本研究旨在探討鎘對鴨腎小管上皮細胞的氧化損傷及凋亡相關(guān)基因的影響,以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)對其的保護效應(yīng)。選用10~15日齡雛鴨進行腎小管上皮細胞的提取與培養(yǎng),試驗分為對照組(Control組)、低鎘組(LCd組,細胞培養(yǎng)基中添加1.25μmol/L鎘)、中鎘組(MCd組,細胞培養(yǎng)基中添加2.5μmol/L鎘)、高鎘組(HCd組,細胞培養(yǎng)基中添加5μmol/L鎘)、NAC對照組(NAC組,細胞培養(yǎng)基中添加100μmol/L NAC)和NAC保護組(Cd+NAC組,細胞培養(yǎng)基中同時添加2.5μmol/L鎘和100μmol/L NAC),用硫酸鎘(3CdSO_4·8H_2O)在細胞生長78 h進行染毒,染毒12 h后測定以下指標(biāo):⑴鴨腎小管上皮細胞的存活率以及形態(tài)學(xué)的觀察;⑵鴨腎小管上皮細胞LDH釋放率、細胞內(nèi)SOD、T-AOC、CAT活性及GSH、MDA的含量;⑶鴨腎小管上皮細胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性;⑷凋亡基因Bcl-2、Bak-1和Caspase-3的mRNA表達量。結(jié)果表明:1、與對照組相比,染毒各組細胞的存活率顯著降低(P0.05或P0.01),染毒組細胞表現(xiàn)核皺縮、細胞核破碎,且與毒物呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;2、與對照組相比,染毒各組細胞LDH釋放率極顯著升高(P0.01);細胞內(nèi)SOD、T-AOC、CAT活力及GSH含量都極顯著下降(P0.01),MDA含量極顯著上升(P0.01),且與毒物呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;3、與對照組相比,染毒各組細胞的細胞膜Ca~(2+)-ATPase和Na~+/K~+-ATPase酶活性均極顯著降低(P0.01),細胞內(nèi)Bcl-2 mRNA表達量極顯著下降(P0.01),Bak-1和Caspase-3 mRNA表達量極顯著上升(P0.01),且與毒物呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;4、與MCd組相比,NAC保護劑組細胞內(nèi)的LDH釋放率極顯著降低(P0.01),細胞膜Ca~(2+)-ATPase和Na~+/K~+-ATPase酶活性、SOD、T-AOC、CAT和GSH活力顯著上升(P0.05或P0.01),MDA含量顯著下降(P0.05),同時Bcl-2 mRNA表達量顯著上升(P0.05),Bak-1和Caspase-3 mRNA表達量顯著下降(P0.05)。結(jié)論:鎘能導(dǎo)致鴨腎小管上皮細胞抗氧化機能下降從而發(fā)生氧化損傷,進而引起相關(guān)凋亡基因表達量的改變,同時鎘對鴨腎小管上皮細胞的損傷作用呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系,且NAC對鎘導(dǎo)致的細胞氧化損傷有保護作用。
【學(xué)位單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S859.8
【部分圖文】：

Graph Pad Prism5.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)作圖。P<0.05 表示存在顯著性差異，P<0.01 表示存在極顯著性差異，P>0.05 表示差異不顯著。3 結(jié)果與分析3.1 腎小管上皮細胞的免疫組化染色結(jié)果本實驗細胞角蛋白的表達情況如下圖 1，陰性對照無表達（圖 1A）。上皮細胞角蛋白強烈表達(圖 1B)，陽性細胞核周圍及細胞漿內(nèi)不均勻散在分布強度不一的棕黃色顆粒狀，呈點狀染色。

mRNAmRNA1.00±0.00A0.96±0.03A0.32±0.02Ba0.47±0.07Bb1.00±0.00B1.08±0.09B1.71±0.03Aa1.45±0.14Ab小管上皮細胞形態(tài)的影響及 NAC 的保護效應(yīng)置相差顯微鏡觀察了細胞在鎘作用 12 h 后的損傷情 NAC 組細胞，可見細胞緊密相連，呈橢圓狀生長且清晰。圖 4 為 LCd 組細胞，可見細胞胞體有皺縮狀病變不明顯。圖 5 為 MCd 組細胞，細胞大部分出現(xiàn)核破裂模糊并且大部分細胞出現(xiàn)變皺縮，細胞發(fā)亮細胞核破碎甚至消失，細胞嚴(yán)重皺縮，核仁消失，染狀，細胞發(fā)生嚴(yán)重病理變化。圖 7 為 Cd+NAC 組細較 MCd 組細胞，細胞狀態(tài)更好。從圖可以看出隨著發(fā)生病變損傷程度也隨之嚴(yán)重，并且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)用。

細胞緊密生長，結(jié)構(gòu)清晰，未見病理變化 (400urs of cadmium exposure, the cells in the NAC group grew tightlclear, and no pathological changes were observed (400 ×)圖 4 染毒 12 h，LCd 組，細胞狀態(tài)變差，出現(xiàn)空泡 (400 ×urs of cadmium exposure, in the LCd group, the cell state deterioappear (400 ×)

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本文編號：2830068