飼料安全是保障畜產(chǎn)品安全和人民身體健康的根本。目前一些藥物在飼料中的濫用和違禁使用引發(fā)社會(huì)的廣泛關(guān)注。中國農(nóng)業(yè)部和其他國有關(guān)部門也出臺(tái)相應(yīng)的規(guī)章制度以控制藥物的非法添加和濫用。免疫分析技術(shù)具備良好的選擇性與特異性,操作簡(jiǎn)便且價(jià)格低廉,可以同時(shí)進(jìn)行大批量的樣品檢測(cè),在食品安全快速檢測(cè)市場(chǎng)具有重要意義。本論文主要研究三種飼料中污染和添加物:三聚氰胺、鹽酸小檗堿和潮霉素B,制備相應(yīng)的高親和力和高靈敏的單克隆抗體,并通過相應(yīng)抗體建立酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)方法,研制對(duì)應(yīng)膠體金層析試紙條,用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際樣本快速檢測(cè)。本研究設(shè)計(jì)和合成了三聚氰胺、鹽酸小檗堿和潮霉素B完全抗原,經(jīng)免疫小鼠、細(xì)胞融合、制備腹水、純化抗體,獲得相應(yīng)的單克隆抗體。三聚氰胺抗體MEL-2H4的親和力常數(shù)為2.288×10~(11)L/mol,抗體亞型為IgG2b,間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ic-ELISA)最優(yōu)條件下IC_(50)值為1.804 ng/mL,回收率在80%-120%之間;鹽酸小檗堿抗體BER-3H10的親和力常數(shù)為8.390×10~(10)L/mol,抗體亞型為IgG2b,ic-ELISA最優(yōu)條件下IC_(50)值為3.469 ng/mL,回收率在80%-120%之間;潮霉素B抗體HB-1G12的親和力常數(shù)為2.394×10~(10)L/mol,抗體亞型為IgG1,ic-ELISA最優(yōu)條件下IC_(50)值為9.100ng/mL,回收率在80%-120%之間。基于三聚氰胺單克隆抗體制備了膠體金免疫層析試紙條用于飼料和牛奶樣本的檢測(cè)。該試紙條的添加回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在飼料中的三聚氰胺消線值為100 ng/g,在牛奶中三聚氰胺消線值為10 ng/mL,優(yōu)于已報(bào)道的試紙條靈敏度�；邴}酸小檗堿和潮霉素B單克隆抗體首次制備用于檢測(cè)飼料樣本的膠體金免疫層析試紙條,鹽酸小檗堿試紙條的消線值為2.500μg/g,可100 ng/g比色使用,潮霉素B試紙條消線值為250 ng/g,滿足市場(chǎng)初篩的需求。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S816.1;TS252.7

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本文編號(hào)：2815766