【摘要】：牛病毒性腹瀉病(Bovine viral diarrhea,BVD)又稱牛病毒性腹瀉-黏膜病,主要是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引發(fā)的急性、接觸性傳染病。據(jù)流行病學調(diào)查,近幾年來國內(nèi)外的BVDV感染趨勢不斷擴大,給養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟發(fā)展造成了嚴重損失。該病原BVDV具有高度的變異性,可導致疫苗保護失效和持續(xù)性感染,在防治方面帶來了很大的困難。體外研究高效敏感的抗BVDV藥物對牛病毒性腹瀉病的治療及防控具有一定的指導意義。本研究主要對矮紫堇、訶子等16種藏藥進行了體外抗BVDV藥效學試驗,初步篩選出具有抗BVDV的藏藥,并深入探究了有效藏藥的抗病毒作用。具體取得了如下研究結果:1.利用水提法提取16種藏藥,并采用CCK8檢測和CPE觀察相結合的方法測定16種藏藥的最大安全濃度。結果表明,測得BVDV的TCID_(50)為10~(-4.67)/0.1m L;16種藏藥的最大藥物安全濃度范圍在0.5mg/mL~16 mg/mL之間。2.通過CCK8檢測和CPE觀察相結合的方法初步篩選具有抗BVDV的有效藏藥。結果表明:16種藏藥中訶子、矮紫堇和甘青烏頭對BVDV均有一定的抑制作用,且最大抑制率均大于50%。其中,矮紫堇的抗病毒效果要好于訶子和甘青烏頭,并優(yōu)于利巴韋林。3.采取先加藥后加病毒、先加病毒后加藥及藥和病毒預先作用的3種不同加藥方式推測3種藏藥的抗病毒作用方式。結果表明:3種藏藥對BVDV均有一定的直接殺滅作用,且均好于吸附阻斷作用和復制阻斷作用。其中,矮紫堇直接殺滅效果最佳且優(yōu)于利巴韋林,當其濃度為1mg/mL時,抑制率可達72.86%,培養(yǎng)上清液中病毒含量最低,滴度為10~(-2.80)/0.1mL,對BVDV有極顯著的直接滅活作用(P0.01)。4.采用熒光定量PCR和ELISA檢測方法探究3種藏藥對7種抗病毒相關因子表達水平的影響。RT-PCR結果表明:訶子、矮紫堇、甘青烏頭作用于BVDV感染的細胞后,均能上調(diào)MX-1、PKR、IRF-1、IRF-7、INF-α免疫因子的轉錄,而不上調(diào)IRF-3和IFN-β的轉錄。ELISA試驗結果表明,3種藏藥均能顯著上調(diào)IFN-α的蛋白表達量(P0.05),而對于IFN-β無明顯的調(diào)節(jié)作用。綜上所述,16種藏藥初步篩選出訶子、矮紫堇和甘青烏頭對BVDV有一定的抑制作用,推測這3種藏藥的抗病毒主要效應可能是通過藥物直接滅活游離的BVDV而發(fā)揮作用,其中矮紫堇直接滅活病毒作用最顯著,且抑制效果要優(yōu)于利巴韋林。此外,3種藏藥在抗病毒免疫因子方面均具有一定的調(diào)節(jié)作用。
【學位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S853.7
【圖文】：

圖 2-1 水提法提取的藏藥Fig.2-1 Tibetan medicine extracted by water extraction表 2-1 中藥凍干粉得率Table2-1 The yield of Chinese medicine freeze-dried powder

圖 2-2 MDBK 顯微鏡形態(tài)學觀察Fig.2-2 The microscopic observation of cells morphologyA.100 倍顯微鏡下的細胞形態(tài)；B.200 倍顯微鏡下的細胞形態(tài) MDBK 的 CPE 觀察

圖 2-3 部分藏藥致 MDBK 病變觀察Fig.2-3 The observation of cytopathogenicity caused by partial Tibetan drugsA.16mg/mL 矮紫堇對 MDBK 毒性作用(200×)；B.4mg/mL 矮紫堇對 MDBK 毒性作用(200×)；C. 1mg/mL 矮紫堇對MDBK 毒性作用(200×)；D.正常細胞（200×) ；E.64mg/mL 甘青烏頭對 MDBK 毒性作用(200×)；F.16mg/mL 甘青烏頭對 MDBK 毒性作用(200×)；G.8mg/mL 甘青烏頭對 MDBK 毒性作用(200×)；H.256ug/mL 利巴韋林 MDBK 毒

【參考文獻】

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本文編號：2776536