【摘要】：彎曲菌病是一種重要的人畜共患病,與人類的日常生活息息相關(guān)。感染彎曲菌病可能會引起腹瀉,小腸結(jié)腸炎,流產(chǎn)以及胎兒死亡。此外,彎曲菌的感染也與一種神經(jīng)性疾病——格林巴利綜合征有關(guān)。彎曲菌通常存在于許多動物的腸道內(nèi),如雞、鴨、鵝等。有研究發(fā)現(xiàn),靈長類動物也可以作為彎曲菌的宿主。猴屬于靈長類動物,具有與人類相似的身體結(jié)構(gòu)、遺傳結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣。在以非人靈長類動物為主的養(yǎng)殖和研究中,彎曲菌的感染可能會導(dǎo)致許多問題,如影響實驗進展,影響非人靈長類動物的生長和繁殖,危害公共環(huán)境,危害與其接觸人員的健康等。因此了解彎曲菌在猴群中的流行,減少彎曲菌的感染和避免不必要的交叉感染,同時采取一些措施來預(yù)防彎曲菌的感染顯得尤為重要。本實驗的研究目的為:(1)調(diào)查彎曲菌在猴群中的分布規(guī)律和流行特點,并探索彎曲菌在不同養(yǎng)殖環(huán)境中的流行規(guī)律;(2)通過跟蹤采樣調(diào)查新生猴成長過程中的彎曲菌的感染規(guī)律及其分離株的流行特征;(3)進一步探索猴源彎曲菌分離株的分子流行病學(xué)特性和耐藥特性。一.不同樣品中及不同養(yǎng)殖模式下彎曲菌的流行狀況從2017年4月至2018年12月,共采集A、B、C三家養(yǎng)殖場共1668份樣品,其中包括1275份猴肛拭樣(剔除重復(fù)采集的樣本數(shù))、371份環(huán)境樣和22份工作人員肛拭樣,共分離到彎曲菌405株,其中空腸彎曲菌82株,結(jié)腸彎曲菌317株,其它彎曲菌6株。猴的彎曲菌陽性率為29.2%。將1275只猴的彎曲菌感染情況樣按被采樣猴的年齡進行分析,以每4歲(48個月)為一個年齡段,彎曲菌陽性率隨猴年齡的增長呈遞減趨勢,且差異顯著(P0.05)。按被采樣猴的性別進行分析,雌性總彎曲菌感染率(32.6%)高于雄性(18.3%),且差異顯著(P0.05)。按被采樣猴的種類進行分析,食蟹猴的彎曲菌感染率(35.6%)顯著高于恒河猴(13.6%)。由于只有A養(yǎng)殖場的猴出現(xiàn)腹瀉癥狀,所以對A養(yǎng)殖場的973只猴子單獨進行分析,腹瀉猴中彎曲菌陽性率(61.7%)高于非腹瀉猴(33.4%),且差異顯著(P0.05)。針對彎曲菌污染狀況較為嚴重的A養(yǎng)殖場285份環(huán)境樣品進行深入分析,共檢測出18株結(jié)腸彎曲菌,彎曲菌陽性都集中在食槽(10.3%)、地面(6.6%)、工作人員鞋底(30.4%)三類環(huán)境樣品中。這樣的結(jié)果說明,猴養(yǎng)殖場彎曲菌的傳播可能與對猴糞便的處理方式有關(guān):A養(yǎng)殖場采用糞便從猴籠落地后,工作人員每天用水管沖刷地面的方式,排泄物隨水流入下水道,所以地面和工作人員的鞋底均可能攜帶彎曲菌,導(dǎo)致彎曲菌通過“糞口途徑”傳播并對猴造成感染。通過深入調(diào)查,我們發(fā)現(xiàn)了養(yǎng)殖場養(yǎng)殖方法上的不同可能是導(dǎo)致彎曲菌感染的重要原因:A養(yǎng)殖場采用糞便落地后人工用水管沖刷的方式處理猴子的排泄物,B養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)員會在籠子下面放置一個裝有玉米芯墊料的鐵盤使猴子的排泄物落在玉米芯墊料上,并每天更換新墊料。此外,食蟹猴和恒河猴養(yǎng)殖方法不同。