豬場(chǎng)的副豬嗜血桿菌病進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPS是引起仔豬發(fā)病和死亡的重要因素之一,尤其在秋冬季節(jié)該病更是高發(fā)。對(duì)HPS血清型流行情況調(diào)查發(fā)現(xiàn)血清4、9、13型屬于常見(jiàn)的血清型。為了能夠深入了解HPS遼寧株的致病機(jī)制以及有效地防控該病,本研究將實(shí)驗(yàn)室保存的菌株YK1603(營(yíng)口分離株,血清9型,弱毒株),XM1602(新民分離株,血清4型,中毒株),CY1201(朝陽(yáng)分離株,血清13型,強(qiáng)毒株)復(fù)蘇后,采用革蘭氏染色、16SrDNA等方法對(duì)菌株和菌型進(jìn)行了驗(yàn)證;隨后,以YK1603遼寧株作為對(duì)照,對(duì)這三株不同毒力菌株進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析并進(jìn)行驗(yàn)證,將測(cè)序得到的顯著性差異基因進(jìn)行GO富集分析、KEGG通路富集分析,同時(shí)與VFDB數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析。另外,我們又對(duì)文獻(xiàn)中報(bào)道的,但未在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中檢測(cè)到的毒力相關(guān)基因進(jìn)行了普通PCR鑒定,希望以此為HPS的致病機(jī)理以及篩選疫苗開(kāi)發(fā)的靶基因提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。試驗(yàn)所得主要結(jié)論如下:1.轉(zhuǎn)錄組測(cè)序后共檢測(cè)了2107個(gè)基因,YK1603與CY1201比較后顯著性差異基因共有195個(gè),其中71個(gè)基因上調(diào),124個(gè)基因下調(diào)。YK1603與XM1602比較后的顯著性差異基因共有705個(gè),上調(diào)基因415個(gè),下調(diào)基因290個(gè),其余基因表達(dá)差異不顯著。2.GO功能富集分析顯示,YK1603與CY1201比較后差異基因富集在15個(gè)功能類別中;YK1603與XM1602比較后差異基因富集在27個(gè)功能類別中;提示這些功能富集可能與菌株產(chǎn)生的毒力相關(guān)。3.在KEGG pathway富集分析中,YK1603與CY1201的差異基因富集在34條通路中,其中有7條通路為顯著性富集;而YK1603與XM1602的差異基因富集在64條通路中,其中有1條通路為顯著性富集。4.將YK1603與CY1201、YK1603與XM1602比較的差異基因與VFDB數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后發(fā)現(xiàn),YK1603與CY1201的差異基因有6個(gè)比對(duì)成功,其中4個(gè)基因上調(diào)。2個(gè)基因下調(diào);YK1603與XM1602的差異基因有18個(gè)比對(duì)成功,其中11個(gè)基因上調(diào),7個(gè)基因下調(diào)。推測(cè)這些基因可能影響菌株的毒力,是后續(xù)研究的重點(diǎn)。5.通過(guò)普通PCR鑒定了30個(gè)毒力相關(guān)基因,發(fā)現(xiàn)三種不同毒力的HPS共有基因?yàn)?3個(gè)。此外,不同毒力菌株包含的毒力相關(guān)基因有所差異,推測(cè)這些差異基因是導(dǎo)致菌株致病力不同的原因之一。
【學(xué)位單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

圖 1 復(fù)蘇菌株在 TSA 培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig 1 The colony characteristics of theresuscitation strain on the TSA medium圖 2 復(fù)蘇菌株革蘭氏染色鏡檢Fig 2 Gram stain microscopic ex-amination of resuscitation strain.2 復(fù)蘇菌 DNA 的提取結(jié)果提取出來(lái)的細(xì)菌 DNA 經(jīng) 1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，結(jié)果表明 DNA 的提取質(zhì)，可以作為 PCR 的模板 DNA，三株菌株提取的 DNA 基因組如下圖 3。

圖 1 復(fù)蘇菌株在 TSA 培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig 1 The colony characteristics of theresuscitation strain on the TSA medium圖 2 復(fù)蘇菌株革蘭氏染色鏡檢Fig 2 Gram stain microscopic ex-amination of resuscitation strain.2 復(fù)蘇菌 DNA 的提取結(jié)果提取出來(lái)的細(xì)菌 DNA 經(jīng) 1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，結(jié)果表明 DNA 的提取質(zhì)，可以作為 PCR 的模板 DNA，三株菌株提取的 DNA 基因組如下圖 3。

TSA 培養(yǎng)基上的形態(tài)haracteristics of theon the TSA medium圖 2 復(fù)蘇菌Fig 2 Gram stamination of 結(jié)果A 經(jīng) 1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，結(jié)模板 DNA，三株菌株提取的 DNA 基
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 曾澤;何歡;岳華;湯承;張斌;;副豬嗜血桿菌lgtF基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2015年11期

2 郭伶;劉孝剛;;遼寧地區(qū)副豬嗜血桿菌血清型的鑒定[J];畜牧與獸醫(yī);2014年03期

3 逯忠新;高鵬程;賀英;儲(chǔ)岳峰;趙萍;趙海燕;馬利青;陸艷;蔡其剛;;青海省部分地區(qū)副豬嗜血桿菌流行病學(xué)研究[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2009年S1期

4 闞靜;李莉;許激揚(yáng);;葉酸的生物合成及其代謝工程研究進(jìn)展[J];中國(guó)生化藥物雜志;2009年04期

本文編號(hào)：2851666