microRNAs是一類短的,高度保守的非編碼RNA,可調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。MiR-3031作為一個(gè)功能性miRNA,參與調(diào)節(jié)奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳等多種重要的生物學(xué)過(guò)程。本試驗(yàn)旨在研究POU2F3和miR-3031在奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中的靶向關(guān)系及其功能,為奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳提供理論依據(jù)。通過(guò)RT-qPCR,Western blot和構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告載體驗(yàn)證miR-3031與POU2F3的靶向調(diào)節(jié)作用。生物信息學(xué)分析表明,POU2F3的3'UTR區(qū)包含miR-3031的結(jié)合位點(diǎn)。同時(shí),miR-3031降低了PsiCHECKTM2-POU2F3 3'UTR-wt的雙熒光素酶活性。RT-qPCR和Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組NC相比,miR-3031 mimics顯著降低POU2F3的mRNA和蛋白水平的表達(dá);結(jié)果表明POU2F3是miR-3031的靶基因。轉(zhuǎn)染miR-3031 24h、48h后CCK8檢測(cè)miR-3031對(duì)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞活力的影響。結(jié)果顯示,miR-3031 mimic顯著提高奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的活力。轉(zhuǎn)染siPOU2F3 24h后EDU檢測(cè)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖的情況,結(jié)果顯示,干擾POU2F3顯著促進(jìn)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的增殖。將siPOU2F3和si-NC轉(zhuǎn)染到乳腺上皮細(xì)胞中,進(jìn)一步研究POU2F3對(duì)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理。流式結(jié)果表明,siPOU2F3顯著抑制奶山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡。同時(shí),siPOU2F3顯著抑制Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá),上調(diào)Bcl-2/Bax的比率;同時(shí),檢測(cè)AKT和mTOR的磷酸化水平。結(jié)果表明,siPOU2F3顯著上調(diào)了AKT、mTOR的磷酸化水平和PTEN的蛋白水平以及顯著下調(diào)PI3K蛋白的表達(dá)。綜上所述,miR-3031靶向POU2F3通過(guò)AKT/mTOR信號(hào)通路促進(jìn)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖,抑制凋亡。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S827
【文章目錄】：
ABSTRACT
摘要
Chapter 1 INTRODUCTION
    1.1 Literature Review
    1.2 Research progress on mammary gland development in dairy goats
        1.2.1 Mammary gland development and lactation mechanism
        1.2.2 Breast epithelial cells research progress
    1.3 miRNA and mammary gland development
        1.3.1 Mechanism action of miRNAs
        1.3.2 Identification methods of miRNA target genes
        1.3.3 Regulation of miRNAs on mammary gland development
        1.3.4 Regulation of miRNA on lactation function
    1.4 Research progress of RNA interference technology
    1.5 Research progress of POU2F3 gene
    1.6 Research Content
    1.7 Research Plan
Chapter Ⅱ:Study on the Regulation of POU2F3 Gene by miR-3031
    1.8 Introduction
    1.9 Materials and methods
        1.9.1 Sample Collection
        1.9.2 Main equipment
        1.9.3 Main test reagents
        1.9.4 Prediction of miR-3031 target POU2F3 gene
        1.9.5 Construction of dual luciferase reporter vectors and mutant vectors
        1.9.6 Chemical synthesis of miRNA mimics
        1.9.7 293T cell co-transfection and luciferase activity assay
        1.9.8 Dairy goat mammary epithelial cell transfection
        1.9.9 Real time-qPCR
        1.9.10 Western blotting
        1.9.11 Western blot detection
        1.9.12 Statistical analysis of data
    1.10 Analysis of results
        1.10.1 Bio information prediction of miR-3031 target gene
        1.10.2 Cloning of the POU2F3-3'UTR region
        1.10.3 Construction of dual luciferase reporter vector
        1.10.4 Detection and analysis of luciferase activity
        1.10.5 Effect of miR-3031 on the m RNA level of POU2F3 gene
        1.10.6 Effect of miR-3031 on POU2F3 gene at protein level
        1.10.7 CCK8 method for detecting cell proliferation
        1.10.8 Discussion
    Summary
Chapter Ⅲ:Study on the Regulation of POU2F3 on Mammary Epithelial Cells in Dairy Goats..
    1.11 Introduction
    1.12 Materials and methods
        1.12.1 Collection of samples
        1.12.2 Main equipment
        1.12.3 Main test reagents
        1.12.4 Flow cytometry to detect apoptosis
        1.12.5 Edu incorporation assay
        1.12.6 Statistical Analysis
    1.13 Analysis of results
        1.13.1 POU2F3 Interference Efficiency Detection
        1.13.2 Apoptotic effect of miR-3031 on mammary epithelial cells
        1.13.3 Effect of POU2F3 interference on apoptosis genes in mammary epithelial cells
        1.13.4 Edu incorporation assay
        1.13.5 Effect of POU2F3 interference on P-m TOR/mTOR signaling pathway
        1.13.6 Effect of POU2F3 interference on PTEN synthesis in mammary epithelial cells
    1.14 Discussion
        1.14.1 Effect of POU2f3 on proliferation and apoptosis of mammary epithelial cells in dairy goats
        1.14.2 Regulation of POU2F3 on the lactation component of mammary gland epithelial cells in dairy goats
    Summary
CONCLUSION
INNOVATION
REFERENCE
ARTICLE
ACKNOWLEDGEMENT
APPENDIX
ABBREVIATION
PERSONAL STATEMENT

