【摘要】：布魯氏菌病(Brucellosis)是由兼性細(xì)胞內(nèi)寄生的布魯氏菌(Brucella)引起的人獸共患烈性傳染病,近年來(lái)在我國(guó)大部分地區(qū)再次流行,引起了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失和公共衛(wèi)生問(wèn)題。本論文旨在分析我國(guó)西北地區(qū)羊布魯氏菌分子流行病學(xué),了解布魯氏菌優(yōu)勢(shì)菌株及其菌株基因特征,追溯流行菌株的來(lái)源和變異情況;根據(jù)流行菌株基因組特征,選擇保守的免疫抗原蛋白,篩選有針對(duì)性的抗原表位多肽。從我國(guó)西北新疆、青海、甘肅和內(nèi)蒙古四省區(qū)一些地區(qū)采集羊和牦牛疑似感染布魯氏菌病流產(chǎn)胎兒的脾臟樣本480份,共分離鑒定布魯氏菌菌株66株,其中馬耳他布魯氏菌3型58株,馬耳他布魯氏菌1型1株,流產(chǎn)布魯氏菌1型2株,流產(chǎn)布魯氏菌3型3株和豬布魯氏菌3型2株;用MLVA和MLST基因分析技術(shù),對(duì)66株布魯氏菌菌株進(jìn)行分子流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),66株布魯氏菌分離株中包含46個(gè)MLVA16基因型,37株菌株擁有獨(dú)立特有的基因型,有一株為新的基因型(基因型369),其中基因型116(n=49)和ST8(n=53)為優(yōu)勢(shì)的基因型。MLVA16分析66株分離株的亨特-加斯頓多樣化指數(shù)(HGDI)表明,菌株間多樣化水平為0.979;以MLVA11進(jìn)行分子流行病學(xué)分析表明,我國(guó)馬耳他布魯氏菌流行菌株的主要基因型為116,分離株MLVA16的鑒定分析有助于深入了解西北地區(qū)動(dòng)物布魯氏菌病流行情況。首次對(duì)甘肅馬耳他布魯氏菌流行株分析發(fā)現(xiàn),其流行菌株的種類、基因型無(wú)規(guī)律性。分子流行病學(xué)比較表明,人感染布魯氏菌病主要來(lái)源于羊。甘肅慶陽(yáng)地區(qū)2011-2015年間布魯氏菌血清流行情況分析表明,布魯氏菌年流行率在0.04%-4.75%之間,8個(gè)縣區(qū)年均流行率在0%-9.96%之間,布魯氏菌發(fā)病呈現(xiàn)上升趨勢(shì),差異明顯;分離菌株分子流行病學(xué)結(jié)果表明,甘肅慶陽(yáng)地區(qū)羊布魯氏菌不僅有本地區(qū)周圍的優(yōu)勢(shì)流行菌株,而且也存在外來(lái)菌株的混合感染。對(duì)分離于甘肅和青海的2株(羊源和牦牛源各1株)馬耳他布魯氏菌代表株全基因組測(cè)序分析,結(jié)果顯示全基因組相對(duì)保守,長(zhǎng)度為3.3Mb,有兩個(gè)環(huán)狀染色體,但基因組上也存在數(shù)量不等的特異基因。應(yīng)用樹突狀細(xì)胞篩選布魯氏菌種間保守的Omp16和L7/L12免疫蛋白潛在的抗原表位多肽,小鼠免疫評(píng)價(jià)結(jié)果表明omp16-1和L7/L12-4為T細(xì)胞抗原表位多肽,能刺激細(xì)胞和免疫動(dòng)物發(fā)揮細(xì)胞免疫功能;omp16-5能夠與布魯氏菌陽(yáng)性血清發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng),也能發(fā)揮體液免疫功能。總之,我國(guó)西北地區(qū)羊主要流行馬耳他布魯氏菌3型菌株,優(yōu)勢(shì)基因型為116(MLVA11)和ST8(MLST),布魯氏菌菌株主要來(lái)自于東地中海布魯氏菌群,基因組保守度高;應(yīng)用DC能有效的篩選表位多肽抗原,并從Omp16和L7/L12蛋白上獲得了理想的表位多肽。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S855.12
【圖文】：

