【摘要】：哺乳動物胚胎體外培養(yǎng)體系處于次優(yōu)化水平,胚胎常面臨發(fā)育遲緩的風險。活性氧(Reactive oxygen species,ROS)物質(zhì)生產(chǎn)與清除能力的失衡,將導致小鼠胚胎2-細胞期發(fā)育阻滯等問題。本論文想要從發(fā)育阻滯的分子層面進行研究,旨在探究谷氨酸在小鼠MZT期胚胎體外培養(yǎng)過程中能否起到克服發(fā)育阻滯的作用,以期為從根本上解決因發(fā)育阻滯導致的低生產(chǎn)率等問題提供一定理論基礎。本試驗設計了兩個不同的試驗組(谷氨酸處理組,M16對照組),通過對發(fā)育阻滯品系昆明小鼠2-細胞早期、2-細胞中期及2-細胞晚期時期的胚胎進行對比,利用DCFH-DA測定小鼠胚胎內(nèi)部活性氧含量,利用CMF2HC測定小鼠胚胎內(nèi)部GSH含量,最后對GPx基因即GPx1,4和ZGA標記基因即Eif-1α,Muervl,Zscan4d和Hsp70.1的mRNA表達水平進行分析檢測。試驗結(jié)果表明:1、6mmol/L谷氨酸處理組小鼠MZT期胚胎的2-細胞向4-細胞過渡率,顯著高于M16對照組和其余各濃度谷氨酸處理組;2、谷氨酸處理組小鼠MZT各時期胚胎內(nèi)ROS和GSH含量均無顯著差異,其中ROS水平顯著低于M16對照組,GSH水平均顯著高于M16對照組;3、谷氨酸處理組誘導小鼠MZT期胚胎內(nèi)各GPx基因表達上調(diào);4、谷氨酸處理組誘導小鼠MZT期胚胎內(nèi)ZGA標記基因表達上調(diào),尤其在MZT中期和晚期顯著升高;綜上所述,濃度為6mmol/L谷氨酸可通過刺激GPx1和GPx4酶活性維持GSH與ROS含量動態(tài)平衡,間接參與清除ROS的抗氧化過程;通過提高ZGA標記基因表達水平及維持其時序性高表達模式,直接參與ZGA啟動過程;最終有效降低發(fā)育阻滯風險,確保MZT順利完成。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S814
【圖文】：

子的氧化還原反應產(chǎn)生特征熒光信號，檢測昆明系小鼠胚胎ＭＺＴ期活性氧水平。逡逑隨機收集各處理組ＭＺＴ期胚胎，避光染色，熒光顯微鏡觀察，并進行拍照，利逡逑用Ｉｍａｇｅ軟件對獲得的熒光圖片進行分析，獲得熒光量化分析圖，見圖３－３。逡逑邐邐邋２「邐－Ｍ１６逡逑ＨＢ邋ｍ邋Ｉ邋［ｉ逡逑…邋３堓Ｖ；？．邋ｉ－＇邐２ｉｅｌｌ早朗邋２ｉｅｌｌ中期邋２ｉｅ＂灥逡逑２邋ｒ邐ｃ邐ｍ邋２－ｃｅｌ＾ＭＢ逡逑．邐｜邐＿邐Ｓ邋２＞ｃｅＪＩ中期逡逑ｓ邋Ｐ邋１－５邐＂邐ｂ邋ｍ邐甬邋２￣ｃｅｉ＿逡逑ＥＨ丨咖逡逑Ｍ１６邐Ｇｌｕ逡逑圖３－３小鼠ＭＺＴ期胚胎ＤＣＨＦＤＡ染色圖及量化結(jié)果（４００Ｘ邋）逡逑Ｍｇ邋３－３邋Ｍｏｕｓｅ邋ＭＺＴ邋ｅｍｂｉ７0ｓ邋ＤＣＨＦＤＡ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｆｉｇｕｒｅ邋ａｎｄ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（４００ｖ）逡逑注：Ａ．對照組；Ｂ．谷氨酸處理組逡逑Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．ＧＩｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑從圖３－３的熒光染色圖可看出：谷氨酸處理組的熒光強度Ｖ著低Ｔ對照組（Ｐ逡逑＜０．邋０５）。從閣３－３的量化分析圖可看出各試驗組胚胎內(nèi)活性較水平，即２－Ｃｅｌｌ逡逑２３逡逑