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 羅軍;;第3屆亞澳奶山羊會(huì)議[J];國(guó)際學(xué)術(shù)動(dòng)態(tài);2017年02期

2 郭永興;;蒲城縣奶山羊發(fā)展現(xiàn)狀存在問題及對(duì)策[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2018年12期

3 馬保國(guó);;保證奶山羊繁殖力的綜合措施[J];山東畜牧獸醫(yī);2019年04期

4 馮凱;;一例奶山羊乳房炎的診治[J];吉林畜牧獸醫(yī);2017年12期

5 林漫亞;;如何調(diào)制奶山羊的飼料[J];江西飼料;2018年01期

6 李昕;黃亞娟;;淺談奶山羊生產(chǎn)存在的問題與建議[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2018年01期

7 吉云高;;奶山羊飼養(yǎng)的注意事項(xiàng)[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2018年03期

8 呂云霞;由皓月;賈萬(wàn)林;;奶山羊如何安全過(guò)冬[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2018年03期

9 王少華;劉榮;張志剛;;內(nèi)蒙古奶山羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀、問題及對(duì)策[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2018年03期

10 竇志;肖喜東;;奶山羊引種與選購(gòu)要點(diǎn)[J];養(yǎng)殖與飼料;2018年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉曉瑞;Circ-8073協(xié)同miR-449/34家族調(diào)控奶山羊容受性子宮內(nèi)膜建立的機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

2 丁武;波爾山羊與關(guān)中奶山羊雜交后代產(chǎn)肉性能及羊肉品質(zhì)研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

3 宋玉潔;人乳鐵蛋白基因定點(diǎn)敲入β乳球蛋白位點(diǎn)基因打靶奶山羊的研制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 宋利文;粗飼料品質(zhì)對(duì)泌乳奶山羊及奶牛乳腺攝取利用脂肪酸的影響及機(jī)制[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張強(qiáng);體細(xì)胞核移植技術(shù)制備轉(zhuǎn)GH基因奶山羊的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 朱紅梅;TALENs介導(dǎo)的人α-乳白蛋白基因定點(diǎn)敲入β-乳球蛋白位點(diǎn)奶山羊生產(chǎn)[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

7 柳海星;轉(zhuǎn)人血清白蛋白延邊奶山羊—綿羊體細(xì)胞克隆胚胎生產(chǎn)體系的優(yōu)化[D];延邊大學(xué);2013年

8 林建;體細(xì)胞核移植制備轉(zhuǎn)IGF-1基因奶山羊的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 王立志;熱應(yīng)激對(duì)奶牛、奶山羊體內(nèi)內(nèi)毒素含量的影響及緩解熱應(yīng)激的營(yíng)養(yǎng)技術(shù)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王會(huì);MiR-26家族對(duì)奶山羊乳腺脂肪酸代謝的調(diào)控作用研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙怡堃;基于全卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的奶山羊視頻語(yǔ)義分割方法研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

2 韓佳臻;基于卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的奶山羊行為識(shí)別方法研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

3 胡永林;奶山羊亞急性瘤胃酸中毒引起肝脾炎癥及指征檢測(cè)與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

4 馬震珠;幾種藥用植物及益生菌對(duì)奶山羊泌乳性能的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

5 SELEH-ZO Emeline Diane Mariam（李若蘭）;MiR-3031通過(guò)靶基因POU2F3調(diào)控奶山羊乳腺發(fā)育的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

6 白翰遜;日糧瘤胃可降解淀粉對(duì)青年奶山羊生長(zhǎng)性能、血液生化及免疫功能的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

7 劉月霞;circRNA3669作為ceRNA調(diào)控奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

8 康懷艷;益生菌發(fā)酵飼料對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)和產(chǎn)奶性能的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

9 尹清艷;煙酰胺對(duì)圍產(chǎn)期奶山羊氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響及初步機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

10 黃江濤;表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）對(duì)奶山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2838382