圖 1-1 不同省份 600 株布魯氏菌菌株傳播路線圖Fig1-1 The sketch map of the 600 Brucella strains from different provinces in this studye 1 (yellow line): Inner Mongolia, Heilongjiang, Liaoning- Shandong- Hebei- Beijing-Guangdong provincee 2 (green line): Xinjiang, Ningxia, Qinghai-Shanxi-Henan-Zhejiang-Guangxi-Fujian-Hainan provinces. Lick line) Shanxi-Henan-Jiangxi-Guangxi-Yunnan provinces. The size of the blue circle represented the totalber of the isolated strains (in a circle). The sketch map does not represent an administrative map in the legase..2 MLST多位點(diǎn)測(cè)序分型(Multilocus sequencing typing，MLST)最早設(shè)計(jì)用于研究腦膜炎奈瑟Neisseria meningitides)的自然變異，后來(lái)被廣泛的用于多種病原微生物和真核生物的研eng et al., 2011; Momeni et al., 2015)，該方法通過(guò)分析同一基因的等位基因核酸序列突到不同種型菌株之間的差異，其選擇分析的序列往往是看家基因�？醇一蛟诰曛械拇嬖�，但不同菌株間又有極小的差異，通過(guò)測(cè)定看家基因的核苷酸序列，找到變分散于基因組內(nèi)多個(gè)位點(diǎn)的變異情況，形成一種菌株共有的特征，從而將這些基因特組合與菌株進(jìn)化建立起密切關(guān)系。MLST 設(shè)計(jì)往往是通過(guò)比較 GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)菌株看

通過(guò)抗原刺激活化后，再次移入患者體內(nèi)，激活產(chǎn)生特異的殺傷性 C胞(Saito et al., 2017)；新型的方法是通過(guò)抗原與 DC 表面受體融合方法原，體內(nèi)免疫后通過(guò) DC 抗原交互提呈能力，活化特異性殺傷 CD8+細(xì)一方面，DC 疫苗的作用往往需要配伍佐劑以增強(qiáng)其功能(Chen et al., 20e, 2014)。研究的目的和意義來(lái)，我國(guó)大部分地區(qū)出現(xiàn)布魯氏菌病的再次流行，特別是在西北地區(qū)流采集我國(guó)西北地區(qū)疑似感染布魯氏菌引起流產(chǎn)動(dòng)物樣本，進(jìn)行細(xì)菌分離，全面了解我國(guó)西北地區(qū)布魯氏菌流行的優(yōu)勢(shì)菌株及其菌株特征，追溯異情況，以及分析流行菌株的全基因組特征；根據(jù)我國(guó)布魯氏菌流行選擇廣譜的免疫抗原蛋白為靶標(biāo)，進(jìn)行表位多肽抗原的篩選，為布魯氏提供候選高效抗原。此外，通過(guò)我國(guó)動(dòng)物布魯氏菌分子流行病學(xué)研究和的分析，能為布魯氏菌病防控中疫苗的選用提供有效的數(shù)據(jù)支撐。論文見(jiàn)圖 1-2。

