本文對篩選于牛、羊瘤胃源的6種益生菌(解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、枯草芽孢桿菌Lw-K16、乳酸菌Lw-R35、產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48、產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21和酵母菌Lw-JM70等益生菌,均為本實驗室保存。)進行生理特性的測定,通過平板劃線的方法測定這6種菌的相互拮抗試驗;測定6種菌的耐熱、耐酸和耐膽鹽特性;以確定6種菌是否具有成為微生態(tài)制劑菌源的潛力。在此基礎(chǔ)上,將6種益生菌在其相應的培養(yǎng)基上進行活化培養(yǎng)和擴大培養(yǎng),得到相應灌胃液并灌胃小鼠。通過觀察各組對小鼠生產(chǎn)性能、腸道菌群、脂肪積累量、免疫指數(shù)和血糖調(diào)節(jié)等指標,從6種益生菌中篩選對小鼠影響最佳的有益菌。將上述實驗篩選出的4種最優(yōu)益生菌(解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、乳酸桿菌Lw-R35、產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21和酵母菌Lw-JM70)進行固定化。本實驗所用載體為實驗室制備的多孔淀粉,進行固定化實驗,并對固定化制劑進行電鏡形態(tài)觀察和載量測定。最后,在一定時間段對活菌個數(shù)進行測定,得出保藏時間對微生態(tài)制劑的影響。本研究的主要成果如下:(1)顯微鏡下觀察6種菌的菌落形態(tài),發(fā)現(xiàn)菌體之間差異較大,容易區(qū)分;拮抗實驗表明,6種菌之間沒有明顯的拮抗作用;對6種菌進行了生長曲線測定。(2)分別通過耐熱性實驗、耐酸性實驗和耐膽鹽實驗,分別檢驗了解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、枯草芽孢桿菌Lw-K16、乳酸菌Lw-R35、產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48、產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21和酵母菌Lw-JM70的耐受性。結(jié)果表明,解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、枯草芽孢桿菌Lw-K16和產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21表現(xiàn)出較好的耐熱性,可以經(jīng)受生產(chǎn)過程中的高溫;而乳酸菌Lw-R35、產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48和酵母菌Lw-JM70耐熱性比較差,不適合在高溫條件生產(chǎn),通常采用冷凍干燥等生產(chǎn)方法。在耐酸性方面,解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、乳酸菌Lw-R35、產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48、產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21和酵母菌Lw-JM70表現(xiàn)出很強的耐酸性,枯草芽孢桿菌Lw-K16在pH為2保存4 h后存活率僅為26.30%,在pH為3.0時表現(xiàn)出較強的耐酸性。在耐膽鹽實驗中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21和酵母菌Lw-JM70可以在膽鹽濃度為0.3%的環(huán)境下增殖,同時,解淀粉芽孢桿菌Lw-J21、枯草芽孢桿菌Lw-K16和產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48也表現(xiàn)出一定的膽鹽耐受性。乳酸菌Lw-R35的膽鹽耐受性最差,在0.3%膽鹽濃度條件下處理12 h后的含量僅為53.7%。(3)6種益生菌的灌胃喂養(yǎng),均能夠不同程度地提高小鼠體重增加量,促進小鼠對鼠糧的利用率,同時還能減少體內(nèi)脂肪的沉積,而且對肝臟不存在毒副作用。在小鼠免疫指數(shù)影響的實驗中發(fā)現(xiàn),解淀粉芽孢桿菌Lw-J21和產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21的喂養(yǎng)對小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均有極顯著提升作用(P0.01)。乳酸菌Lw-R35和產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21喂養(yǎng)可以使小鼠腸道有益菌株的數(shù)量顯著增加(P0.05),改善小鼠腸道環(huán)境,維持腸道內(nèi)環(huán)境的平衡�？崭�12 h后對益生菌喂養(yǎng)的小鼠灌喂葡萄糖溶液,比較后發(fā)現(xiàn),解淀粉芽孢桿菌Lw-J21喂養(yǎng)組小鼠和產(chǎn)蛋白酶菌Lw-D48喂養(yǎng)組小鼠對其體內(nèi)血糖調(diào)節(jié)能力顯著提高(P0.05)。(4)將上述實驗篩選出最優(yōu)的4種益生菌進行固定化。通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)益生菌無規(guī)則分布于載體表面,其中,酵母菌Lw-JM70的載量最小,約為3.81×10~8 CUF/g。室溫保藏7周后各組菌的存活率分別為解淀粉芽孢桿菌Lw-J21 45.22%、乳酸菌Lw-R3553.85%、產(chǎn)纖維素酶菌Lw-X21 57.63%和酵母菌Lw-JM70 48.41%,說明通過對微生物的固定化,可以使微生物活性得到保持或延長。
【學位單位】：大連工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S816
【部分圖文】：

六種益生菌的單菌落圖

15圖 2-2 六種益生菌的染色鏡檢Fig.2-2 Microscopic examination of six probioticsA—解淀粉芽孢桿菌 Lw-J21 B—枯草芽孢桿菌 Lw-K16 C—乳酸菌 Lw-R35D—產(chǎn)蛋白酶菌 Lw-D48 E—產(chǎn)纖維素酶菌 Lw-X21 F—和酵母菌 Lw-JM70

Tal 2-3 The colony morphology and the cell characteristics of the six strains菌種 菌落形態(tài) 染色鏡檢枯草芽孢桿菌菌落呈圓形，污白色或微黃色，表面粗糙不透明革蘭氏陽性菌，橢圓到柱狀芽孢位于菌體中央或稍偏解淀粉芽孢桿菌菌落呈圓形，乳白色，表面干燥皺褶，不透明，菌落邊緣有小的鋸齒革蘭氏陽性菌，桿狀，芽孢于菌體兩端乳酸菌菌落呈圓形，較小，乳白色，不透明，表面光滑，邊緣整齊革蘭氏陽性菌，桿狀或長桿狀無芽孢產(chǎn)蛋白酶菌菌落呈橢圓形，淡黃色，表面濕潤，不透明，不易被接種環(huán)挑起革蘭氏陽性菌，菌體為桿狀芽孢位于菌體側(cè)端產(chǎn)纖維素酶菌菌落呈圓形，較大，淡黃色，表面干燥，不透明，邊緣整齊革蘭氏陽性菌，短桿狀，芽位于菌體兩側(cè)酵母菌菌落呈圓形，乳白色，表面濕潤光滑，有凸起，不透明，易被接種環(huán)挑起低倍鏡下菌液壓片觀察，菌呈橢圓或圓形，出芽生殖六種菌的相互拮抗作用

【參考文獻】

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本文編號：2820918