沙門氏菌病是具有重要公共衛(wèi)生意義的人畜共患病之一,是種禽場面臨的一個主要問題�？股匾恢币詠肀蛔鳛橹委熂毦腥镜氖走x而得到廣泛應用。但隨著抗生素濫用,細菌抗藥性居高不下,多重耐藥細菌越來越受到關(guān)注。而抗生素種類有限且新型抗生素研發(fā)困難,使得噬菌體作為一種抗菌藥重新受到關(guān)注。噬菌體對菌種或菌株具有高專一性,并且具有自我復制、治療所需劑量小、可隨著宿主菌的變異而變異等優(yōu)勢。本文通過分離山東省沙門氏菌流行菌株,針對性篩選沙門氏菌噬菌體并測定了生物學特性、測序并分析了基因組;設計不同組合方式的、噬菌體-細菌相互作用的傳代培養(yǎng)實驗,以及宏基因組測序分析SPF雞腸道微生物組等驗證噬菌體-細菌相互作用網(wǎng)絡,為后續(xù)噬菌體治療抗藥性沙門氏菌感染提供基礎數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。通過顯色培養(yǎng)基和PCR鑒定從養(yǎng)殖場病料和環(huán)境中分離到100株沙門氏菌株,多位點序列分型實驗共獲得3個普遍流行的ST型,其中ST11占96%;對上述菌株進行藥敏試驗,結(jié)果表明這些沙門氏菌株對9種廣泛使用抗生素的抗藥率都高于50%且對多粘菌素B的抗藥率高達98%。利用雙層平板法針對上述菌株篩選得到噬菌體94株,挑選宿主為ST11且多重抗藥性具有代表性的5株噬菌體進一步純化、電鏡觀察、基因組測序,測序結(jié)果顯示有 3 株肌尾噬菌體(vB_SalM_XF、vB_SalM_smc、vB_SalM_LYw)、2株長尾噬菌體(vB_SalS_DZ、vB_SalS_97),均為二十面體頭部與細長尾部結(jié)構(gòu);5株噬菌體效價均高于109pfu/rml,最適生長溫度在37℃左右,最適pH值范圍較廣,pH3時效價變化不太顯著,最佳感染復數(shù)≤10-5,潛伏期與裂解期時間差異較大。設計“一對一”、“一對多”和“多對多”等組合方式進行噬菌體與細菌的傳代培養(yǎng)實驗,模擬噬菌體-細菌的共進化進程,探索噬菌體-細菌相互作用網(wǎng)絡。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)噬菌體與競爭菌株共存時可以協(xié)同抑制宿主菌的生長;(2)多種噬菌體與對應宿主相互作用形成的網(wǎng)絡可以平衡各菌株之間的生長優(yōu)勢,穩(wěn)定體系結(jié)構(gòu)—我們稱之為“滯穩(wěn)網(wǎng)絡”。本文還利用宏基因組測序分析了 SPF雞腸道微生物組,發(fā)現(xiàn)豐度較高的噬菌體與細菌之間存在較強的相關(guān)性;通過對比使用抗生素前后腸道細菌與噬菌體豐度,研究臨床劑量抗生素對腸道微生物組的影響。得到結(jié)論,噬菌體與細菌相互作用網(wǎng)絡—“滯穩(wěn)網(wǎng)絡”可以平衡體系中各菌株之間的生長優(yōu)勢,并且能夠一定程度上緩沖外來因素對腸道體系造成的波動和影響。未來我們還將通過動物實驗來驗證上述結(jié)論并利用分離到的噬菌體開展噬菌體治療。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S852.61
【部分圖文】：

圖２－３金黃色葡萄球菌特異引物／ｗｃ？和電泳圖逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ｐｒｉｍｅｒｓ邋ｎｕｃ＆ｍｅｃＡ邋ｆｏｒ邋Ｓ．ａｕｒｅｕｓ逡逑

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圖２－５沙門氏菌ＳＴ型分布逡逑Ｆｉｇ．２－５邋ＳＴｓｆ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｃａ逡逑從上圖可看出，沙門氏菌的ＳＴ型分布非常集中

【參考文獻】

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本文編號：2814491