【摘要】：ELOVL5(長鏈脂肪酸延伸酶5)是催化花生四烯酸,油酸,十八碳四烯酸,軟脂酸,亞麻酸和二十碳五烯酸延伸反應的限速酶,這些長鏈不飽和脂肪酸(PUFAs)是細胞膜的重要組成成分,并且參與很多重要的信號傳導過程,在生命活動中發(fā)揮著重要作用。研究表明高脂奶牛乳腺組織中的ELOVL5 m RNA水平顯著低于低脂奶牛,ELOVL5負反饋調控脂肪的合成。另外啟動子研究證明小鼠ELOVL5基因是SREBP-1c直接的靶標,在小鼠肝臟中LXR可以通過靶向調控SREBP-1c的表達,間接對ELOVL5基因的表達進行調控。PPARα作為脂代謝關鍵的調控因子,對小鼠的ELOVL5也有調控作用。通過MEGA比對發(fā)現(xiàn),ELOVL5基因的啟動子序列在不同物種間的保守性低,因此很難通過小鼠等的序列信息對牛ELOVL5基因啟動子序列進行注釋。乳脂含量作為牛奶品質的重要衡量標準,人們一直想努力降低牛奶中飽和脂肪酸含量,并提高牛奶中PUFAs的含量,所以“重新”研究奶牛ELOVL5基因的調控機制可能會成為突破口。本研究采用測序的方法鑒定230頭中國荷斯坦奶牛ELOVL5基因啟動子區(qū)域的遺傳多態(tài)性,通過統(tǒng)計學分析遺傳多態(tài)性位點與乳質性狀的關聯(lián)性,并根據(jù)差異顯著的多態(tài)性位點構建牛ELOVL5基因啟動子雙熒光素酶報告載體并轉染牛乳腺上皮細胞,檢測不同基因型的啟動子活性。之后構建牛ELOVL5基因不同截短體啟動子雙熒光素酶報告載體,轉染牛乳腺上皮細胞,根據(jù)截短體啟動子轉錄活性確定基因的核心啟動子序列,以確定鑒定的遺傳多態(tài)性位點相對于核心啟動子的位置。最后通過DNA阻滯電泳(EMSA)鑒定遺傳多態(tài)性位點是否存在核內調控元件與之結合,以及不同基因型與核蛋白的結合活性。結果表明:在奶牛ELOVL5基因啟動子區(qū)域中發(fā)現(xiàn)了7個SNPs、1個單堿基C缺失突變和1個單堿基T插入突變。其中-513Del C中缺失純合突變型的體細胞數(shù)極顯著高于缺失純合突變型、野生型(p0.01),Ins T中野生型產奶量顯著高于插入雜合突變型(p0.05),SNP7g.-9CG中CG基因型體細胞數(shù)顯著高于GG基因型(p0.05)。不同截短體啟動子活性檢測結果顯示牛ELOVL5基因核心啟動子位于-86~+21bp序列內,并且SNP7g.-9CG位于核心啟動子內。雙熒光素酶報告載體檢測結果顯示,SNP6g.-110GA中TT基因型啟動子活性極顯著高于CC基因型(p0.01);-513Del C中單堿基C缺失基因型啟動子活性極顯著高于野生型(p0.01);Ins T中單堿基T插入基因型啟動子活性極顯著高于野生型(p0.01)。EMSA結果顯示SNP6g.-110GA位于核蛋白結合位點內,其中TT基因型與核蛋白的結合活性極顯著高于CC基因型(p0.01)。其它多態(tài)性位點沒有發(fā)現(xiàn)有核蛋白結合。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S823
【圖文】：

第一篇 文獻綜述 第一章 ELOVL5 基因研究進展破壞，只有在整個家族協(xié)調作用下才能保證脂肪酸代謝的正常進行，圖 1.1 形象的描述了每個 ELOVL 家族參與哺乳動物脂肪酸合成過程中的功能[5]。ELOVL1、ELOVL5、ELOVL6 基因在各個組織中均有表達，ELOVL2、ELOVL3、ELOVL4、ELOVL7 基因則表現(xiàn)出明顯的組織表達特異性[5]。所有 ELOVL 蛋白家族成員都包含若干催化碳鏈延伸的氨基酸結構域，這些氨基酸序列在小鼠、大鼠和人中完全保守[7, 24]。

第一篇 文獻綜述 第一章 ELOVL5 基因研究進展義的），另外和非編碼區(qū)域發(fā)生的 SNP 一起，它們可以影響基因的啟動子活性、mRNA 構象的穩(wěn)定性及 mRNA 和蛋白的亞細胞定位，這些都可能是引起基因功能發(fā)生改變的因素。因此，分析基因變異和效應的相關性，可以更好地理解它們對個體的基因功能和性狀的影響[81]。目前多態(tài)性的相關研究主要是集中在編碼區(qū)，也取得了一定進展，如人類鐮刀型細胞貧血癥就是因為一個堿基的改變導致的。據(jù)國際人類基因組研究所報道，20%的非編碼 DNA 是有功能的并且參與基因的調控，因此大約 90%的基因變異是位于編碼區(qū)外并且可能與疾病相關[82]�；虻膯幼幼鳛榛蜣D錄的開關，對基因的調控具有重要意義，但是關于基因啟動子區(qū)域的 SNP 研究還較少。

牛 ELOVL5 基因啟動子區(qū)域 PCR 體系stem of amplificating bovine ELOVL5 gl ） PCR 25μl 94℃ 1.5μl 94℃ 1.5μl 30 個循環(huán) 60℃ 3μl 72℃ 19μl 72℃ DNA 提取果顯示，樣品全基因組 DNA 提取成功圖 1-1。

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 LI Xiang;GAN Zhen Wei;DING Zhen;WU Yi Xia;CHEN Xue Yan;TIAN Hui Min;LIU Guo Liang;YANG Ye Tong;XIE Lin;;Genetic Variants in the ELOVL5 but not ELOVL2 Gene Associated with Polyunsaturated Fatty Acids in Han Chinese Breast Milk[J];Biomedical and Environmental Sciences;2017年01期

2 裴文宇;云杰;榮恩光;楊華;王志鵬;王守志;李輝;王寧;;綿羊Dlx3基因啟動子活性及其多態(tài)性與羊毛品質性狀的關聯(lián)[J];中國農業(yè)科學;2013年03期

相關碩士學位論文 前1條

1 阿如汗;內蒙古白絨山羊角蛋白14（K14）基因啟動子多態(tài)性及其與絨毛性狀關聯(lián)性[D];內蒙古農業(yè)大學;2012年

本文編號：2749645