麝香酮是天然麝香和麝鼠香的主要功能成分,有特殊香味,具有一定的藥理活性,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸和循環(huán)系統(tǒng)也有一定的影響。麝香酮對(duì)動(dòng)物的條件反應(yīng)有影響,且隨劑量而改變。p53基因在機(jī)體組織細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育與分化等過程中起重要作用。其主要生物學(xué)功能是維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定,負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。激活的p53可以抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)化,誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、細(xì)胞凋亡,啟動(dòng)DNA損傷修復(fù)。本研究通過在培養(yǎng)細(xì)胞過程中加入不同劑量的麝香酮進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn),通過熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)p53介導(dǎo)的重要細(xì)胞周期和凋亡通路相關(guān)基因的表達(dá),探討其不同劑量對(duì)這些基因mRNA表達(dá)的影響規(guī)律,從而了解其對(duì)細(xì)胞的影響。本實(shí)驗(yàn)使用HEK293T細(xì)胞,將復(fù)蘇后傳至第3代的細(xì)胞分為9組,分別為添加1μg/ml麝香酮組、5μg/ml麝香酮組、10μg/ml麝香酮組、15μg/ml麝香酮組、20μg/ml麝香酮組、25μg/ml麝香酮組、30μg/ml麝香酮組、0.1%DMSO對(duì)照組和空白對(duì)照組,并記為T1、T5、T10、T15、T20、T25、T30、TDM和TK。每組設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。與0.1%DMSO對(duì)照組比較,統(tǒng)計(jì)分析p53、有關(guān)細(xì)胞周期的p21、RPRM、GTSE1、CCND1、CDK4、CCNE1、CDK2、CCNB1 和 CDK1 基因與有關(guān)細(xì)胞凋亡的 BCL2、BCL2L2、BAX、BID、FAS、CASP3、CASP8、CASP9、TNFRSF10B 和 APAF1 基因的轉(zhuǎn)錄水平的變化。結(jié)果顯示,T1、T5、T10、T15、T20、T25和T30實(shí)驗(yàn)組p53基因的轉(zhuǎn)錄水平分別為TDM對(duì)照組的1.05倍、0.93倍、1.1倍、1.39倍、1.49倍、1.68倍和1.84倍。麝香酮對(duì)細(xì)胞的作用隨著劑量的改變而改變,低濃度(1μg/ml～1 0μg/ml)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)抗凋亡,高濃度(15μg/m1～30μg/ml)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)甚至促使細(xì)胞凋亡。麝香酮對(duì)p53基因介導(dǎo)的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)過程中的重要基因如p21基因、CDK基因、BCL2基因和CASP3基因等的轉(zhuǎn)錄水平造成影響,低濃度下促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的相關(guān)基因表達(dá)上調(diào),高濃度下凋亡相關(guān)基因表達(dá)上調(diào),表達(dá)差異顯著(P0.05)。
【學(xué)位單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S859.7
【部分圖文】：

密相連成單層膜，隨著細(xì)胞增殖數(shù)量增多，細(xì)胞之間常出現(xiàn)所謂拉網(wǎng)現(xiàn)象，即在構(gòu)成上??皮膜狀生長(zhǎng)的細(xì)胞群中一些細(xì)胞常相互分離卷曲，致使上皮細(xì)胞膜中形成網(wǎng)眼狀空洞。??每隔２４小時(shí)對(duì)快速生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行觀察，結(jié)果見圖３－１。??通過觀察細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)，加入ＤＭＳＯ的對(duì)照實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與??趨勢(shì)并無太大差別，在加入不同劑量的麝香酮２４小時(shí)之后，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組較對(duì)??照組生長(zhǎng)趨勢(shì)相差不大，Ｔ１５和Ｔ２０實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組生長(zhǎng)趨勢(shì)稍慢，Ｔ２５與Ｔ３０實(shí)驗(yàn)組??較對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)明顯緩慢；在４８小時(shí)后，各組細(xì)胞繼續(xù)處于生長(zhǎng)的狀態(tài)，數(shù)量??較２４小時(shí)前明顯增多，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組正常快速生長(zhǎng)，表觀觀察的生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)??照組無太大差別，Ｔ１５和Ｔ２０實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)速度稍慢，生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組有一點(diǎn)差距，??Ｔ２５和Ｔ３０實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)較慢，細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相差很大；在細(xì)胞生長(zhǎng)７２小時(shí)后，??Ｔｌ、Ｔ５、Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞幾乎長(zhǎng)滿了整個(gè)培養(yǎng)瓶