工作人員采樣大籠群養(yǎng)和小籠獨養(yǎng)相結(jié)合的方法養(yǎng)殖食蟹猴,且由于實驗需要,食蟹猴經(jīng)常需要在兩種籠子中被調(diào)換,這樣的養(yǎng)殖方式無疑增加了猴與猴之間相互接觸的機會,可能也因此造成食蟹猴彎曲菌陽性率較高,而恒河猴全部被單獨分開養(yǎng)在小籠子里。綜上所述,在猴的養(yǎng)殖過程中,猴的養(yǎng)殖方法和對猴排泄物的處理方式是影響彎曲菌傳播的重要因素。二.新生食蟹猴中彎曲菌感染的跟蹤調(diào)查及分析自2017年8月到2018年6月,跟蹤了 10只新生猴的彎曲菌感染情況。新生猴在第1-10周內(nèi)出現(xiàn)彎曲菌感染僅6次,陽性率最低,為6%。其中出現(xiàn)空腸彎曲菌5次,出現(xiàn)結(jié)腸彎曲菌感染1次。第11-20周共出現(xiàn)彎曲菌感染14次,陽性率為14%。其中出現(xiàn)空腸彎曲菌感染6次,出現(xiàn)結(jié)腸彎曲菌感染8次。21周及以后共跟蹤采集肛拭樣品80份,共出現(xiàn)彎曲菌感染28次,陽性率為35%。其中出現(xiàn)空腸彎曲菌10次,結(jié)腸彎曲菌18次。在40周齡前的新生猴中,隨著新生猴的長大,彎曲菌陽性率越來越高,差異顯著(P0.05)。且空腸彎曲菌的比例不斷降低,結(jié)腸彎曲菌的比例不斷升高。從MLST的結(jié)果來看,共測序25株新生猴結(jié)腸彎曲菌分離株,測出7種ST型,優(yōu)勢ST 型主要有 ST-3753、ST-828、novel ST5,占 68%(17/25)。7 種 ST 型中新 ST 型有 5種,共包含13株結(jié)腸彎曲菌,占所測新生猴結(jié)腸彎曲菌總數(shù)的52%(13/25)。在新生猴中新ST型發(fā)現(xiàn)較多且占比較大,據(jù)此猜測是否新生動物的體質(zhì)更適合菌株的基因發(fā)生變化,并產(chǎn)生新的ST型。三.猴源彎曲菌分離株的MLST和耐藥性分析對171株結(jié)腸彎曲菌進行MLST分型研究,共獲得23種不同的ST型,體現(xiàn)了猴源結(jié)腸彎曲菌基因組的多樣性。其中,主要的優(yōu)勢ST型有:ST-1586、ST-829、ST-3023、ST-1096,占所測分離株總數(shù)的45.6%。另外,分離出11種目前PubMLST庫中未曾出現(xiàn)的新ST型,新ST型共包含38株分離株,占所測分離株總數(shù)的22.2%。其中,17株環(huán)境樣品結(jié)腸彎曲菌分離株共有11種ST型,與猴肛拭樣分離株中126株結(jié)腸彎曲菌的ST型匹配,占分離株總數(shù)的81.8%。此外,黏附侵襲實驗表明,菌株的粘附侵襲能力與其ST型不存在顯著的對應(yīng)關(guān)系。為了評估抗生素使用對猴場彎曲菌耐藥的影響,對35株空腸彎曲菌分離株和79株結(jié)腸彎曲菌分離株進行針對12種抗生素的藥敏實驗。結(jié)果表明空腸彎曲菌(82.86%)和結(jié)腸彎曲菌(89.87%)的分離株都表現(xiàn)出對環(huán)丙沙星的高度耐藥。114株彎曲菌分離株中共出現(xiàn)104株多重耐藥菌株,共包含43種多重耐藥表型。35株空腸彎曲菌中27株菌有多重耐藥表型,其中耐2抗菌株占彎曲菌數(shù)總數(shù)的40%�？漳c彎曲菌中多重耐藥譜型CIP-LEV(環(huán)丙沙星-左氧氟沙星)的菌株數(shù)目最多,占空腸彎曲菌總數(shù)的18.5%。結(jié)腸彎曲菌中多重耐藥菌株有77株,其中以耐4抗、5抗和6抗的表型為主,占結(jié)腸彎曲菌總數(shù)的64.6%,其中耐藥譜型為CIP-P-LEV-CRO-CTX-S(環(huán)丙沙星-青霉素-左氧氟沙星-頭孢曲松-頭孢噻肟-鏈霉素)和CIP-P-E-AZM-LEV(環(huán)丙沙星-青霉素-紅霉素-阿奇紅霉素-左氧氟沙星)的菌株最多,分別占結(jié)腸彎曲菌總數(shù)的13.0%和10.4%。與空腸彎曲菌相比,結(jié)腸彎曲菌的多重耐藥現(xiàn)象較為嚴重。在檢測的12種抗生素中,對空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌敏感性都在80%以上的抗生素包括慶大霉素、阿莫西林,這2種抗生素可考慮用于猴養(yǎng)殖場中彎曲菌感染的防控。
