【摘要】：大腸埃希氏菌能夠引起動物和人的大腸桿菌病。它廣泛存在于動物和人的腸道中,既屬于腸道常駐菌,又是一種條件致病菌,一些特殊的血清型或者其他非傳染性條件和傳染性病原誘發(fā)動物和人感染此菌。為研究諸城地區(qū)的水貂、狐貍、貉子中大腸桿菌的流行病學情況以及分離菌株之間的遺傳相關(guān)性,于2017年8月份從諸城地區(qū)三個距離較近的養(yǎng)殖場共采集糞便樣品182份,其中水貂養(yǎng)殖場采集78份、狐貍養(yǎng)殖場采集97份、貉子養(yǎng)殖場采集7份。采集樣品經(jīng)處理后,進行增菌、選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)和16SrRNA鑒定等方法對大腸桿菌進行分離鑒定。對分離菌株進行凝集實驗,鑒定31種致病性血清型;采取紙片瓊脂擴散法(K-B法)對分離菌株用14種常用抗生素的耐藥情況進行檢測;提取分離菌株DNA,檢測24種耐藥基因的存在情況以及I類整合子;對分離菌株進行Multilocus sequence typing(MLST)分型,分析其溯源和遺傳進化關(guān)系。從而闡明大腸桿菌在該區(qū)域三個養(yǎng)殖場的流行傳播情況。經(jīng)分離鑒定,182份樣品中的95份含有大腸桿菌,陽性率為52.20%(95/182)。經(jīng)凝集實驗鑒定,17株大腸桿菌屬于可致病血清型,包括10種不同的類型,其中O104:H4測出率最多為23.53%(4/17);藥敏實驗的結(jié)果表明,95株分離的大腸桿菌對14種抗生素的耐藥表現(xiàn)有差異,對氨芐西林的耐藥性最高,為91.58%(87/95);對頭孢西丁表現(xiàn)為敏感,耐藥率分別為1.05%(1/95)。共檢測出15種耐藥基因,其中檢出率最高的為喹諾酮類的耐藥基因qnrS,檢出率為66.32%(63/95),檢測到31株大腸桿菌攜帶I類整合子,檢出率32.63%,I類整合子檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),菌株中共攜帶7種耐藥基因盒,最多的基因盒為dfrA27+aadA2+qnrA(17/31),攜帶整合子的分離株中多重耐藥的菌株比率93.55%。SAS軟件結(jié)果表明耐藥基因的存在與大腸桿菌對該類抗生素耐藥彼此之間的相關(guān)性差異很大(P0.05),與某一特定的耐藥基因存在有關(guān),本實驗中耐藥基因sul1的攜帶與復方新諾明耐藥之間呈正相關(guān)。對95個ST序列分析后,得到55個不同的ST型,其中ST46序列型表現(xiàn)為最多,占總數(shù)的11.57%(11/95),沒有出現(xiàn)新的等位基因型;存在七個克隆群(CC1~CC7)最大的克隆群為CC6,由ST10與ST218、ST48、ST215、ST744、ST43、ST1634、ST656、ST716所組成,分離菌遺傳進化關(guān)系比較近的不同菌株趨向于來自同一物種;其中ST189、ST10、ST46分別對應(yīng)克隆群CC5、CC6、CC7的克隆祖代;致病性血清型在遺傳進化樹上呈離散分布,與菌株之間的遺傳關(guān)系遠近和ST型無相關(guān)性;在耐藥譜組成上無關(guān)聯(lián);同一克隆群中大部分在進化分支上比較近,存在部分菌株相差較遠如st4147和st189,形成這種情況的原因可能與不同菌株七個管家基因序列之間的差異度大小有關(guān);進化分支較近的分離株與其耐藥譜的攜帶存在一定的關(guān)聯(lián)性。本研究完成了諸城地區(qū)三個毛皮動物源養(yǎng)殖場中的水貂、狐貍、貉子所攜帶的大腸桿菌流行特點、致病性血清型分布,以及對常用抗生素的耐藥規(guī)律以及耐藥基因、整合子的攜帶情況等的分析。詮釋了該地區(qū)大腸桿菌的分布特點、耐藥規(guī)律,以及流行特點和遺傳進化關(guān)系,從而針對可能發(fā)生的毛皮動物源大腸桿菌病的爆發(fā),制定出有效的預防對策。
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61
【圖文】：

圖 3-1 大腸桿菌 PCR 擴增陽性產(chǎn)物Fig.3-1 PCR of E.coli positive isolates清型分布實驗，從 95 株大腸桿菌中分離到 17 株大腸桿菌具有率為 17.89%（17/95）（表 3-2）。最常見的血清型為 O26:K71（n=3，3.16%），O86：K61（n=2，2.11%）、3（n=1，1.05%）、O8:K40（n=1，1.05%）、O15:K? 1.05%）、O9：K9（n=1，1.05%）、O20:K17（n=2li Serotype 的占有率為 5.26%，種類為 O126:K71、O的占有率為 3.16%，分別為 O29:K？、O28:K73、O15占有率 5.26%，分別為 O8:K40、O15:K?、O9：K9、O104：H4 占有率為 4.21%（圖 3-2）。

諸城市三種毛皮動物源大腸桿菌流行病學調(diào)查及遺傳相關(guān)性分析O28:K73 1.05%（1/95）O152：K? 1.05%（1/95）腸桿菌血清型O8:K40 1.05%（1/95）O15:K? 1.05%（1/95）O9：K9 1.05%（1/95）O20:K17 2.11%（2/95）腸桿菌血清型 O104：H4 4.21%（4/95）

1.05%）、O152：K? （n=1，1.05%）、O9：K9（n=1，1.05%）、O20:K17（n=2，2.11%）（圖3-3）;致病性 E.coli Serotype 的占有率為 5.26%，種類為 O126:K71、O86：K61；侵襲性 E.coli Serotype 的占有率為 3.16%，分別為 O29:K？、O28:K73、O152：K?；產(chǎn)毒性E.coli Serotype 的占有率 5.26%，分別為 O8:K40、O15:K?、O9：K9、O20:K17；出血性 E.coli Serotype O104：H4 占有率為 4.21%（圖 3-2）。表 3-2 大腸桿菌血清型鑒定結(jié)果Table 3-2 Serotype identification of isolated Escherichia coli血清型 所占比例致病性大腸桿菌血清型O126:K71 3.16%（3/95）O86：K61 2.11%（2/95）侵襲性大腸桿菌血清型 O29:K？ 1.05%（1/95）

【參考文獻】

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本文編號：2798791