【摘要】：禽白血病(avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)所引起的一種傳染性禽類腫瘤性疾病。ALV屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae)α反轉(zhuǎn)錄病毒屬(Retrovirus)的一類病毒群。雞只感染ALV后可發(fā)生多種腫瘤性疾病,但大多數(shù)受感染的雞只發(fā)生亞臨床癥狀,如生長遲緩、免疫抑制或產(chǎn)蛋下降等,給養(yǎng)禽業(yè)帶來的經(jīng)濟損失是巨大的。近年來,廣西憑祥斗雞養(yǎng)殖業(yè)興起,飼養(yǎng)量較多,但很少有對其進行ALV感染的檢測以及病原的研究。因此開展斗雞的流行病學檢測以及代表性分離株的全基因序列測定與分析,對于了解斗雞的ALV感染狀況,豐富和完善各種禽類AL的流行病學資料以及對廣西這一特有品種開展凈化和防控奠定基礎(chǔ)。因缺乏有效的治療藥物和疫苗,目前對于ALV感染的防控主要是通過種群的凈化,目前在凈化中常采用ELISA方法檢測ALV的群特異性抗原P27來淘汰陽性雞只,但該方法存在檢測的操作步驟繁雜、時間長、需要專門的儀器等不足,因此探索一種操作簡便、檢測時間短,可大規(guī)進行模檢測而且特異、敏感的方法就成為養(yǎng)殖公司凈化工作的急需。課題對憑祥市目前規(guī)模最大的一家目前最大規(guī)模的斗雞養(yǎng)殖場的61只斗雞種雞采集了其無菌血漿和肛拭子樣品,將血漿樣品接種于DF-1細胞進行培養(yǎng),然后分別用ELISA試劑盒檢測其細胞培養(yǎng)上清及對應雞只的肛拭子樣品。結(jié)果顯示,61份病毒細胞培養(yǎng)上清的ALV-p27抗原陽性率為18%(11/61)、肛拭子的陽性率為44.3%(27/61);對其中獲得的三個分離毒株GX18PX01、GX18PX02和GX18PX03進行了全基因擴增、序列測定和比較分析,結(jié)果顯示分離株GX18PX01、GX18PX02的gp85序列與ALV-B參考株的同源性是90.9%,屬于B亞群;分離株GX18PX03的gp85序列與ALV-A參考株的同源性是97.1%,屬于A亞群;同時,分離株GX18PX01、GX18PX02和GX18PX03的U3區(qū)序列均與ALV-J參考株的同源性最高,分別為94.0%、94.4%和96.3%,而與C、D、E、K亞群的同源性則均低于85%。據(jù)此推斷,三個分離株均屬重組病毒,其中GX18PX01、GX18PX02是ALV-B亞群毒株重組了ALV-J的U3序列,而GX18PX03則是ALV-A亞群毒株重組了ALV-J的U3序列。本課題比較了膠體金試紙條與ELISA試劑盒檢測ALV-p27抗原的靈敏度和特異性。選取經(jīng)ELISA試劑盒檢測已經(jīng)知道其S/P值的100份細胞培養(yǎng)上清和100份胎糞樣品,平行使用膠體金試紙條進行檢測,其中S/P值在0.099及以下的樣品10份、S/P值在0.1-0.19間的樣品30份、S/P值在0.2-0.29間的樣品30份、S/P值在0.3-0.49間的樣品20份、S/P值在0.5及以上的樣品10份。結(jié)果顯示,無論是細胞培養(yǎng)上清還是胎糞樣品,S/P值在≤0.099和≥0.5的樣品(各10份),兩種方法的檢測結(jié)果均一致:前者為陰性、后者為陽性;在細胞培養(yǎng)上清的檢測中,S/P值在0.1-0.19、0.2-0.29、0.3-0.49三個區(qū)間的樣品,膠體金試紙條與ELISA試劑盒檢測結(jié)果的一致性分別為60%、66.7%和85%;在胎糞的檢測中,ELISA試劑盒檢測S/P值在0.1-0.19、0.2-0.29、0.3-0.49三個區(qū)間的樣品,膠體金試紙條與ELISA試劑盒檢測結(jié)果的一致性分別為46.7%、63.3%和75%。膠體金試紙條檢測結(jié)果為陽性的樣品,ELISA試劑盒檢測結(jié)果也同樣呈陽性。結(jié)果表明,膠體金試紙條檢測具有很好的特異性,靈敏度低于ELISA試劑盒,但它具有操作簡便、檢測時間短且不需要專門儀器設(shè)備的優(yōu)點。本課題的研究結(jié)果證明,廣西憑祥斗雞存在較高水平的ALV感染,且存在多個亞群的感染,分離的代表性毒株為重組病毒;膠體金試紙條檢測ALV-p27抗原的敏感性雖然較低,但是更加適用于現(xiàn)場大規(guī)模樣品的快速檢測。
【學位授予單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.31
【圖文】：

