獲能賦予精子以增強活性的能力,使精子能夠與卵母細胞透明帶(ZP)相互作用,進而完成受精過程。獲能和低溫獲能之間有許多相似之處,有研究表明精子獲能期間蛋白磷酸化是一個非常重要的事件,獲能可能受到泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)的調節(jié),并有研究指出類泛素(SUMO)化與磷酸化和泛素(Ub)化相關聯(lián)。因此,本試驗主要的目的是探究獲能與低溫獲能的豬精子中頂體酶抑制劑(AI)的泛素(Ub)化和類泛素(SUMO)化的修飾水平差異,更加深入地了解豬精子獲能過程中蛋白質的修飾與降解機制,為改善豬精子凍融后的質量提供依據(jù)。本試驗選用杜洛克公豬精液,分為新鮮精液(對照組)、獲能處理、誘導頂體反應處理、低溫獲能處理四個試驗組。通過微生物動(靜)態(tài)圖像檢測系統(tǒng)(CASA)、SDS-PAGE和蛋白免疫印跡(Western blot)等方法進行檢測,每組試驗重復5次。試驗結果表明:1.獲能處理、誘導頂體反應處理、低溫獲能處理三個處理組的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平顯著高于對照組(P0.05);2.獲能處理、誘導頂體反應處理、低溫獲能處理三個處理組精子的AI表達量顯著低于對照組(P0.05);3.獲能和誘導頂體反應處理組精子的泛素化水平顯著高于對照組(P0.05),添加E2抑制劑后的精子均未發(fā)生磷酸化;4.獲能和誘導頂體反應處理組精子的類泛素化水平顯著高于對照組(P0.05),日成上升趨勢,隨著2-D08抑制劑濃度的增加,各組精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平逐漸降低且均低于對照組。本研究得出的結論是:1.公豬精子獲能伴隨著精蛋白酪氨酸磷酸化水平的上升、泛素化與類泛素化修飾的增強,和頂體酶抑制劑的降解;2.體外抑制泛素化或類泛素化阻礙了公豬精子獲能；3.泛素化和類泛素化修飾可能作為公豬精子能的標志物。
【學位單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S814
【部分圖文】：

新蛛粘子?獲能處理?誘導頂休反應處理低溫獲能處理??圖３－２．四種不同處理的豬精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的條帶灰度似??縱坐代表灰度似，橫坐標代表四種不同處理，從左到冇依次為新鮮精液、??獲能處理的精子（３?ｈ）、誘導頂體反應處理的精子（ＣＶ’載體）、低溫獲能處理??的精子（４°Ｃ）。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２．?Ｇｒｅｙ?ｖａｌｕｅｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｉｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｈｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??Ｔｈｅ?ｏｒｄｉｎａｔｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｇｒａｙ?ｖａｌｕｅ，?ｔｈｅ?ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ?ａｘｉｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，?ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｌｉｔ：ｌ：ｒｃｓｈ?ｓｅｍｅｎ，?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（?３?ｈ?），?Ａｃｒｏｓｏｍｃ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃ＇ａ：，ｃａｒｒｉｅｒ）ｔ?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４?Ｃ）？??２７??

?３?４??圖３－１．四種不同處理的豬精子蛋ｆｔ酪氨酸磷酸化水平的免疫印跡??條帶從左到右依次為：１．新鮮精液、２．獲能處理的精子（３?ｈ）、３．誘導頂體??反應處理的精子（Ｃａ２４載體）、４．低溫獲能處理的精子（４°Ｃ）。ＧＡＰＤＨ為內(nèi)參。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??Ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｈｔ：?１?？?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ、２．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（３?ｈ）、３．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃａ２＋ｃａｒｒｉｅｒ）、４．?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４°Ｃ）．?ＧＡＰＤＨ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｎａｌ??ｐａｒａｍｅｔｅｒ．??〇７個??ｏ．６?Ｉ－?ａ??Ｉ?丄??ｍ??Ｉ?＾??？?圍．??新蛛粘子?獲能處理?誘導頂休反應處理低溫獲能處理??圖３－２．四種不同處理的豬精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的條帶灰度似??縱坐代表灰度似

．．．．．「??圖３－４．四種不同處理的豬精子頂體膜完整性的檢測結果。??Ａ．新鮮精液，濃度調整到４Ｘ１０１‘精子／ｍＬ；?獲能精子，通過獲能液處理，誘導??精子發(fā)屮獲能現(xiàn)象；Ｃ．頂體反應精子，通過鈣離子載體，誘導獲能的精子發(fā)屮頂??體反應；Ｉ）．低溫獲能精子，通過低溫處理，誘導精子發(fā)小冷休克現(xiàn)象。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４．?Ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ａｃｒｏｓｏｍａｌ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．??Ａ．?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ?ａｎｄ?ａｄｊｕｓｔ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｔｏ?４?Ｘ?１?（）（）?ｓｐｅｒｍ?／ｍＬ；?Ｂ．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ??ｓｐｅｒｍ，?ｓｐｅｒｍ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｉｌｕｉｄ；?Ｃ．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ，?ｔｈｅ?ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｉｏｎ?ｃａｒｒｉｅｒ；?Ｄ．?Ｃｉ＊ｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉ＼ｃ??ｓｐｅｒｍ，?ｃｏｌｄ?ｓｈｏｃｋ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｌｏｗ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??２９??
【參考文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 胡啟蒙;梅山豬和杜洛克豬精子活力和蛋白磷酸化比較研究[D];上海交通大學;2014年

本文編號：2837712