【摘要】：精子的冷凍保存、卵母細(xì)胞的體外成熟和胚胎體外培養(yǎng)是人工繁育動(dòng)物的技術(shù)基礎(chǔ)。提高精子冷凍后的活力、提升體外卵母細(xì)胞成熟和體外生產(chǎn)胚胎質(zhì)量,對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)有重要意義。褪黑素(melatonin,MT)主要由松果腺合成,與生殖行為和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)密切相關(guān)。褪黑素及其代謝產(chǎn)物可以直接清除活性氧,使谷胱甘肽的水平增加,抑制細(xì)胞內(nèi)促氧化酶活性。褪黑素是減少細(xì)胞氧化損傷最有效的物質(zhì)之一。本文通過(guò)在培養(yǎng)液中添加褪黑素,對(duì)其在精子冷凍、卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精胚胎發(fā)育過(guò)程中的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果如下:1.選取3頭安格斯牛(n1、n2、n3)采精,在其精液冷凍稀釋液里添加不同濃度MT(0、10~(-3)、10~(-4)和10~(-5)M),研究MT對(duì)精子活力、質(zhì)膜完整性、線粒體膜完整性、頂體完整性以及在冷凍過(guò)程中產(chǎn)生的ROS水平差異。研究發(fā)現(xiàn),10~(-3)M和10~(-4)M MT處理組對(duì)安格斯牛的精子的活力、質(zhì)膜、線粒體膜完整性都有顯著性提高。添加10~(-3)M MT后,精子的頂體完整性比對(duì)照組顯著提高,且使精液的ROS水平降低約2倍。因此,在冷凍精液的過(guò)程中,添加10~(-3)M MT為最佳濃度。2.研究不同濃度MT(0、10~(-7)、10~(-8)、10~(-9)和10~(-10)M)對(duì)卵母細(xì)胞成熟的影響和MT對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的影響。與對(duì)照組相比,添加10~(-7)M MT對(duì)卵母細(xì)胞的成熟率有顯著提高,并能使ROS水平降低2.4倍。3.在體外培養(yǎng)液中添加10~(-7)M MT,能顯著提高胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚細(xì)胞數(shù)。同時(shí),在此過(guò)程中檢測(cè)8-cell的ROS水平,MT處理8-cell能使ROS水平降低1.6倍;與對(duì)照組相比,10~(-7)M MT能顯著提高在胚胎(8-cell)發(fā)育過(guò)程中的抗氧化、抗調(diào)亡基因(CAT、BCL-2)和發(fā)育相關(guān)基因(C23、MFN1)的表達(dá),降低促調(diào)亡(Caspase-3、BAX)基因的表達(dá)。綜上所述,本文較為系統(tǒng)地研究了褪黑素對(duì)安格斯牛精液冷凍、卵母細(xì)胞成熟、體外受精以及體外胚胎發(fā)育的影響,不同濃度的褪黑素所起的作用有差異。添加10~(-3)M MT對(duì)精液冷凍效果最佳;添加10~(-7)M MT可以顯著提高卵母細(xì)胞成熟率和受精胚胎發(fā)育率。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S823
【圖文】：

圖 1. 1 在冷凍過(guò)程中，降溫的速率對(duì)細(xì)胞冷凍影響示意圖[9]atic diagram of the effect of cooling rate on cell freezing during freezin的氧化作用

圖 1.2 褪黑素在脊椎動(dòng)物中的經(jīng)典生物合成途徑；1-色氨酸脫羧酶；AANAT，芳基烷基胺 N-乙酰轉(zhuǎn)移酶；ASMT，乙酰血褪黑素脫乙酰酶；虛線表示褪黑素乙酰色氨酸 O-甲基轉(zhuǎn)移酶的次要途徑；合成[22]

冷凍精液精子活率的影響（ab 代表與對(duì)照組相比結(jié)果提高 p>0.0相比結(jié)果有差異 P<0.05）latonin on bovine frozen-thawed sperm motility.(ab represents improv>0.05), c represents a difference between the results of the control grocontrol group P<0.05).精子活力進(jìn)行了整體評(píng)價(jià)，結(jié)果如下：10-3M、10-4M 和，10-3M MT 和 10-4M MT 顯著高于對(duì)照組（55.53%、53M MT、10-4M MT 之間差異并不顯著（P>0.05，詳細(xì)結(jié)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李曉霞;劉燕;曹平華;韓文霞;姚昱君;祝蕊;禹學(xué)禮;;褪黑素在牛卵母細(xì)胞體外受精中的抗氧化作用[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2015年07期

2 李曉霞;曹平華;禹學(xué)禮;栗穎華;;添加褪黑素對(duì)牛精液品質(zhì)的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年04期

3 余敏;李紅;全松;;凋亡相關(guān)因子在早期胚胎發(fā)育中的作用機(jī)制[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2011年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 孫業(yè)清;褪黑素對(duì)牛精液品質(zhì)、卵母細(xì)胞體外成熟及體外發(fā)育能力影響的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 段發(fā)亮;表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、褪黑素（Melatonin）對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和遷移的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

本文編號(hào)：2771081