【摘要】：本研究探討丁酸梭菌液體發(fā)酵龍眼多糖的最佳發(fā)酵工藝以提高丁酸梭菌的活菌量及發(fā)酵液中總多糖的含量,并通過UC小鼠模型來檢驗(yàn)發(fā)酵液對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的藥物干預(yù)作用。第一部分探究了丁酸梭菌與龍眼多糖發(fā)酵的協(xié)同效應(yīng)。先用酶提法提取干龍眼肉的龍眼多糖,然后將龍眼多糖提取液與丁酸梭菌混合發(fā)酵,通過單因素試驗(yàn)分別評(píng)價(jià)了龍眼多糖添加量、接種量、發(fā)酵時(shí)間、初始pH對(duì)丁酸梭菌生長的影響,再根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果設(shè)計(jì)L9(3~4)正交試驗(yàn)以進(jìn)一步優(yōu)化發(fā)酵工藝參數(shù)。結(jié)果表明,丁酸梭菌液體發(fā)酵龍眼多糖的最佳發(fā)酵工藝參數(shù)為:龍眼多糖含量為20%,接種量為3%,發(fā)酵時(shí)間為16h,初始pH為7.0。四個(gè)因素對(duì)發(fā)酵過程的影響順序?yàn)?發(fā)酵時(shí)間初始pH龍眼多糖添加量接種量。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明,發(fā)酵液中丁酸梭菌的活菌量能保持在1.3×10~7cfu/mL以上,且多糖含量與發(fā)酵前相比平均提高了464.65mg/mL。第二部分研究發(fā)酵液對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的藥物干預(yù)作用。先將丁酸梭菌與龍眼多糖在最佳發(fā)酵工藝下發(fā)酵獲得龍眼多糖發(fā)酵液,然后將發(fā)酵液應(yīng)用于UC小鼠模型中,研究龍眼多糖發(fā)酵液對(duì)小鼠體重、結(jié)腸長度、DAL評(píng)分、臨床評(píng)分、結(jié)腸組織,血清中IL-6、IL-10、TNF-α含量、結(jié)腸腸道菌群的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組小鼠體重下降至18.31g,結(jié)腸長度縮短至7.17cm,DAL評(píng)分為3.56,臨床評(píng)分為5.33,組織學(xué)損傷評(píng)分為11.33,而發(fā)酵液組小鼠體重僅下降至21.80g,結(jié)腸長度僅縮短至9.33cm,DAL評(píng)分為1.22,臨床評(píng)分為1.67,組織學(xué)損傷評(píng)分為4.67,且各項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于模型組。ELISA檢測(cè)小鼠血清結(jié)果顯示,模型組IL-6、IL-10和TNF-α的含量分別為34.63 pg/mL、29.71 pg/m L和37.62 pg/mL,而發(fā)酵液組小鼠血清中IL-6、IL-10和TNF-α的含量分別為25.80pg/mL、34.68 pg/mL和31.27pg/m L,與模型組相比均具有顯著性差異。高通量測(cè)序結(jié)果顯示發(fā)酵液顯著抑制了小鼠結(jié)腸中致病菌屬螺桿菌屬的相對(duì)豐度。本研究得出的結(jié)論為丁酸梭菌與龍眼多糖發(fā)酵具有協(xié)同效應(yīng),即龍眼多糖能促進(jìn)丁酸梭菌的生長,丁酸梭菌發(fā)酵龍眼多糖后可以增加發(fā)酵液中的多糖含量。同時(shí)龍眼多糖發(fā)酵液對(duì)DSS誘導(dǎo)的UC小鼠具有一定的保護(hù)作用,其作用機(jī)制一方面可能與其增強(qiáng)抑炎因子并抑制促炎因子產(chǎn)生的抗炎效果有關(guān),另一方面可能與其通過抑制致病菌屬螺桿菌屬的相對(duì)豐度來維持腸道菌群的平衡有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S816
【圖文】：

研究采用多糖分析中常用的苯酚-硫酸法(Albalasmeh et al., 201的含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作確稱量干燥的葡萄糖100mg，用去離子水溶解并定容于100mL容g/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。用移液槍分別精確地吸取 0，100，200，300μL 的 1mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液于 10mL 容量瓶中定容，搖勻，度（0，10，20，30，40，50，60μg/mL）的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 2.0 mL 于 10 mL 的試管中，用移液槍依次加入好的 6%苯酚溶液，搖勻，再用移液管依次加入 5.0 mL 濃硫酸勻后放入沸水浴中加熱 25min，再放入冷水浴中，直至冷卻至室光光度計(jì)在 490 nm 處測(cè)定待測(cè)樣品的吸光度(姜瓊等, 2013)。以μg/mL）為橫坐標(biāo)、以每個(gè)濃度相對(duì)應(yīng)下的吸光度（A）為縱坐合后得到線性回歸方程，即標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖 2.2 所示。

圖 2.3 丁酸梭菌菌落形態(tài).3 不同龍眼多糖添加量對(duì)丁酸梭菌生長的影響不同龍眼多糖添加量對(duì)丁酸梭菌生長的影響不同，本試驗(yàn)中，在溫度 37 量 3 %，初始 pH 為 7.0 條件下，研究了不同龍眼多糖添加量（5 %，10%，30 %，40 %）對(duì)丁酸梭菌生長的影響。在發(fā)酵 14h 后，采用稀釋涂布數(shù)法測(cè)定丁酸梭菌活菌量。結(jié)果如圖 2.4 所示，隨著龍眼多糖添加量的丁酸梭菌的活菌量也越來越多。當(dāng)龍眼多糖添加量為 30 % 時(shí)，丁酸梭菌量最多，達(dá)到 1.16×109cfu/mL，且與其他組相比差異極顯著（p<0.01在龍眼多糖添加量為 30 % 時(shí)丁酸梭菌生長的效果最好。而當(dāng)龍眼多糖低于 10 % 時(shí)，丁酸梭菌活菌量比對(duì)照組（龍眼多糖添加量為 0）要低，添加龍眼多糖會(huì)對(duì)原先丁酸梭菌培養(yǎng)基的環(huán)境造成干擾，而當(dāng)龍眼多糖達(dá)到一定比例后才具有促進(jìn)丁酸梭菌生長的效果。因此，在后續(xù)的試驗(yàn)眼多糖添加量暫定為 30 % ，在后面的試驗(yàn)中繼續(xù)優(yōu)化。

圖 2.4 龍眼多糖添加量對(duì)丁酸梭菌生長的影響.（x±SE，n=3）圖中字母相鄰表示差異顯著（p<0.05）, 字母相間表示差異極顯著（p<0.05）, 沒有字母表示差異不顯著, 下圖同

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2776063