發(fā)布時(shí)間：2020-10-02 07:09

　　 為探索黔北麻羊FTO基因多態(tài)性與血清脂代謝相關(guān)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性,以及不同月齡黔北麻羊FTO基因及蛋白的表達(dá)情況與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性,本實(shí)驗(yàn)以103只4月齡~2歲左右黔北麻羊?yàn)檠芯繉?duì)象,采用PCR產(chǎn)物直接測序技術(shù)篩選FTO基因SNPs,并與測定的血清脂代謝相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,同時(shí)測定4月齡、1.5歲、2.5歲黔北麻羊肉質(zhì)性狀,將測定結(jié)果與熒光定量PCR及蛋白免疫印跡技術(shù)檢測的FTO基因及蛋白表達(dá)量相關(guān)性分析,得到與血清脂代謝相關(guān)指標(biāo)特別是與脂肪沉積有顯著效應(yīng)的遺傳標(biāo)記,通過比較不同年齡段黔北麻羊FTO基因及其蛋白的表達(dá)情況及與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性,為揭示FTO基因在黔北麻羊上的遺傳效應(yīng)、調(diào)控脂肪代謝的分子機(jī)制提供參考,同時(shí)為黔北麻羊優(yōu)良肉質(zhì)性狀選育及分子標(biāo)記數(shù)據(jù)庫的建立提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.黔北麻羊FTO基因SNPs的篩選、生物信息學(xué)及遺傳特異性分析采用DNA直接測序方法在黔北麻羊FTO基因第2、3、9外顯子及部分內(nèi)含子中共發(fā)現(xiàn)9個(gè)SNPs。生物信息學(xué)分析表明,FTO蛋白存在1個(gè)低復(fù)雜度區(qū)域、1個(gè)NTD催化結(jié)構(gòu)域、不存在跨膜結(jié)構(gòu)、有7個(gè)Ser、5個(gè)Thr、5個(gè)Tyr可能成為磷酸化位點(diǎn)。第3外顯子的4個(gè)突變位于FTO蛋白的NTD催化結(jié)構(gòu)域內(nèi),其中g(shù).T125417C,g.T125300A位點(diǎn)的變異引起mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。測序結(jié)果顯示,各突變位點(diǎn)均存在三種基因型,遺傳特性分析表明,各突變位點(diǎn)均屬于中度多態(tài)性(0.25PIC0.5)且均未偏離Hardy-Weinberg平衡狀態(tài),能提供合理的遺傳信息。單倍型和連鎖不平衡分析表明,群體存在22種單倍型,其中有7個(gè)發(fā)生頻率較高,g.T125300A,g.C125357T,g.G125405T,gT125417C 4個(gè)位點(diǎn)間r~2值均大于0.33,存在較強(qiáng)的遺傳連鎖不平衡效應(yīng)。g.T426229C,g.C426244G,g.G426347A 3個(gè)位點(diǎn)間r~2分別為1.000、0.738、0.738,表明也存在較強(qiáng)的遺傳連鎖不平衡效應(yīng)。2.FTO基因多態(tài)性與血清脂代謝相關(guān)指標(biāo)關(guān)聯(lián)性分析將黔北麻羊FTO基因篩選出的9個(gè)SNPs與所測血清脂代謝指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,共得到3個(gè)位點(diǎn)與血清脂代謝指標(biāo)有關(guān)聯(lián)。