圖 2-1 樣本采集分別圖Figure2-1. Distribution of samples.2 主要試劑及溶液布魯氏菌血清葡萄糖瓊脂（Brucella serum dextrose agar）和布魯氏（Brucella Medium Base and Brucella Selective Supplement）；購(gòu)自LTM布魯氏菌培養(yǎng)基購(gòu)自于每個(gè) BD 公司；布魯氏菌馬血清；無(wú)菌的1 mol/L, pH 7.2)；硫化氫（H2S）檢測(cè)試紙（醋酸鉛）、硫堇(thionin, TH))檢測(cè)試紙；生化檢測(cè)用噬菌體(Tbilisi, Tb; Berkeley, Bk2; 和 Weybr異性抗血清由中國(guó)疫病預(yù)防與控制中心提供。DL2000TMDNAMarker、DNA 基因組提取試劑盒試劑盒和 EXTaq 擴(kuò)增酶購(gòu)自寶生物工試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。布魯氏菌血清葡萄糖瓊脂（Brucella serum dextrose agar）成分（1 L胨（Peptone） 10 gb-Lemco’powder 5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;我國(guó)專家開(kāi)始建設(shè)中國(guó)人“健康數(shù)據(jù)庫(kù)”[J];心血管病防治知識(shí);2008年02期

2 張紅萍;;1992-2005年我國(guó)腫瘤分子流行病學(xué)文獻(xiàn)計(jì)量分析[J];中華醫(yī)學(xué)圖書情報(bào)雜志;2007年04期

3 俞順章;分子流行病學(xué)發(fā)展中的幾個(gè)新問(wèn)題[J];上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

4 鄭文紅,張樂(lè),程緒鵬;分子流行病學(xué)應(yīng)用于疾病研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2002年12期

5 嚴(yán)石林,李煒弘,王米渠,景琳,楊練,班秀芬;分子流行病學(xué)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用前瞻[J];成都醫(yī)藥;2002年02期

6 李如琳 ,徐德忠 ,聶青和 ,閆永平 ,張景霞 ,許昌泰;西安地區(qū)急性GBV-C/HGV感染者的分子流行病學(xué)及臨床特征[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年07期

7 陳坤;分子流行病學(xué)概況[J];浙江預(yù)防醫(yī)學(xué);2001年04期

8 郭存三,郭立征;分子流行病學(xué)在疾病研究中的作用[J];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;1999年06期

9 俞乃勝;動(dòng)物分子流行病學(xué)的研究及其應(yīng)用概況[J];云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1999年03期

10 莫美儀;分子流行病學(xué)[J];廣東衛(wèi)生防疫;1995年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 沈洪兵;;分子流行病學(xué)在疾病預(yù)防控制中的應(yīng)用[A];貴州省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)年會(huì)暨傳染病預(yù)防控制與公共衛(wèi)生人才培養(yǎng)論壇論文集[C];2014年

2 李衛(wèi)民;王u&民;端木宏謹(jǐn);劉宇紅;李傳友;姜廣路;丁北川;;2000年中國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查菌株分子流行病學(xué)特征[A];中國(guó)防癆雜志2003第25卷增刊——2003年中國(guó)防癆協(xié)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

3 張?zhí)烀?;結(jié)核病分子流行病學(xué)的概況和進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)結(jié)核病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2000年

4 吳霞;嚴(yán)秀峰;王愛(ài)敏;何磊燕;王傳清;糜祖煌;俞蕙;;兒童耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染臨床及分子流行病學(xué)特征研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

5 吳霞;嚴(yán)秀峰;俞蕙;王愛(ài)敏;何磊燕;王傳清;糜祖煌;;兒童耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染臨床及分子流行病學(xué)特征研究[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

6 劉丁;;醫(yī)院感染分子流行病學(xué)的分析方法[A];中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)第十六屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2009年

7 季劍蘋;陸敏;張泓;;兒童耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)及耐藥性分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

8 季劍蘋;陸敏;張泓;;兒童耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)及耐藥性分析[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

9 寧雪;喬艷紅;寧雪;沈敘莊;姚開(kāi)虎;楊永弘;陳強(qiáng);鄭躍杰;李士朋;李娟;;中國(guó)兒童金黃色葡萄球菌菌血癥病例的臨床特點(diǎn)和分離株的分子流行病學(xué)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2014全國(guó)微生物學(xué)與免疫學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年

