【摘要】：背景:帶科絳蟲(Taeniidae)主要包含兩個有效屬,即帶屬(Taenia)(Linnaeus,1758)和棘球?qū)?Echinococcus)(Rudolphi,1801)。因為在形態(tài)、發(fā)育特征和基因組成方面具有顯著的相似性,因此棘球?qū)俳{蟲是單源的(monophyletic)。棘球?qū)僦辽侔?個種,而帶屬包括近50個種。棘球?qū)俳{蟲是以食肉動物為終末宿主的小型腸道寄生蟲。細粒棘球絳蟲的中絳期幼蟲引起囊型包蟲病,其特征是在人類或其他中間宿主體內(nèi)形成生長周期很長的包囊。囊型包蟲病在全球范圍內(nèi)廣泛分布,在廣大牧區(qū)仍然高度流行。囊型包蟲病CE被列為人類最嚴重的寄生蟲病之一,是世界衛(wèi)生組織(WHO)優(yōu)先報告的17種被忽視的熱帶病之一。大量報道顯示,因該病可造成巨大經(jīng)濟損失,威脅人類健康,人類也在努力嘗試通過阻斷蟲卵從狗傳播給人類或食草動物從而破壞其生活史循環(huán)。此外,帶屬的泡狀帶絳蟲也是以犬等犬科動物作為最終宿主,而其幼蟲階段感染動物非常廣泛,包括家畜、如山羊、綿羊和豬。由于囊尾蚴病造成了很大的獸醫(yī)和經(jīng)濟損失,因此,與其他絳蟲(如棘球?qū)俳{蟲)一樣,已有研究發(fā)現(xiàn)帶屬絳蟲也存在種內(nèi)變異。在非洲,很少有關(guān)于泡狀帶絳蟲的流行病學(xué)和分布的研究,而種群之間遺傳變異的研究報更少。使用純化的寄生蟲分泌代謝物和重組蛋白構(gòu)建的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)是檢測人和動物棘球蚴病的最可靠的方法。為了克服細粒棘球絳蟲的粗提抗原或部分純化抗原的交叉反應(yīng)性問題,一些重組蛋白得到表達并評價了其作為診斷靶標的價值。本研究,我們使用重組蛋白EgEpC1和EgP-29作為包被蛋白來檢測綿羊棘球蚴病的感染。基于NCBI中的核苷酸序列設(shè)計引物,然后分別用總RNA的RT-PCR擴增這兩個蛋白編碼基因的開放閱讀框(ORF)。構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-30a,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)細菌培養(yǎng)6h后表達目的蛋白。通過Ni螯合親和層析純化重組EpC1和P-29蛋白,然后用于構(gòu)建間接ELISA方法,再通過綿羊棘球蚴病陽性血清和陰性血清樣品評估。此外,為了研究泡狀帶絳蟲物種的遺傳變異規(guī)律,我們收集了蘇丹的11株綿羊來源細頸囊尾蚴囊尾蚴樣品,基于NADH脫氫酶亞基1線粒體基因(nad1)序列進行分析。結(jié)果:利用兩個重組蛋白建立的間接ELISA方法的敏感性和特異性分別為64.7%、69.04%(EpC1),28.67%、51.16%(P-29)。另外,11個細頸囊尾蚴分離株的nad1基因與GenBank數(shù)據(jù)庫中的基因的相似性為99%。nad1核苷酸序列(764bp)的序列比對顯示有4個突變位點。單倍型多樣性為0.345±0.172,而核苷酸多樣性(π)為0.00114±0.00059。研究發(fā)現(xiàn)3個單倍型,占整個種群單倍體數(shù)的81.8%。與其他國家分離株相比,蘇丹泡狀帶絳蟲的幼蟲分離株具有不同的單倍型。結(jié)論:本研究評估了兩種抗原(EpC1和P-29)檢測綿羊棘球蚴病的能力。由于有關(guān)于非洲泡狀帶絳蟲遺傳變異的研究很少,本研究首次對蘇丹細頸囊尾蚴進行了分子鑒定和遺傳變異分析,為未來蘇丹泡狀帶絳蟲種群的分子進化研究提供了有用的數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.26

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本文編號：2771346