【摘要】：蜱隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門(Arthropoda)蛛形綱(Arachnida)蜱螨亞綱(Acari)寄螨總目(Parasitiformes)蜱目(Ixodina)蜱總科(Ixodoidea)。分為硬蜱科(Ixodidae)、軟蜱科(Argasidae)和納蜱科(Nuttalliellidae)三個(gè)科。蜱寄生于脊椎動(dòng)物體表并傳播多種病原體,是危害性極強(qiáng)的一類媒介生物。蜱類吸血時(shí)造成宿主皮膚局部出血、水腫以及感染,加之蜱類攜帶大量病原微生物,使得蜱類成為僅次于蚊類的第二大危害性極強(qiáng)的吸血節(jié)肢動(dòng)物。多種蜱傳播的病原體會(huì)造成人畜共患,在極大影響畜牧業(yè)發(fā)展的同時(shí),也威脅著人類的健康。本研究涉及的長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)隸屬于硬蜱科(Ixodidae)血蜱屬(Haemaphysalis),廣泛分布于我國,可傳播多種危險(xiǎn)病原體,嚴(yán)重危害人類健康,因此對(duì)其開展相關(guān)研究具有重要的意義。唾液腺作為蜱不可或缺的輔助吸血器官,在蜱整個(gè)生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用。伴隨著雌蜱開始吸血,其唾液腺迅速發(fā)育,功能逐步完善。但當(dāng)雌蜱飽血并從宿主體表脫落后,唾液腺喪失其功能,迅速退化。在此期間唾液腺腺泡發(fā)生自體溶解,大量吞噬泡出現(xiàn)。當(dāng)雌蜱飽血4天時(shí),其唾液腺退化殆盡直至消失。研究唾液腺退化對(duì)于探究蜱唾液腺發(fā)育調(diào)控的生理機(jī)制具有重要的意義,尋找促進(jìn)唾液腺快速退化的蛋白,對(duì)于控制蜱類發(fā)育和繁殖具有很大幫助,因此在另一層面上對(duì)于控制蜱傳病原體的傳播起到關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)室前期利用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究長角血蜱飽血后唾液腺組織中全部蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化。但由于iTRAQ技術(shù)對(duì)樣品量需求較大等缺點(diǎn),使得對(duì)于小個(gè)體樣本難以實(shí)現(xiàn)磷酸化富集以及磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)研究。本研究采用可以微量樣本操作,加之較高重現(xiàn)性以及穩(wěn)定性的DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)長角血蜱唾液腺退化過程中蛋白的動(dòng)態(tài)調(diào)控以及磷酸化修飾變化進(jìn)行深入研究。研究結(jié)果共鑒定到2226條蛋白,其中差異表達(dá)蛋白524條。共鑒定到磷酸化蛋白635條,涉及到的磷酸化位點(diǎn)共1957個(gè)。磷酸化修飾出現(xiàn)變化的蛋白共576條蛋白,涉及到的肽段共1431條。運(yùn)用生物信息學(xué)分析方法對(duì)差異表達(dá)蛋白以及差異磷酸化修飾位點(diǎn)進(jìn)行系統(tǒng)分析。通過大量的RNA干擾工作,我們發(fā)現(xiàn)在唾液腺發(fā)育過程維持細(xì)胞能量平衡的蛋白AMPK被干擾后雌蜱吸血過程中的唾液腺腺泡與正常雌蜱相比出現(xiàn)了明顯的萎縮,飽血體重、產(chǎn)卵量等均明顯下降。調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的蛋白CDC37在唾液腺退化過程中的磷酸化修飾出現(xiàn)了明顯下調(diào),我們對(duì)饑餓雌蜱中的CDC37進(jìn)行了RNA干擾,發(fā)現(xiàn)雌蜱吸血過程中的唾液腺也出現(xiàn)了發(fā)育受阻的現(xiàn)象。Hippo能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡,該蛋白在雌蜱唾液腺退化過程中的磷酸化修飾程度出現(xiàn)了明顯上調(diào)。該基因在飽血雌蜱中被干擾后,雌蜱唾液腺退化速度明顯放緩,說明該蛋白具有明顯促進(jìn)唾液腺退化的功能。本研究致力于探索長角血蜱唾液腺退化過程的分子調(diào)節(jié)機(jī)制。研究結(jié)果比較清楚的展示了該過程中蛋白表達(dá)的整體動(dòng)態(tài)變化和磷酸化修飾調(diào)節(jié)的動(dòng)態(tài)變化,并找到了一些對(duì)于調(diào)控唾液腺退化具有重要意義的關(guān)鍵蛋白,為進(jìn)一步有效控制蜱類發(fā)育和繁殖奠定基礎(chǔ),為蜱類綜合防治提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：河北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.746
【圖文】：

3.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析與篩選長角血蜱飽血 0 h、12 h、24 h、36 h、48 h 各個(gè)時(shí)期唾液腺組織鑒定到 主成分分析圖，如圖 2-1 所示，結(jié)果顯示四次生物學(xué)重現(xiàn)性較高，數(shù)據(jù)時(shí)期鑒定到的蛋白的定量值計(jì)算 CV 值，取 CV 值小于 20%的數(shù)據(jù)，各 60%以上。采用韋恩圖取交集的方法，將五個(gè)時(shí)期的定量數(shù)據(jù)以 CV 值篩選，再進(jìn)行韋恩交集篩選。如圖 2-2，五個(gè)時(shí)期都檢測(cè)到的蛋白共 釋信息的的 15 條蛋白，后續(xù)均在 914 條蛋白質(zhì)上進(jìn)行分析。

血蜱飽血后 0 h、12 h、24 h、36 h、48 h 唾液腺組織中的韋恩交集圖nn analysis of H. longicornis engorged salivary gland 0 h、1248 h identified the proteins表達(dá)蛋白熱圖分析時(shí)期四次生物學(xué)重復(fù)的定量信息取算術(shù)平均值，對(duì)飽血10 h、飽血 36 h : 飽血 0 h、飽血 48 h : 飽血 0 h 時(shí)期的差 2-3 所示，很直觀的表現(xiàn)出了蛋白表達(dá)的情況。下調(diào)的織的退化，大多數(shù)蛋白的表達(dá)量逐漸降低，功能減退，調(diào)，可能在唾液腺退化這個(gè)過程中起到促進(jìn)作用。

3 長角血蜱唾液腺組織全部蛋白質(zhì)差異表達(dá)熱圖分析eat map analysis of differential expressed proteins of H. loengorged salivary gland tissue all proteins表表達(dá)上調(diào)；藍(lán)色代表表達(dá)下調(diào)；白色代表表達(dá)無差異蛋白聚類分析次生物學(xué)重復(fù)的定量信息取算術(shù)平均值，利用飽血 1 h、飽血 36 h : 飽血 0 h、飽血 48 h : 飽血 0 h 時(shí)期的 所示，軟件參數(shù)取 log2 即設(shè)置為上調(diào)大于 0.58 和下調(diào) 4。無差異表達(dá)的蛋白有 390 條，有差異表達(dá)的蛋白白，從飽血 0 h 到 48 h 呈下降趨勢(shì)；Cluster 2 有 91 條r 3 有 183 條蛋白，從飽血 0 h 到 48 h 呈上升趨勢(shì)；Clu6 h 呈下降趨勢(shì)，36 h 到 48 h 呈上升趨勢(shì)。數(shù)據(jù)結(jié)果顯

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本文編號(hào)：2751147