10 黃永坤;戚勤;趙亞玲;李海林;魏群德;劉麗利;甄雙平;文革生;周麗芳;馬靜;蘇慶華;陳世德;謝學(xué)禮;杜百年;胡顯章;侯宗柳;孫茂盛;龐偉;戴國(guó)珍;;小兒輪狀病毒腸炎的分子流行病學(xué)和臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 蔡玉高;我國(guó)專家聯(lián)手建中國(guó)人健康數(shù)據(jù)庫(kù)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

2 記者 高加平邋通訊員 盧大成;泰州建設(shè)中國(guó)人“健康數(shù)據(jù)庫(kù)”[N];泰州日?qǐng)?bào);2007年

3 張艷禾 張曉鵬 記者 姜雪松;罕見(jiàn)自然重組豬病毒在哈被發(fā)現(xiàn)[N];哈爾濱日?qǐng)?bào);2015年

4 余為一 博士;撲向蓄牧業(yè)及人類的“野火”仍在“燃燒”[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年

5 本報(bào)記者 馮海波;探尋基因“密碼”[N];廣東科技報(bào);2011年

6 記者 朱敏麗　實(shí)習(xí)生 朱艷萍;泰州建成10萬(wàn)人份“健康數(shù)據(jù)庫(kù)”[N];泰州日?qǐng)?bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 曹小安;我國(guó)西北地區(qū)羊布魯氏菌分子流行病學(xué)及抗原表位多肽的篩選[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

2 蘇擘;華中地區(qū)I型人類免疫缺陷病毒（HIV-1）分子流行病學(xué)及耐藥基因型的研究[D];武漢大學(xué);2005年

3 黎志東;HIV分子流行病學(xué)及輔受體突變導(dǎo)致HIV感染抑制機(jī)理的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 沈軍;人偏肺病毒及多種病原體致兒童急性下呼吸道感染的臨床及分子流行病學(xué)特征[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

5 路新利;河北省HIV-1分子流行病學(xué)和耐藥基因變異研究[D];河北大學(xué);2017年

6 張蓉芳;急性呼吸道感染患兒呼吸道病毒分子流行病學(xué)和臨床特征的研究[D];蘭州大學(xué);2011年

7 俞雪蓮;上海部分地區(qū)成人感染麻疹病毒的分子流行病學(xué)及致病機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

8 陳兆國(guó);上海地區(qū)動(dòng)物隱孢子蟲病分子流行病學(xué)調(diào)查及微小隱孢子蟲miRNA的初步鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

9 羅雷;廣州地區(qū)登革熱自然疫源地及傳播流行演變模式研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

10 萬(wàn)川;耐阿奇霉素與頭孢曲松低敏淋病奈瑟菌的耐藥機(jī)制及分子流行病學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉玄福;河北省PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查及流行株的分離鑒定[D];河北科技師范學(xué)院;2018年

2 許金鳳;鎮(zhèn)江地區(qū)諾如病毒分子流行病學(xué)分析及其與腸道菌群關(guān)系的初步研究[D];江蘇大學(xué);2017年

3 舒敏;住院小兒金黃色葡萄球菌感染的臨床特征和分子流行病學(xué)分析[D];四川大學(xué);2007年

4 陳能;從化市小兒呼吸道人類偏肺病毒感染的臨床與分子流行病學(xué)特征[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

5 熊毅;廣西狂犬病分子流行病學(xué)的研究[D];廣西大學(xué);2005年

6 耿勝競(jìng);疫苗時(shí)代兒童麻疹臨床和分子流行病學(xué)[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

7 連宏軍;新城疫病毒分子流行病學(xué)分析與滅活疫苗免疫原性研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

8 熊祝嘉;我國(guó)多中心耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的分子流行病學(xué)及耐藥性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

9 任麗;天津地區(qū)麻疹病毒分子流行病學(xué)的初步研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

10 黃芬芬;上海郊區(qū)豬戊型肝炎病毒（HEV）分子流行病學(xué)及HEV反向遺傳學(xué)研究[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2788811