【摘要】：香豬是主產(chǎn)于貴州的地方豬種資源,也是世界上優(yōu)秀的豬種資源之一,具有較高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟效益,廣受關(guān)注。本文以香豬高產(chǎn)仔和低產(chǎn)仔群體為研究對象,利用Illumina HiSeq 2000轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),比較兩個群體發(fā)情期卵巢基因表達差異,選擇與類固醇激素合成相關(guān),且轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果差異顯著的8個基因,采用qRT-PCR,BSP-PCR技術(shù)等方法,進行基因表達定量的驗證。啟動子結(jié)構(gòu)差異和甲基化修飾表觀遺傳學(xué)研究;目的在于了解影響香豬類固醇激素合成基因表達差異的分子機制,以期對香豬進行合理開發(fā)和科學(xué)保護提供分子理論基礎(chǔ)。通過研究獲得了下列結(jié)果:1.從香豬卵巢組織cDNA文庫中通過熒光定量PCR擴增出8個差異表達的基因,高、低產(chǎn)香豬卵巢8個基因的表達量存在差異表達,高產(chǎn)群體表達量顯著高于低產(chǎn)群體,實時熒光定量PCR結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序一致,1-3月卵巢8個基因的表達量逐漸增加。2.從香豬卵巢基因組中克隆差異表達基因的啟動子區(qū)域,經(jīng)生物信息學(xué)分析,存在TATA box,CAAT box,CG box,Octamer特征結(jié)構(gòu)。SCARB1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游1200 bp處有C/G多態(tài)性,LDLR基因轉(zhuǎn)錄起始點上游376 bp處存在G/T多態(tài)性,CYP11A1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游69 bp處存在C/T多態(tài)性,CYP17A1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游130 bp處存在T/C多態(tài)性,StAR基因轉(zhuǎn)錄起始點上游554 bp處存在A/G多態(tài)性、155 bp處存在C/T多態(tài)性,AKR1C1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游261bp處存在T/C多態(tài)性,HSD3B1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游300 bp處存在T/C多態(tài)性。以上這些SNP位點位于基因啟動子轉(zhuǎn)錄起始關(guān)鍵位置,影響轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合,可能影響基因轉(zhuǎn)錄效率,可能是基因表達量差異的原因之一。3.高、低產(chǎn)香豬卵巢HSD3B1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游78 bp處存在CpG2甲基化位點,該位點為轉(zhuǎn)錄起始的核心啟動子CAAT box區(qū)域,CpG2位點的甲基化頻率與表達量之間的相關(guān)系數(shù)為0.724,中等程度相關(guān)。檢測到低產(chǎn)香豬甲基化頻率高于高產(chǎn)香豬,可能影響基因轉(zhuǎn)錄效率,影響HSD3B1基因表達。綜上所述,高、低產(chǎn)香豬卵巢類固醇激素合成7個基因的表達差異可能與基因啟動子轉(zhuǎn)錄起始關(guān)鍵位置的SNP多態(tài)性有關(guān),及與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合元件的結(jié)構(gòu)差異相關(guān);HSD3B1基因轉(zhuǎn)錄起始點上游78 bp處甲基化頻率可能影響轉(zhuǎn)錄效率,可能影響基因表達,進一步引起香豬產(chǎn)仔數(shù)的變化。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S828
【圖文】：

州大學(xué) 2018屆碩士研究生學(xué)位論3 結(jié) 果RNA 的提取與檢測取的基因組 DNA，用移液使用 0.8 %瓊脂糖凝膠中進行析 DNA 含量在 100 ng/μL可用于 PCR 擴增基因啟動

3.1 瓊脂糖凝膠檢測基因組 Don of genomic DNA by agarose g織的 RNA，從 1.2%的甲醛較好，28S、18S 條帶均清～1.87 之間，說明提取的

大學(xué) 2018屆碩士研究生學(xué)位片段測序與標準曲片段克隆測序與分析因，進行差異表達基因的板，對 GAPDH 基因 c期大小相近，條帶清晰；克隆測序。接轉(zhuǎn)化，進行菌落 PCR組菌測序；對測序結(jié)果進的 XM_021091114.1 序列PDH mRNA序列及轉(zhuǎn)錄

【參考文獻】

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本文編號：2764807