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.9
【圖文】：

如表１－６所示，由于只有Ａ養(yǎng)殖場的猴出現(xiàn)腹瀉癥狀，所以對Ａ養(yǎng)殖場９７３只猴子單逡逑獨進行分析，腹瀉猴中彎曲菌陽性率（６１．７％）氋于非腹瀉猴（３３．４％），且差異顯著（Ｐ＜０．０５）。逡逑如圖１－２所示，腹瀉猴所感染的彎曲菌中結(jié)腸彎曲菌所占比率（８９．６６％）高于非腹瀉猴＞斤逡逑感染的彎曲菌中結(jié)腸彎曲菌所占比率（７６．３８％）。邐；－逡逑表１－６不同健康狀況的猴中彎曲菌分離情況逡逑邐Ｔａｂｌｅ邋１＿６邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｐｅｃｉｅｓ邋ｏｆ邋Ｃｆｌ／ｗｐｙ／ｏｆｅｆｌｅ／ｇｒ邋ｆｒｏｍ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｐｈｙｓｉｃａｌ邋ｓｔａｔｕｓ邐逡逑陽性樣品數(shù)（陽性率）逡逑是否腹瀉邐總數(shù)邋邐逡逑空腸彎曲菌邐結(jié)腸彎曲菌邐其它彎曲菌邐合計逡逑非腹瀉邐９２６邐６７邋（７．２％）邐２４９邋（２６．９％）邐６邋（０．６％）邐３０９邋（３３．４％）逡逑腹瀉邐４７邐３邋（６．４％）邐２７（５７．４％）邐０（０％）邐２９（６１．７％）逡逑由于存在少數(shù)同時感染兩種彎曲菌的個體，所以空腸彎曲菌、結(jié)腸彎曲菌和其它彎曲菌之和會稍大于合逡逑計的個體數(shù)。逡逑

Ｆｉｇ邋２－１邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ邋ｉｎ邋ｎｅｗｂｏｒｎ邋ｍｏｎｋｅｙｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ａｇｅｓ逡逑２．２新生猴結(jié)腸彎曲菌分離株的ＭＬＳＴ分型結(jié)果與分析逡逑如圖２－２所示，共測序２５株新生猴結(jié)腸彎曲菌分離株（新生猴都為食蟹猴），包含７逡逑種邋ＳＴ邋型，優(yōu)勢邋ＳＴ邋型主要有邋ＳＴ－３７５３、ＳＴ－８２８、ｎｏｖｅｌＳＴ５，占邋６８％邋（１７／２５）。７邋種邋ＳＴ邋型逡逑中新ＳＴ型有５種，共包含１３株結(jié)腸彎曲菌，占所測新生猴結(jié)腸彎曲菌總數(shù)的５２％（１３／２５）。逡逑ＳＴ－３７５３和ＳＴ－８２８同屬于同源復(fù)合體ＳＴ－８２８，兩個ＳＴ型間遺傳距離較近，只相差一個等逡逑位基因值，屬于該同源復(fù)合體的分離株共１２株，占４８％，其它ＳＴ型未被分配同源復(fù)合體。逡逑

－５３邐孔科飼養(yǎng)猴彎曲菌流行病學(xué)調(diào)g胺擲脛輳?fù)Ｌ言、镍r┨卣鞣治齬膊獬雋隋澹保敝幟殼骯剩停蹋櫻鑰庵形叢魷值模櫻孕�，以ｎｅP觶澹戾澹櫻藻澹ㄐ攏櫻孕停┎罰保泵攏櫻孕凸玻常鋼輳妓夥擲脛曜蓯模玻玻玻�。１０粥崣言型：言－１０９６、言－１�(dān)福丁㈠義希櫻裕保罰叮貳ⅲ櫻裕玻罰常�、言－３０２觫言－３ＡP擔(dān)場ⅲ櫻裕擔(dān)保玻場ⅲ櫻裕福玻浮ⅲ櫻裕福玻�、言－８�(dān)村逋粲詬鐾錘春咸澹ǎ悖歟錚睿幔戾澹悖錚恚穡歟澹澹茫�，指遗传学上具有相箙Q緣幌嗤南婦希涸錘春咸澹櫻裕福玻福妓夥擲脛曜蓯模罰保梗�，剩下的１３粥崣言型未杯h(huán)峙渫錘春咸濉ｅ義賢粲諭煌錘春咸宓模櫻孕圖湟糯嗬虢轄�。辶x

本文編號：2771975