【摘要】：背景:帶科絳蟲(chóng)(Taeniidae)主要包含兩個(gè)有效屬,即帶屬(Taenia)(Linnaeus,1758)和棘球?qū)?Echinococcus)(Rudolphi,1801)。因?yàn)樵谛螒B(tài)、發(fā)育特征和基因組成方面具有顯著的相似性,因此棘球?qū)俳{蟲(chóng)是單源的(monophyletic)。棘球?qū)僦辽侔?個(gè)種,而帶屬包括近50個(gè)種。棘球?qū)俳{蟲(chóng)是以食肉動(dòng)物為終末宿主的小型腸道寄生蟲(chóng)。細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的中絳期幼蟲(chóng)引起囊型包蟲(chóng)病,其特征是在人類(lèi)或其他中間宿主體內(nèi)形成生長(zhǎng)周期很長(zhǎng)的包囊。囊型包蟲(chóng)病在全球范圍內(nèi)廣泛分布,在廣大牧區(qū)仍然高度流行。囊型包蟲(chóng)病CE被列為人類(lèi)最嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病之一,是世界衛(wèi)生組織(WHO)優(yōu)先報(bào)告的17種被忽視的熱帶病之一。大量報(bào)道顯示,因該病可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,威脅人類(lèi)健康,人類(lèi)也在努力嘗試通過(guò)阻斷蟲(chóng)卵從狗傳播給人類(lèi)或食草動(dòng)物從而破壞其生活史循環(huán)。此外,帶屬的泡狀帶絳蟲(chóng)也是以犬等犬科動(dòng)物作為最終宿主,而其幼蟲(chóng)階段感染動(dòng)物非常廣泛,包括家畜、如山羊、綿羊和豬。由于囊尾蚴病造成了很大的獸醫(yī)和經(jīng)濟(jì)損失,因此,與其他絳蟲(chóng)(如棘球?qū)俳{蟲(chóng))一樣,已有研究發(fā)現(xiàn)帶屬絳蟲(chóng)也存在種內(nèi)變異。在非洲,很少有關(guān)于泡狀帶絳蟲(chóng)的流行病學(xué)和分布的研究,而種群之間遺傳變異的研究報(bào)更少。使用純化的寄生蟲(chóng)分泌代謝物和重組蛋白構(gòu)建的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是檢測(cè)人和動(dòng)物棘球蚴病的最可靠的方法。為了克服細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的粗提抗原或部分純化抗原的交叉反應(yīng)性問(wèn)題,一些重組蛋白得到表達(dá)并評(píng)價(jià)了其作為診斷靶標(biāo)的價(jià)值。本研究,我們使用重組蛋白EgEpC1和EgP-29作為包被蛋白來(lái)檢測(cè)綿羊棘球蚴病的感染�；贜CBI中的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物,然后分別用總RNA的RT-PCR擴(kuò)增這兩個(gè)蛋白編碼基因的開(kāi)放閱讀框(ORF)。構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-30a,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)細(xì)菌培養(yǎng)6h后表達(dá)目的蛋白。通過(guò)Ni螯合親和層析純化重組EpC1和P-29蛋白,然后用于構(gòu)建間接ELISA方法,再通過(guò)綿羊棘球蚴病陽(yáng)性血清和陰性血清樣品評(píng)估。此外,為了研究泡狀帶絳蟲(chóng)物種的遺傳變異規(guī)律,我們收集了蘇丹的11株綿羊來(lái)源細(xì)頸囊尾蚴囊尾蚴樣品,基于NADH脫氫酶亞基1線粒體基因(nad1)序列進(jìn)行分析。結(jié)果:利用兩個(gè)重組蛋白建立的間接ELISA方法的敏感性和特異性分別為64.7%、69.04%(EpC1),28.67%、51.16%(P-29)。另外,11個(gè)細(xì)頸囊尾蚴分離株的nad1基因與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的基因的相似性為99%。nad1核苷酸序列(764bp)的序列比對(duì)顯示有4個(gè)突變位點(diǎn)。單倍型多樣性為0.345±0.172,而核苷酸多樣性(π)為0.00114±0.00059。研究發(fā)現(xiàn)3個(gè)單倍型,占整個(gè)種群?jiǎn)伪扼w數(shù)的81.8%。與其他國(guó)家分離株相比,蘇丹泡狀帶絳蟲(chóng)的幼蟲(chóng)分離株具有不同的單倍型。結(jié)論:本研究評(píng)估了兩種抗原(EpC1和P-29)檢測(cè)綿羊棘球蚴病的能力。由于有關(guān)于非洲泡狀帶絳蟲(chóng)遺傳變異的研究很少,本研究首次對(duì)蘇丹細(xì)頸囊尾蚴進(jìn)行了分子鑒定和遺傳變異分析,為未來(lái)蘇丹泡狀帶絳蟲(chóng)種群的分子進(jìn)化研究提供了有用的數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S858.26

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本文編號(hào)：2771346