其中,4月齡發(fā)現(xiàn)有2個(gè)位點(diǎn):g.T125300A位點(diǎn)不同基因型血清ADP及LEP含量差異顯著(P0.05),g.G125405T位點(diǎn)不同基因型血清ADP含量差異顯著(P0.05)而LEP含量差異極顯著(P0.01);2歲左右成年黔北麻羊發(fā)現(xiàn)有3個(gè)位點(diǎn):g.T125300A、g.G426347A位點(diǎn)不同基因型血清AST及ALT含量差異極顯著(P0.01),g.G125405T位點(diǎn)不同基因型血清AST及ALT含量差異顯著(P0.05),血清HSL含量在g.G426347A位點(diǎn)不同基因型間差異顯著(P0.05)。將2歲左右成年羊中與血清脂代謝指標(biāo)有顯著關(guān)聯(lián)性的3個(gè)位點(diǎn)合并,進(jìn)行與血清脂代謝指標(biāo)關(guān)聯(lián)性分析,發(fā)現(xiàn)純合子TTGGGG為調(diào)控黔北麻羊脂肪沉積的優(yōu)勢組合基因型。3.黔北麻羊肉質(zhì)性狀研究根據(jù)黔北麻羊生長發(fā)育特點(diǎn),結(jié)合當(dāng)前國內(nèi)外肥羔生產(chǎn)特點(diǎn)及當(dāng)?shù)赝涝琢?xí)慣,選擇4月齡、1.5歲、2.5歲黔北麻羊進(jìn)行肉質(zhì)性狀測定。結(jié)果表明,肌內(nèi)粗脂肪、粗蛋白含量、熟肉率、剪切力及失水率均隨年齡增加而升高,肌內(nèi)粗脂肪含量在3個(gè)年齡段間均差異極顯著(P0.01),2.5歲黔北麻羊粗蛋白含量與1.5歲、4月齡差異極顯著(P0.01)。綜合所測定的各肉質(zhì)指標(biāo),2.5歲黔北麻羊的粗脂肪和粗蛋白含量較1.5歲和4月齡高。4.黔北麻羊FTO基因及重要組織蛋白表達(dá)與肉質(zhì)性狀相關(guān)性分析應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測FTO基因在4月齡、1.5歲及2.5歲黔北麻羊心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胸腺、腹部脂肪、下丘腦及背最長肌組織中的表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)FTO基因在不同月齡黔北麻羊不同組織中具有差異性。其中,4月齡黔北麻羊FTO mRNA的表達(dá)為下丘腦肝臟腹部脂肪心臟腎臟肺脾臟胸腺背最長肌;1.5歲黔北麻羊FTO mRNA的表達(dá)為肝臟脾臟胸腺下丘腦腹部脂肪腎臟肺心臟背最長肌;2.5歲黔北麻羊FTO mRNA的表達(dá)為脾臟胸腺下丘腦腹部脂肪肝臟腎臟心臟肺背最長肌。同時(shí)選擇與機(jī)體脂肪合成、儲(chǔ)存、分解及沉積最重要的三個(gè)組織(肝臟、背最長肌及腹部脂肪),應(yīng)用Werstern blot檢測其FTO蛋白表達(dá),結(jié)果表明,4月齡黔北麻羊FTO蛋白肝臟腹部脂肪背最長肌,1.5歲腹部脂肪肝臟背最長肌;2.5歲肝臟腹部脂肪背最長肌。與肉質(zhì)性狀相關(guān)性分析表明,不同部位FTO mRNA及蛋白表達(dá)量與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性在不同月齡間存在差異,總體趨勢表現(xiàn)為:4月齡及1.5歲FTO mRNA及蛋白表達(dá)量與肉質(zhì)指標(biāo)的相關(guān)性比2.5歲強(qiáng)。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S827.2
【部分圖文】：

