【摘要】：大腸埃希菌耐藥性的產(chǎn)生與其特性、耐藥質(zhì)粒傳播和抗生素的使用等因素密切相關(guān),多重耐藥菌株的出現(xiàn)使大腸埃希菌的耐藥問(wèn)題日漸嚴(yán)重。超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)是革蘭陰性菌對(duì)頭孢菌素類(lèi)藥物最重要的耐藥機(jī)制,產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌給人和動(dòng)物健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅,已成為最為關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。本研究通過(guò)對(duì)臨床分離的畜禽大腸埃希菌耐藥性與ESBLs基因分析,為評(píng)價(jià)重慶地區(qū)畜禽細(xì)菌耐藥現(xiàn)狀、ESBLs耐藥基因流行規(guī)律提供依據(jù)。本試驗(yàn)以2014-2016年從重慶7個(gè)區(qū)縣13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)分離的1455株雞、豬和牛源大腸埃希菌為對(duì)象,測(cè)定其對(duì)抗生素的敏感性,并檢測(cè)了所有分離菌的多重耐藥基因、ESBLs耐藥基因類(lèi)型,對(duì)部分分離菌進(jìn)行了多位點(diǎn)可變數(shù)串聯(lián)重復(fù)分析法(MLVA)分型。主要結(jié)果如下:(1)1455株分離菌對(duì)28種抗生素均有不同程度的耐藥性,耐藥率在1.1%-89.1%之間。試驗(yàn)菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)的亞胺培南和氨基糖苷類(lèi)的阿米卡星最為敏感,耐藥率僅有1.1%和5.4%,對(duì)阿莫西林耐藥最為嚴(yán)重,耐藥率平均達(dá)到89.10%。氨基糖昔類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、酰胺醇類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物中耐藥率最高的分別是安普霉素(45.5%)、四環(huán)素(68.8%)、氟苯尼考(55.9%)和萘啶酸(46.1%)。牛源菌株對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物和喹諾酮類(lèi)藥物耐藥均在5%以下,并且對(duì)諾氟沙星100%敏感。(2)所有分離菌多重耐藥現(xiàn)象明顯,對(duì)0-5、6-10、11-15、16-20、21-25和26-28種藥物耐藥菌株分別占總分離菌株的15.7%、17.6%、27.7%、22.7%、15.1%和1.2%。其中1株分離自養(yǎng)豬場(chǎng)菌株對(duì)28種藥物耐藥,1株分離自牛場(chǎng)的菌株對(duì)所有藥物敏感。雞源菌株普遍比豬源、牛源菌株耐藥性嚴(yán)重;冬、春季節(jié)的分離株耐藥率普遍高于夏秋季分離菌;不同區(qū)縣雞源分離菌耐藥率差異不明顯,但各飼養(yǎng)場(chǎng)豬源分離菌的耐藥率存在一定差異。(3)1455株大腸埃希菌中,有1398株攜帶1種以上ESBLs基因,占所有菌株數(shù)的96.1%。這些菌株共有12種ESBLs基因類(lèi)型。blaTEM和blaCTX-M型耐藥基因在重慶地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)中普遍存在,blaTEM基因型最多(59.3%),其次為blaTEM+CTx-M(21.9%)。(4)采用MLVA分型方法對(duì)2014-2015年分離的399株E.coli雞源與豬源分離株進(jìn)行了基因分型,篩選出具有高分辨率適用于重慶地區(qū)大腸埃希菌基因的6個(gè)MLVA位點(diǎn)組合(GECM-6),并構(gòu)建了E.col分離株MLVA分型結(jié)果進(jìn)化樹(shù),該進(jìn)化樹(shù)將大腸埃希菌按各位點(diǎn)等位基因數(shù)目的不同共分為263個(gè)GECM-10菌株型,所有菌株MLVA分型結(jié)果比較分散,得到不同類(lèi)型的GECM-10菌株型,未發(fā)現(xiàn)占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)的GECM-10菌株型,菌株在基因水平上具有多態(tài)性,且不同區(qū)域菌株的GECM-10菌株型差異比較明顯�？