的致病性和致瘤性比其他亞群的病毒更強，正是由于ｅｎｖ基因的差異性［４８］。禽白血病的逡逑病毒亞群特異性的ｇｐ８５表面蛋白（ｓｕｒｆａｃｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＵ）和ｇｐ３７跨膜蛋白（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ逡逑ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＴＭ）也是由ｅ？ｖ基因編碼決定。圖１－２展示了病毒粒子結(jié)構(gòu)和組成的模式圖。逡逑４逡逑

１．１．４．１病毒的形態(tài)逡逑在感染細胞的超薄切片中，通過電鏡觀察染色后的禽白血病病毒粒子，可以比較清逡逑楚地觀察到病毒基本為球形，半徑為４５－７２．５ｎｍ邋（圖１－３Ａ）。病毒粒子由里到外依次是逡逑位于中央的核芯、中層膜、外層膜以及外膜表面的纖突［１，４９］（圖１－３Ｂ）。逡逑圖１－３禽白血病病毒粒子逡逑ＡＡＬＶ感染ＣＥＦ超薄切片（李成拍攝）；Ｂ禽白血病病毒粒子形態(tài)逡逑Ｆｉｇ．１－３邋Ｖｉｒｉｏｎ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ａｖｉａｎ邋ｌｅｕｋｏｓｉｓ邋ｖｉｒｕｓ逡逑Ａ邋Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ邋ｊ＾Ｌｔｒａｔｈｉｎ邋ｓｌｉｃｅｓ邋ｏｆ邋ＣＥＦ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋ＡＬＶ邋（ｐｈｏｔｏｅｄ邋ｂｙ邋Ｃｈｅｎｇ邋Ｌｉ）邋；邋Ｂ邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ａｖｉａｎ逡逑ｌｅｕｋｏｓｉｓ邋ｖｉｒｕｓ逡逑１．１．４＿２邋ＡＬＶ的理化特性逡逑５逡逑

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【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高躍飛;;禽白血病的診斷與防治[J];當代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2015年12期

2 俞燕;徐步;范建華;高明燕;張笛;沈海玉;孔祥偉;孟凡峰;韋玉勇;龔建森;戴有理;孫淑紅;崔治中;;種公雞精液禽白血病病毒檢測方法研究及初步應用[J];中國家禽;2015年22期

3 楊永立;鐘興福;王培坤;秦麗莉;畢玉_g;鄒廣珍;彭昊;韋平;;2014年廣西地方雞群病毒性腫瘤病例的檢測分析[J];中國家禽;2015年17期

4 韋平;崔治中;;地方品種雞禽白血病和雞白痢的危害及凈化防控的實踐[J];中國家禽;2015年09期

5 崔治中;;我國J亞群禽白血病的防控及其啟示[J];中國家禽;2015年06期

6 王培坤;秦麗莉;畢玉_g;鄒廣珍;彭昊;韋平;;廣西麻雞感染A亞群與J亞群禽白血病病毒的診斷[J];中國家禽;2015年05期

7 秦麗莉;戴錦龍;畢玉_g;王培坤;鄒廣珍;彭昊;韋平;;廣西地方土雞馬立克氏病病毒和J亞群禽白血病病毒混合感染的報告[J];中國家禽;2014年16期

8 畢玉_g;管子言;黃曉姣;黃程;秦麗莉;王培坤;鄒廣珍;韋平;;部分種雞場常用活疫苗中ALV的PCR檢測[J];廣西畜牧獸醫(yī);2014年04期

9 韋平;梁遠東;韋鳳英;;廣西家禽業(yè)生產(chǎn)現(xiàn)狀及我國家禽業(yè)發(fā)展前景探討[J];中國家禽;2013年23期

10 冷畢丹;吳元俊;秦麗莉;王培坤;韋平;;廣西主要地方優(yōu)良品種雞禽白血病的感染情況調(diào)查[J];廣西畜牧獸醫(yī);2013年03期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 李陽;我國地方品系雞群中ALV的流行病學調(diào)查及ALV-K生物學特性的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2017年

2 王一新;兩株攜帶v-fps和v-src腫瘤基因的復制缺陷型急性致瘤病毒的鑒定及其感染性克隆的致腫瘤作用[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2016年

3 成子強;禽白血病病毒J亞群（ALV-J）內(nèi)蒙株的建立及致瘤機理的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2002年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫貝貝;不同日齡SPF雞感染ALV-J后病毒血癥和抗體反應的動態(tài)比較[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2009年

2 何秀苗;應用PCR技術(shù)對雞腫瘤病進行鑒別診斷的研究[D];廣西大學;2001年

本文編號：2758092