獲能賦予精子以增強(qiáng)活性的能力,使精子能夠與卵母細(xì)胞透明帶(ZP)相互作用,進(jìn)而完成受精過程。獲能和低溫獲能之間有許多相似之處,有研究表明精子獲能期間蛋白磷酸化是一個(gè)非常重要的事件,獲能可能受到泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)的調(diào)節(jié),并有研究指出類泛素(SUMO)化與磷酸化和泛素(Ub)化相關(guān)聯(lián)。因此,本試驗(yàn)主要的目的是探究獲能與低溫獲能的豬精子中頂體酶抑制劑(AI)的泛素(Ub)化和類泛素(SUMO)化的修飾水平差異,更加深入地了解豬精子獲能過程中蛋白質(zhì)的修飾與降解機(jī)制,為改善豬精子凍融后的質(zhì)量提供依據(jù)。本試驗(yàn)選用杜洛克公豬精液,分為新鮮精液(對(duì)照組)、獲能處理、誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理、低溫獲能處理四個(gè)試驗(yàn)組。通過微生物動(dòng)(靜)態(tài)圖像檢測(cè)系統(tǒng)(CASA)、SDS-PAGE和蛋白免疫印跡(Western blot)等方法進(jìn)行檢測(cè),每組試驗(yàn)重復(fù)5次。試驗(yàn)結(jié)果表明:1.獲能處理、誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理、低溫獲能處理三個(gè)處理組的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平顯著高于對(duì)照組(P0.05);2.獲能處理、誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理、低溫獲能處理三個(gè)處理組精子的AI表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P0.05);3.獲能和誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理組精子的泛素化水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),添加E2抑制劑后的精子均未發(fā)生磷酸化;4.獲能和誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理組精子的類泛素化水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),日成上升趨勢(shì),隨著2-D08抑制劑濃度的增加,各組精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平逐漸降低且均低于對(duì)照組。本研究得出的結(jié)論是:1.公豬精子獲能伴隨著精蛋白酪氨酸磷酸化水平的上升、泛素化與類泛素化修飾的增強(qiáng),和頂體酶抑制劑的降解;2.體外抑制泛素化或類泛素化阻礙了公豬精子獲能；3.泛素化和類泛素化修飾可能作為公豬精子能的標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S814
【部分圖文】：

新蛛粘子?獲能處理?誘導(dǎo)頂休反應(yīng)處理低溫獲能處理??圖３－２．四種不同處理的豬精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的條帶灰度似??縱坐代表灰度似，橫坐標(biāo)代表四種不同處理，從左到冇依次為新鮮精液、??獲能處理的精子（３?ｈ）、誘導(dǎo)頂體反應(yīng)處理的精子（ＣＶ’載體）、低溫獲能處理??的精子（４°Ｃ）。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２．?Ｇｒｅｙ?ｖａｌｕｅｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｉｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｈｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??Ｔｈｅ?ｏｒｄｉｎａｔｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｇｒａｙ?ｖａｌｕｅ，?ｔｈｅ?ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ?ａｘｉｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，?ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｌｉｔ：ｌ：ｒｃｓｈ?ｓｅｍｅｎ，?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（?３?ｈ?），?Ａｃｒｏｓｏｍｃ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃ＇ａ：，ｃａｒｒｉｅｒ）ｔ?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４?Ｃ）？??２７??

?３?４??圖３－１．四種不同處理的豬精子蛋ｆｔ酪氨酸磷酸化水平的免疫印跡??條帶從左到右依次為：１．新鮮精液、２．獲能處理的精子（３?ｈ）、３．誘導(dǎo)頂體??反應(yīng)處理的精子（Ｃａ２４載體）、４．低溫獲能處理的精子（４°Ｃ）。ＧＡＰＤＨ為內(nèi)參。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??Ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｈｔ：?１?？?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ、２．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（３?ｈ）、３．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃａ２＋ｃａｒｒｉｅｒ）、４．?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４°Ｃ）．?ＧＡＰＤＨ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｎａｌ??ｐａｒａｍｅｔｅｒ．??〇７個(gè)??ｏ．６?Ｉ－?ａ??Ｉ?丄??ｍ??Ｉ?＾??？?圍．??新蛛粘子?獲能處理?誘導(dǎo)頂休反應(yīng)處理低溫獲能處理??圖３－２．四種不同處理的豬精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的條帶灰度似??縱坐代表灰度似

．．．．．「??圖３－４．四種不同處理的豬精子頂體膜完整性的檢測(cè)結(jié)果。??Ａ．新鮮精液，濃度調(diào)整到４Ｘ１０１‘精子／ｍＬ；?獲能精子，通過獲能液處理，誘導(dǎo)??精子發(fā)屮獲能現(xiàn)象；Ｃ．頂體反應(yīng)精子，通過鈣離子載體，誘導(dǎo)獲能的精子發(fā)屮頂??體反應(yīng)；Ｉ）．低溫獲能精子，通過低溫處理，誘導(dǎo)精子發(fā)小冷休克現(xiàn)象。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４．?Ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ａｃｒｏｓｏｍａｌ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．??Ａ．?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ?ａｎｄ?ａｄｊｕｓｔ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｔｏ?４?Ｘ?１?（）（）?ｓｐｅｒｍ?／ｍＬ；?Ｂ．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ??ｓｐｅｒｍ，?ｓｐｅｒｍ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｉｌｕｉｄ；?Ｃ．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ，?ｔｈｅ?ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｉｏｎ?ｃａｒｒｉｅｒ；?Ｄ．?Ｃｉ＊ｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉ＼ｃ??ｓｐｅｒｍ，?ｃｏｌｄ?ｓｈｏｃｋ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｌｏｗ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??２９??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 胡啟蒙;梅山豬和杜洛克豬精子活力和蛋白磷酸化比較研究[D];上海交通大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2837712