傊�,本研究對(duì)1455株分離菌在來(lái)源、季節(jié)、用藥情況等方面進(jìn)行了系統(tǒng)分析,揭示了重慶地區(qū)畜禽源大腸埃希菌的耐藥現(xiàn)狀、規(guī)律和多重耐藥現(xiàn)象,為指導(dǎo)臨床用藥提供了依據(jù);檢測(cè)出重慶地區(qū)產(chǎn)ESBLs畜禽源大腸埃希菌有12種基因類(lèi)型,其中blaTEM和blaCTX-M為重慶地區(qū)ESBLs優(yōu)勢(shì)基因型,為合理用藥提供了理論保證;篩選出具有高分辨率的6個(gè)MLVA位點(diǎn)新組合(GECM-6),適用于重慶甚至西南地區(qū)畜禽大腸埃希菌的日常基因分型檢測(cè)和暴發(fā)時(shí)的流行病學(xué)調(diào)查,可從源頭上控制和減少多重耐藥菌株的產(chǎn)生。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61
【圖文】：

２．３．２大腸埃希菌分離鑒定結(jié)果逡逑大腸埃希菌在麥康凱平板上形成表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的桃紅色菌落；革蘭氏逡逑染色后鏡檢可見(jiàn)細(xì)菌為短桿狀的革蘭氏陰性細(xì)菌（圖２－１）。逡逑八邐Ｂ逡逑；ｖ＊邐％邐二．逡逑＇＿邐－？邐－邋ｇ邋－邋ｔ邋＼邐＇邋Ｋ逡逑圖２－１大腸埃希菌臨床分離株在麥康凱平板上的生長(zhǎng)狀況及革蘭氏染色結(jié)果逡逑Ａ：臨床分離株在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況；Ｂ：臨床分離株革蘭氏染色結(jié)果。逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｉｓｏｌａｔｅ邋ｗａｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｏｎ邋ＭａｃＣｏｎｋｅｙ邋ｐｌａｔｅａｎｄ邋ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ．逡逑Ａ：邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｉｓｏｌａｔｅ，邋Ｂ：邋Ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ．逡逑大腸埃希菌菌株的鑒定采用ＰＣＲ擴(kuò)增大腸埃希菌特異的；基因。所分離的大逡逑腸埃希菌均能夠擴(kuò)增出單一的與預(yù)期大小相同的７２０邋ｂｐ的條帶（圖２－２）。選取部分逡逑擴(kuò)增的ＰＣＲ產(chǎn)物測(cè)序，所有產(chǎn)物的核苷酸序列均與；核苷酸序列相同，證明擴(kuò)增逡逑的片段為；基因片段。逡逑７２０逡逑４００邐｜ｌａ｜＆：：：－：逡逑圖２－２臨床分離株大腸埃希菌特異性基因＃７0Ａ邋ＰＣＲ忙增結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｔｈｅ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｏｆ邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ｇｅｎｅ邋ｐｈｏＡ邋ｉｎ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ．逡逑Ｍ．邋１００邋ｂｐ邋ｌａｄｄｅｒ；邋１－２４．臨床分離菌株ｐ／ｚｏｄ基因片段逡逑Ｍ．邋１００邋ｂｐ邋ｌａｄｄｅｒ，邋１－２４．邋Ｐｒｏｄｕｃｔ邋ｏｆ邋ｐｈｏＡ邋ｆｒａｇｍｅｎｔ邋ｉｎ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ．逡逑以大腸埃希菌ＡＴＣＣ邋２５９２２為陽(yáng)性對(duì)照

２．３．２大腸埃希菌分離鑒定結(jié)果逡逑大腸埃希菌在麥康凱平板上形成表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的桃紅色菌落；革蘭氏逡逑染色后鏡檢可見(jiàn)細(xì)菌為短桿狀的革蘭氏陰性細(xì)菌（圖２－１）。逡逑八邐Ｂ逡逑；ｖ＊邐％邐二．逡逑＇＿邐－？邐－邋ｇ邋－邋ｔ邋＼邐＇邋Ｋ逡逑圖２－１大腸埃希菌臨床分離株在麥康凱平板上的生長(zhǎng)狀況及革蘭氏染色結(jié)果逡逑Ａ：臨床分離株在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況；Ｂ：臨床分離株革蘭氏染色結(jié)果。逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｉｓｏｌａｔｅ邋ｗａｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｏｎ邋ＭａｃＣｏｎｋｅｙ邋ｐｌａｔｅａｎｄ邋ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ．逡逑Ａ：邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｉｓｏｌａｔｅ，邋Ｂ：邋Ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ．逡逑大腸埃希菌菌株的鑒定采用ＰＣＲ擴(kuò)增大腸埃希菌特異的；基因。所分離的大逡逑腸埃希菌均能夠擴(kuò)增出單一的與預(yù)期大小相同的７２０邋ｂｐ的條帶（圖２－２）。選取部分逡逑擴(kuò)增的ＰＣＲ產(chǎn)物測(cè)序，所有產(chǎn)物的核苷酸序列均與；核苷酸序列相同，證明擴(kuò)增逡逑的片段為；基因片段。逡逑７２０逡逑４００邐｜ｌａ｜＆：：：－：逡逑圖２－２臨床分離株大腸埃希菌特異性基因＃７0Ａ邋ＰＣＲ忙增結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｔｈｅ邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｏｆ邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ｇｅｎｅ邋ｐｈｏＡ邋ｉｎ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ．逡逑Ｍ．邋１００邋ｂｐ邋ｌａｄｄｅｒ；邋１－２４．臨床分離菌株ｐ／ｚｏｄ基因片段逡逑Ｍ．邋１００邋ｂｐ邋ｌａｄｄｅｒ，邋１－２４．邋Ｐｒｏｄｕｃｔ邋ｏｆ邋ｐｈｏＡ邋ｆｒａｇｍｅｎｔ邋ｉｎ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ．逡逑以大腸埃希菌ＡＴＣＣ邋２５９２２為陽(yáng)性對(duì)照

第二章重慶地區(qū)畜禽源大腸埃希菌耐藥性分析逡逑牛源菌株１０８株，雞源、豬源和牛源菌株分離率分別為８５．６％、８２．８％和７７．１％，詳逡逑見(jiàn)表２－６，圖２－３。逡逑表２－６不同動(dòng)物源大腸埃希菌分離情況逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－６邋Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋Ｅ．邋ｃｏｌ：邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ａｎｉｍａｌｓ逡逑樣品類(lèi)型樣品數(shù)菌株數(shù)邐分離率％逡逑豬源邐５９５邐４９３邐８２．８逡逑雞源邐９９８邐８５４邐８５．６逡逑牛源邐１４０邐１０８邐７７．１逡逑合計(jì)邐１７３３邐１４５５邐８１９邐逡逑不同畜食源大腸埃希茴分離情況逡逑２０００逡逑１ＳＯＯ邐１７３３逡逑■邐Ｂ豬源Ｑ１約源Ｈ牛涵□合計(jì)逡逑？Ｓ５逡逑３０００邐ｍｍ邋＾邐？邐＿逡逑＾邐媝邋Ｐｉ邋W逡逑Ｉ邐■邋Ｉ邐自邋Ｂ逡逑１，４０邐１０８邐８２．８邐８５．６邐７７．１邐８３．９逡逑樣品數(shù)邐苗株＊ａ邐分離本％逡逑圖２－３不同畜禽源大腸埃希菌分離情況逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋Ｅ．邋ｃｏｌｉ邋ｉｓｏｌａｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ａｎｉｍａｌ邋ｓｐｅｃｉｅｓ．逡逑２．３．３不同養(yǎng)殖場(chǎng)菌株分離情況逡逑從樣品的不同采集地點(diǎn)來(lái)看，在１３個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)即養(yǎng)豬場(chǎng)１、養(yǎng)豬場(chǎng)２、養(yǎng)豬場(chǎng)３、逡逑養(yǎng)豬場(chǎng)４、養(yǎng)雞場(chǎng)１、養(yǎng)雞場(chǎng)２、養(yǎng)雞場(chǎng)３、養(yǎng)雞場(chǎng)４、養(yǎng)雞場(chǎng)５、養(yǎng)雞場(chǎng)６、養(yǎng)牛場(chǎng)１、逡逑養(yǎng)牛場(chǎng)２和屠宰場(chǎng)分別分離到１２４株、１０９株、１２２株、５０株、１６３株、１５６株、１８９逡逑株、１３５株、１１７株、９４株、３２株、７６株和８８株大腸埃希菌（表２－７?

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2789291