貴州大學(xué) 2019 屆碩士研究生學(xué)位論文游基因、蛋白表達(dá)水平（Bartosovic 等，2017；劉鑫骨骼肌細(xì)胞中脂質(zhì)積累分子機(jī)制進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn) m含量呈負(fù)相關(guān)，并且受 AMPK 調(diào)控。增加 mRNAm肪細(xì)胞 3T3-L1 分化，而降低 mRNA m6A 甲基化水 FTO 負(fù)調(diào)節(jié) mRNAm6A 甲基化水平。mRNAm6A相關(guān)基因（C/EBPα和 FAS）以及脂解和氧化相關(guān)基的表達(dá)來抑制骨骼肌脂質(zhì)積累。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn) FT能影響骨骼肌細(xì)胞中的 m6A 甲基化和細(xì)胞脂質(zhì)積 AMPK-FTO-mRNAm6A 甲基化途徑來控制骨骼肌治療肥胖、2 型糖尿病提供新思路（圖 1-1）。

貴州大學(xué) 2019 屆碩士研究生學(xué)位論文位 SNPs 位點(diǎn)連鎖不平衡分析采用在線 SHEsis 軟件（趙憲林等，2018）結(jié)果與分析黔北麻羊基因組 DNA 檢測結(jié)果提取的 DNA 樣本與 Loading Buffer 混合均勻點(diǎn)樣至 1.2%瓊脂糖凝膠進(jìn)電壓 120 V 電泳 25 min，結(jié)果如圖 2-1。由圖可知，實(shí)驗(yàn)所提取的黔北A 樣本條帶明亮單一，且無雜帶，說明所提取 DNA 完整性比較好。所 樣經(jīng)分光光度計(jì)檢測，結(jié)果顯示，所提 DNA 樣品 OD260/280 值均在 1.6-說明所提取 DNA 樣本濃度和純度均屬于正常范圍，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

g.G426347A3 個(gè)位點(diǎn)間 r2分別為 1.000、0.738、0.738，表明也存在較強(qiáng)的遺傳連鎖不平衡效應(yīng)（表 2-4）（圖2-4）。位點(diǎn) 樣本 基因型(基因型頻率) 等位基因 遺傳雜合度 有效等位基因 PIC χ2g.C109453T 103 TT(0.36);CT(0.45);CC(0.19) T(0.61);C(0.39) 0.42 1.91 0.36 2.70g.G109518T 103 GG(0.16);GA(0.46);AA(0.38) A(0.65);G(0.35) 0.47 1.84 0.35 3.71g.T125300A 103 TT(0.51);AT(0.42);AA(0.07) T(0.67);A(0.33) 0.41 1.78 0.34 3.06g.C125357T 103 TT(0.05);TC(0.44);CC(0.51) T(0.31);A(0.69) 0.43 1.74 0.33 4.62g.G125405T 103 TG(0.43);GG(0.51);TT(0.06) T(0.32);G(0.68) 0.51 1.76 0.34 3.77g.T125417C 103 CC(0.07);TC(0.42);TT(0.51) T(0.28);C(0.72) 0.40 1.67 0.32 3.06g.T426229C 103 CC(0.29);TC(0.48);TT(0.23) T(0.48);C(0.52) 0.49 1.95 0.37 1.02g.C426244G 103 CC(0.25);GC(0.50);GG(0.25) C(0.50);G(0.50） 0.50 1.99 0.38 1.92g.G426347A 103 TT(0.28);TC(0.50);CC(0.22) T(0.52);C(0.48) 0.50 1.99 0.37 1.02

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳吉鋒;;“黔北明珠·印象遵義”研學(xué)課程的開發(fā)與實(shí)踐[J];中國教師;2017年09期

2 鄭麗;;黔北仡佬族民俗體育文化發(fā)展現(xiàn)狀與發(fā)展策略探析[J];教育教學(xué)論壇;2017年26期

3 漆文莉;;黔北民俗文化管窺——以黔北仡佬族服飾為例[J];戲劇之家;2016年04期

4 鄭麗;丁勇;;黔北仡佬族民俗體育的傳承與發(fā)展[J];產(chǎn)業(yè)與科技論壇;2015年17期

5 宮偉;;紅色雕塑在旅游中的作用探討——以黔北為例[J];天工;2019年03期

6 賀春雨;;黔北花海春耕圖[J];農(nóng)產(chǎn)品市場周刊;2017年09期

7 王健;;“七個(gè)到位”推進(jìn)“五環(huán)教學(xué)”——黔北名校的課改征途[J];教育家;2017年24期

8 ;500萬t黔北電煤基地開工建設(shè)[J];煤炭學(xué)報(bào);2009年06期

9 ;5Mt黔北電煤基地開工建設(shè)[J];煤礦開采;2009年04期

10 傅傳耀;;建設(shè)黔北百萬畝茶海的可能性[J];當(dāng)代貴州;2005年22期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 胡大宇;;從黔北城鎮(zhèn)的興衰看貴州城鎮(zhèn)的興起與發(fā)展[A];開發(fā)中的崛起——紀(jì)念貴州建省590周年學(xué)術(shù)討論會(huì)文集[C];2004年