圖３－４對照組和谷氨酸處理組的ＧＳＨ，ＲＯＳ相對水平逡逑Ｆｉｇ邋３－４邋Ｒｅｌａｔｉｖｅ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＧＳＨ，邋ＲＯＳ邋ｉｎ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ａｎｄ邋Ｇｌｕ邋ｔｒｅａｔ逡逑如圖３－４所示，是ＧＳＨ和ＲＯＳ分別在對照組和谷氨酸處理組水平（含景）逡逑的量化情況，從量化分析圖不難看出，谷氨酸處理組：昆明小鼠ＭＺＴ＾ｆ同時期逡逑胚胎內(nèi)ＧＳＨ水平均高于ＲＯＳ水平，無明顯波動；々之相反，對照組：昆明小鼠逡逑ＭＺＴ晚期胚胎內(nèi)ＧＳＨ水平低ＲＯＳ水平，且隨將ＲＯＳ不斷累積逐漸下降。本逡逑試驗結(jié)果證實了谷氨酸能夠使ＭＺＴ期胚胎內(nèi)ＧＳＨ和ＲＯＳ水平含量保持相對穩(wěn)逡逑定，為接下來的試驗中研究谷胱甘肽氧化還原系統(tǒng)相關基因的ｍＲＮＡ表達規(guī)律逡逑提供…定理論基礎。逡逑３．邋３小鼠ＭＺＴ期胚胎內(nèi)谷胱甘肽氧化還原系統(tǒng)基因的表達分析逡逑本試驗選取各試驗組不同時期即２－細胞旱期、２－細胞屮期和２－細胞晚期丨Ｋ逡逑胎

圖３－５邋ＧＰｘｌ基因ＰＣＲ量化結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋３－５邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘｌ逡逑從量化分析圖３－５可以看出，處于同－？時期胚胎內(nèi)ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表逡逑達水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ處理組略高于對照組，無顯著性差異（Ｐ＞０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ逡逑中期：Ｇｌｕ處理組顯著高于對照組（Ｐ＜０．邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ晚期：Ｇｌｕ處理組顯著高逡逑于對照組（Ｐ＜0．邋０５），與２－ｃｅｌ丨中期胚胎內(nèi)ＧＰｘｌ基因的ｍＲＮＡ表達水平呈現(xiàn)逡逑出相同的趨勢。逡逑３．邋３．邋２小鼠ＭＺＴ期胚胎ＧＰｘ４基因的表達及量化分析逡逑３邐２「邐＾Ｍ１６逡逑0邐Ｑ邋Ｇｌｕ逡逑ｒｉ邋ｓｉ邋ｉ逡逑２祝啤期邋２－ｃｅｌｌ＿邋２￣ｃｅｔ咖逡逑圖３－６邋ＧＰｘ４基因ＰＣＲ量化結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋３－６邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ｒｅｓｕｌｔ邋ｏｆ邋ＧＰｘ４逡逑從量化分析圖３－６可以看出，處于同…時期胚胎內(nèi)ＧＰｘ４鴣因的ｍＲＮＡ農(nóng)逡逑達水平，２－ｃｅｌｌ早期：Ｇｌｕ處理組顯著高于對照組（Ｐ＜０＿邋０５）邋；邋２－ｃｅｌｌ中期：Ｇｌｕ逡逑處理組略高于對照組，無顯著性左異（Ｐ＞0．0５）邋；邋２－ｃｅ丨丨晚期：Ｇｌｕ處那ｉｌｌＶ＃逡逑高于對照組（Ｐ＜0．0５）邋

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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本文編號：2747550