發(fā)布時間：2020-07-12 00:27

【摘要】：蜱隸屬于節(jié)肢動物門(Arthropoda)蛛形綱(Arachnida)蜱螨亞綱(Acari)寄螨總目(Parasitiformes)蜱目(Ixodina)蜱總科(Ixodoidea)。分為硬蜱科(Ixodidae)、軟蜱科(Argasidae)和納蜱科(Nuttalliellidae)三個科。蜱寄生于脊椎動物體表并傳播多種病原體,是危害性極強的一類媒介生物。蜱類吸血時造成宿主皮膚局部出血、水腫以及感染,加之蜱類攜帶大量病原微生物,使得蜱類成為僅次于蚊類的第二大危害性極強的吸血節(jié)肢動物。多種蜱傳播的病原體會造成人畜共患,在極大影響畜牧業(yè)發(fā)展的同時,也威脅著人類的健康。本研究涉及的長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)隸屬于硬蜱科(Ixodidae)血蜱屬(Haemaphysalis),廣泛分布于我國,可傳播多種危險病原體,嚴重危害人類健康,因此對其開展相關(guān)研究具有重要的意義。唾液腺作為蜱不可或缺的輔助吸血器官,在蜱整個生命活動中發(fā)揮著重要的作用。伴隨著雌蜱開始吸血,其唾液腺迅速發(fā)育,功能逐步完善。但當雌蜱飽血并從宿主體表脫落后,唾液腺喪失其功能,迅速退化。在此期間唾液腺腺泡發(fā)生自體溶解,大量吞噬泡出現(xiàn)。當雌蜱飽血4天時,其唾液腺退化殆盡直至消失。研究唾液腺退化對于探究蜱唾液腺發(fā)育調(diào)控的生理機制具有重要的意義,尋找促進唾液腺快速退化的蛋白,對于控制蜱類發(fā)育和繁殖具有很大幫助,因此在另一層面上對于控制蜱傳病原體的傳播起到關(guān)鍵作用。本實驗室前期利用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究長角血蜱飽血后唾液腺組織中全部蛋白質(zhì)的動態(tài)變化。但由于iTRAQ技術(shù)對樣品量需求較大等缺點,使得對于小個體樣本難以實現(xiàn)磷酸化富集以及磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)研究。本研究采用可以微量樣本操作,加之較高重現(xiàn)性以及穩(wěn)定性的DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對長角血蜱唾液腺退化過程中蛋白的動態(tài)調(diào)控以及磷酸化修飾變化進行深入研究。研究結(jié)果共鑒定到2226條蛋白,其中差異表達蛋白524條。共鑒定到磷酸化蛋白635條,涉及到的磷酸化位點共1957個。磷酸化修飾出現(xiàn)變化的蛋白共576條蛋白,涉及到的肽段共1431條。運用生物信息學(xué)分析方法對差異表達蛋白以及差異磷酸化修飾位點進行系統(tǒng)分析。通過大量的RNA干擾工作,我們發(fā)現(xiàn)在唾液腺發(fā)育過程維持細胞能量平衡的蛋白AMPK被干擾后雌蜱吸血過程中的唾液腺腺泡與正常雌蜱相比出現(xiàn)了明顯的萎縮,飽血體重、產(chǎn)卵量等均明顯下降。調(diào)節(jié)細胞周期的蛋白CDC37在唾液腺退化過程中的磷酸化修飾出現(xiàn)了明顯下調(diào),我們對饑餓雌蜱中的CDC37進行了RNA干擾,發(fā)現(xiàn)雌蜱吸血過程中的唾液腺也出現(xiàn)了發(fā)育受阻的現(xiàn)象。Hippo能夠促進細胞凋亡,該蛋白在雌蜱唾液腺退化過程中的磷酸化修飾程度出現(xiàn)了明顯上調(diào)。該基因在飽血雌蜱中被干擾后,雌蜱唾液腺退化速度明顯放緩,說明該蛋白具有明顯促進唾液腺退化的功能。本研究致力于探索長角血蜱唾液腺退化過程的分子調(diào)節(jié)機制。研究結(jié)果比較清楚的展示了該過程中蛋白表達的整體動態(tài)變化和磷酸化修飾調(diào)節(jié)的動態(tài)變化,并找到了一些對于調(diào)控唾液腺退化具有重要意義的關(guān)鍵蛋白,為進一步有效控制蜱類發(fā)育和繁殖奠定基礎(chǔ),為蜱類綜合防治提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S852.746
【圖文】：

3.2 實驗數(shù)據(jù)分析與篩選長角血蜱飽血 0 h、12 h、24 h、36 h、48 h 各個時期唾液腺組織鑒定到 主成分分析圖，如圖 2-1 所示，結(jié)果顯示四次生物學(xué)重現(xiàn)性較高，數(shù)據(jù)時期鑒定到的蛋白的定量值計算 CV 值，取 CV 值小于 20%的數(shù)據(jù)，各 60%以上。采用韋恩圖取交集的方法，將五個時期的定量數(shù)據(jù)以 CV 值篩選，再進行韋恩交集篩選。如圖 2-2，五個時期都檢測到的蛋白共 釋信息的的 15 條蛋白，后續(xù)均在 914 條蛋白質(zhì)上進行分析。

血蜱飽血后 0 h、12 h、24 h、36 h、48 h 唾液腺組織中的韋恩交集圖nn analysis of H. longicornis engorged salivary gland 0 h、1248 h identified the proteins表達蛋白熱圖分析時期四次生物學(xué)重復(fù)的定量信息取算術(shù)平均值，對飽血10 h、飽血 36 h : 飽血 0 h、飽血 48 h : 飽血 0 h 時期的差 2-3 所示，很直觀的表現(xiàn)出了蛋白表達的情況。下調(diào)的織的退化，大多數(shù)蛋白的表達量逐漸降低，功能減退，調(diào)，可能在唾液腺退化這個過程中起到促進作用。

3 長角血蜱唾液腺組織全部蛋白質(zhì)差異表達熱圖分析eat map analysis of differential expressed proteins of H. loengorged salivary gland tissue all proteins表表達上調(diào)；藍色代表表達下調(diào)；白色代表表達無差異蛋白聚類分析次生物學(xué)重復(fù)的定量信息取算術(shù)平均值，利用飽血 1 h、飽血 36 h : 飽血 0 h、飽血 48 h : 飽血 0 h 時期的 所示，軟件參數(shù)取 log2 即設(shè)置為上調(diào)大于 0.58 和下調(diào) 4。無差異表達的蛋白有 390 條，有差異表達的蛋白白，從飽血 0 h 到 48 h 呈下降趨勢；Cluster 2 有 91 條r 3 有 183 條蛋白，從飽血 0 h 到 48 h 呈上升趨勢；Clu6 h 呈下降趨勢，36 h 到 48 h 呈上升趨勢。數(shù)據(jù)結(jié)果顯

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本文編號：2751147