2 曾瓊;肖禮華;徐建忠;吳進(jìn)軍;李驥澤;;貴州省黔北黑豬的形成及利用[A];中國地方豬種保護(hù)與利用協(xié)作組第十一屆年會(huì)論文集[C];2015年

3 田興舟;肖玉貴;韋濟(jì)友;李明忠;莘海亮;朱倫琴;韓曉潔;趙文金;吳文旋;;不同水平代乳粉對(duì)黔北麻羊羔羊生長性能和血漿代謝指標(biāo)的影響[A];第七屆中國飼料營養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

4 田興舟;韋濟(jì)友;李明忠;肖玉貴;趙文金;吳文旋;;RPC對(duì)黔北麻羊羔羊生長性能及血漿生化指標(biāo)的影響[A];2015年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2015年

5 張力;楊芳芳;莫江平;黃杰;敬榮中;;黔北浣溪向斜沉積型鋁土礦地球物理特征研究及找礦應(yīng)用[A];2015中國地球科學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（九）——專題26深部資源探測技術(shù)與礦集區(qū)立體探測、專題27變質(zhì)作用過程的觀察與模擬[C];2015年

6 李趙陽;王延斌;王向浩;張慶斌;王宏杰;;黔北地區(qū)下寒武統(tǒng)牛蹄塘組頁巖氣有利目標(biāo)區(qū)預(yù)測[A];2013年煤層氣學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

7 張成忠;張新;;黔北中上寒武系—下奧陶系地層中某鈾礦成礦特征及意義[A];中國核科學(xué)技術(shù)進(jìn)展報(bào)告（第二卷）——中國核學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集第1冊(cè)（鈾礦地質(zhì)分卷）[C];2011年

8 陳吉鋒;;讓黔北明珠散發(fā)耀眼的光芒“黔北明珠印象遵義”研學(xué)課程開發(fā)與實(shí)踐[A];國家教師科研專項(xiàng)基金科研成果2018（一）[C];2018年

9 黃興;張雄華;杜遠(yuǎn)生;郄文昆;楊兵;段先鋒;魏信祥;欒騰飛;;黔北及周緣地區(qū)石炭-二疊紀(jì)之交海平面變化對(duì)鋁土礦的控制[A];第十三屆全國古地理學(xué)及沉積學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2014年

10 王冠;鄧小杰;李越;;黔北桐梓志留紀(jì)埃隆晚期石牛欄組近岸相疊層石[A];全國微體古生物學(xué)分會(huì)第九屆會(huì)員代表大會(huì)暨第十四次學(xué)術(shù)年會(huì)、全國化石藻類專業(yè)委員會(huì)第七屆會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 劉艾瑛;黔北安頁1井實(shí)現(xiàn)油氣調(diào)查重大突破[N];中國礦業(yè)報(bào);2016年

2 記者 黃霞 謝國歡;遵義:“黔北糧倉”正在成為“黔北錢倉”[N];貴州日?qǐng)?bào);2019年

3 貴州日?qǐng)?bào)當(dāng)代融媒體記者 彭芳蓉 實(shí)習(xí)生 王西;學(xué)者眼中的黔北[N];貴州日?qǐng)?bào);2019年

4 游平偉;黔北脊梁[N];遵義日?qǐng)?bào);2019年

5 本報(bào)記者 查靜 實(shí)習(xí)生 覃霜s

本文編號(hào)：2832087