密相連成單層膜，隨著細(xì)胞增殖數(shù)量增多，細(xì)胞之間常出現(xiàn)所謂拉網(wǎng)現(xiàn)象，即在構(gòu)成上??皮膜狀生長(zhǎng)的細(xì)胞群中一些細(xì)胞常相互分離卷曲，致使上皮細(xì)胞膜中形成網(wǎng)眼狀空洞。??每隔２４小時(shí)對(duì)快速生長(zhǎng)的細(xì)胞進(jìn)行觀察，結(jié)果見圖３－１。??通過觀察細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)，加入ＤＭＳＯ的對(duì)照實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與??趨勢(shì)并無太大差別，在加入不同劑量的麝香酮２４小時(shí)之后，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組較對(duì)??照組生長(zhǎng)趨勢(shì)相差不大，Ｔ１５和Ｔ２０實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組生長(zhǎng)趨勢(shì)稍慢，Ｔ２５與Ｔ３０實(shí)驗(yàn)組??較對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)明顯緩慢；在４８小時(shí)后，各組細(xì)胞繼續(xù)處于生長(zhǎng)的狀態(tài)，數(shù)量??較２４小時(shí)前明顯增多，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組正�？焖偕L(zhǎng)，表觀觀察的生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)??照組無太大差別，Ｔ１５和Ｔ２０實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)速度稍慢，生長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組有一點(diǎn)差距，??Ｔ２５和Ｔ３０實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)較慢，細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相差很大；在細(xì)胞生長(zhǎng)７２小時(shí)后，??Ｔｌ、Ｔ５、Ｔ１０實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞幾乎長(zhǎng)滿了整個(gè)培養(yǎng)瓶

／ＣＤＫ２—Ｇ１?ａｒｒｅｓｔ；?ｐ５３—＞ＲＰＲＭ?（?Ｒｅｐｒｉｍｏ?）?／ＧＴＳＥ１?（?Ｂ９９?）?＼ＣＣＮＢ１?（?ｃｙｃｌｉｎ－Ｂ?）??／ＣＤＫ１?（Ｃｄｃ２）?—Ｇ２?ａｒｒｅｓｔ。按照２，２．３．２和２．２．３．３的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)其進(jìn)行熒光定量??ＰＣＲ，擴(kuò)增曲線（以ｐ５３為例）見圖３－２，各個(gè)引物特異性良好，熔解曲線見圖３－３。取??３組ＣＴ值得其平均值，通過相對(duì)表達(dá)量差異公式計(jì)算得出每個(gè)基因在不同麝香酮含量??干預(yù)的細(xì)胞中的表達(dá)量。??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ａ??０?１０?２０?３０?ＡＱ??Ｃｙｃｌｅｓ??圖３－２擴(kuò)增曲線??Ｆｉｇ?３－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ??ＩＭＨＭ＊??，－咖?八?￣ｈ?二?ｐ?Ａ?二卜５＇?Ａ??－—?丨?＼?＇?ｒ－—＇￣＇?＼?ｚ?—一?—Ｉ?＼—??ｕ?ｒ．?Ｋ?＞１?ｒ．?Ｍ?■＞?？?ｕ?ｒ．?？?ｔ＊?？５?Ｍ?？?？?；？－＞：？?Ｋ?Ｈ?？?ｗ??Ｉ?ａｗｇｏｕｍｗ．?Ｏｌｗ??ａＭｆＭ?ｉｍａｍ＊??觀籠編函??？ＭＷ＊?ＩＭＰＶ４＊??獲「丨麵??ｌＭｗ＊ａｉａ？？，ＣＭ？Ｍ?Ｔｗｅｅｅｗｗｅ．?＃�？�???ｉｗｒｗｅｗｅ．Ｃｅｍｖｉ?Ｉ？ａ４?
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本文編號(hào)：2836598