發(fā)布時間：2020-07-10 10:42

【摘要】：目的:研究抗病毒顆粒對靶動物雞的安全性及其對人工感染雞傳染性支氣管炎的臨床療效,以期為抗病毒新藥的研發(fā)提供依據(jù)。方法:評價抗病毒顆粒對靶動物雞的安全性,選用8日齡健康伊莎褐蛋公雞100只,隨機分為5組,每組20只,設置抗病毒顆粒推薦劑量的1倍劑量組(4 g/L)、3倍劑量組(12g/L)、5倍劑量組(20g/L)和10倍劑量組(40g/L)。4個用藥組持續(xù)飲水給藥5 d,試驗期間,每天觀察記錄雞的精神狀態(tài)、進食情況、二便性狀等一般臨床表現(xiàn),測定試驗前后的增重、臟器指數(shù)、血常規(guī)指標、血清生化指標并觀察組織病理學變化。研究抗病毒顆粒對雞傳染性支氣管炎(IB)的治療作用,選取8日齡伊莎褐蛋公雞360只,隨機分為6組,除空白對照組外,均按照10427EID50IBV第3代雞胚尿囊液滴鼻點眼0.2 mL/只,感染72 h,3個藥物劑量組分別在飲水中按2 g/L水、4g/L水、8g/L水的劑量添加抗病毒顆粒,陽性藥物組按25g/kg飼料添加麻杏石甘散,連續(xù)給藥5d,空白對照組不添加任何藥物,病毒對照組攻毒后不做其他處理。測定各試驗組臨床療效、平均增重、免疫器官指數(shù)、靶器官中IBV N基因表達量、氣管中IFN-β表達量及組織病理學的觀察。結果:1、靶動物安全性試驗中,與空白對照組相比,各組雞的平均增重、臟器指數(shù)、血常規(guī)指標、血清生化指標及組織病理學觀察均無顯著性差異(p0.05)。2、抗病毒顆粒高、中劑量組的總有效率分別為90.00%和86.67%,痊愈率分別為80.00%和76.67%,死亡率分別為10.00%和13.33%,能夠促進雞增重及免疫器官發(fā)育,且顯著改善組織病理變化。3、與病毒對照組相比,抗病毒顆粒各劑量組、麻杏石甘散組氣管、支氣管、肺臟中IBVN基因的表達量均顯著降低(p0.05)。與麻杏石甘散組相比,抗病毒顆粒各組氣管、支氣管、肺臟中IBVN基因的表達量差異不顯著(p0.05),但抗病毒顆粒高、中劑量組均有降低的趨勢。4、與病毒對照組相比,抗病毒顆粒高、中劑量組能顯著誘生IFN-β的表達(p0.05)。與麻杏石甘散組相比,抗病毒顆粒高劑量組能顯著上調IFN-β的表達(p0.05)。結論:1.按抗病毒顆粒推薦劑量的1倍劑量(4g/L)、3倍劑量(12g/L)、5倍劑量(20 g/L)和10倍劑量(40 g/L),持續(xù)飲水給藥5 d,對靶動物雞無毒副作用,臨床使用安全。2.抗病毒顆粒能夠有效治療IB,在感染IBV72h后,按抗病毒顆粒高劑量(8g/L)、中劑量(4g/L),持續(xù)飲水給藥5d,對人工感染IB有顯著的治療作用。
【學位授予單位】：山西農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S859.7
【圖文】：

圖１傳染性支氣管炎病毒粒子結構及基因組模式圖，引自（Ｊａｃｋｗｏｏｄ，邋Ｈａｌｌ，邋ａｎｄ邋Ｈａｎｄｅｌ，邋２０１２；逡逑Ｐｅｒｌｍａｎ邋ａｎｄ邋Ｎｅｔｌａｎｄ，邋２００９）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｔｈｅ邋ｓｔｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ邋ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ邋ｖｉｒｕｓ邋ｖｉｒｉｏｎ邋ａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｅ．逡逑Ｔｈｉｓ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｉｓ邋ｃｉｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋（Ｊａｃｋｗｏｏｄ，邋Ｈａｌｌ，邋ａｎｄ邋Ｈａｎｄｅｌ，邋２０１２；邋Ｐｅｒｌｍａｎ邋ａｎｄ邋Ｎｅｔｌａｎｄ，邋２００９）．逡逑１．２邋ＩＢＶ結構蛋白和功能逡逑ＩＢＶ基因組編碼４種結構蛋白，即纖突蛋白Ｓ邋（Ｓｐｉｋｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋）、膜進白Ｍ逡逑（Ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）、核蛋白邋Ｎ邋（Ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）和小分子膜蛋白邋Ｅ邋（Ｓｍａｌｌ逡逑ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ）。它們與病毒粒子的侵入、組裝與釋放有關。逡逑１．２．１邋Ｓ蛋白逡逑Ｓ蛋白以嵌入的方式存在于病毒囊膜，是高度糖基化的跨膜蛋白，構成病毒逡逑粒子表面的纖狀突起。Ｓ蛋白可與它的受體0２，３唾液酸結合，也可以誘導病毒與逡逑細胞融合［８］。它被宿主細胞蛋白酶裂解產ｚｔ：Ｎ端的Ｓ１蛋白和Ｃ端的Ｓ２蛋白，兩者逡逑之間連接形成Ｓ蛋白單體。ＩＢＶ感染時，Ｓ２蛋白疏水的？端嵌入病毒的囊膜內，逡逑

均無明顯病變。試驗結果表明，抗病毒顆粒對各器官無毒害作用。逡逑３．１．６器官指數(shù)逡逑由圖２可知，各劑量組的心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、肺臟指數(shù)、腎臟逡逑指數(shù)、胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)與空白對照組相比，均無顯著性差異００．０５），且逡逑各劑量組之間也均無顯著性差異（＾＞０．０５）。試驗結果表明

不同程度的咳嗽及氣管Up音。逡逑３．３．２剖檢病變逡逑空白對照組和模型組的剖解典型變化見圖４。山圖４可知，感染雞胸腺、喉頭逡逑有不同程度的出血點，氣管環(huán)內有大量黏液，個別有黃色干酪樣物質附著，肺臟逡逑組織水腫、出血，氣囊渾濁變厚，空白對照組無任何病變。逡逑灥攦Ｉ逡逑圖４剖檢病變逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋４邋Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｈｉｃｋｅｎｓ逡逑３．３．３感染模型ＩＢＶＮ基因的檢測逡逑用合成的ＩＢＶ邋Ｎ基因的引物進行普通ＰＣＲ反應擴增目的基因，�。校茫耶a逡逑物和６邋｜ａＬ邋ＤＮＡ邋Ｍａｒｋｅｒ，使用３％瓊脂糖凝膠電泳檢測目的條帶。結果如圖５所逡逑示，陰性對照組無條帶，病料組在１５４邋ｂｐ處有３條清晰明亮的條帶，１、２、３逡逑分別為模型雞只肺臟、氣管、支氣管擴增出的ＩＢＶＮ基因特異性條帶，無二聚逡逑體和非特異性擴增，且與預期片段大�。ǎ保担矗猓穑┫嘁恢�，證明該引物特異性良逡逑好

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本文編號：2748808