天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

表達(dá)高致病性豬藍(lán)耳病GP3、GP5基因DNA疫苗構(gòu)建及實驗免疫研究

發(fā)布時間:2020-07-07 22:41
【摘要】:豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(PRRSV)引起豬繁殖與呼吸綜合征,其特征是易感豬生殖健康狀況變差,死亡率升高,特別是在幼齡動物和呼吸系統(tǒng)疾病中。它是世界范圍內(nèi)豬肉生產(chǎn)國的重要疾病,導(dǎo)致母豬繁殖失敗和仔豬呼吸道疾病,這會導(dǎo)致區(qū)域性疾病的發(fā)生和慢性經(jīng)濟(jì)損失。GP5蛋白分子量約為25kDa,含有中和抗原表位,通常認(rèn)為中和抗體的產(chǎn)生與它密切相關(guān)。GP3是分子量約為28kDa的高度糖基化結(jié)構(gòu)蛋白,通常認(rèn)為它對可能影響蛋白的中和活性。該病毒具有已知最高的RNA病毒突變率之一,是開發(fā)保護(hù)性疫苗的主要障礙,DNA疫苗在疫苗生產(chǎn)中顯示了較好的應(yīng)用前景,可引起宿主產(chǎn)生體液免疫及細(xì)胞免疫的免疫應(yīng)答反應(yīng),以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。本試驗以美洲型高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒GD株GP3、GP5基因為研究對象,以pVAX1為載體,構(gòu)建重組核酸疫苗質(zhì)粒pVAX-N35HP,并對構(gòu)建的質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。將鑒定正確的核酸疫苗質(zhì)粒pVAX-N35HP與佐劑A1、A2、A3、A4、A8聯(lián)合使用,免疫分組為pVAX-N35HP+A1、pVAX-N35HP+A2、pVAX-N35HP+A3、pVAX-N35HP+A4和pVAX-N35HP+A8,對小鼠及健康仔豬的免疫效果進(jìn)行評價。實驗期間小鼠每周采血分離血清,檢測中和性抗體、GP3和GP5抗體、IL-4及IFN-γ水平;處死后分離脾淋巴細(xì)胞進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的檢測。結(jié)果表明,pVAX-N35HP+A3組中和性抗體滴度最高,達(dá)到1:16,與商品化滅活疫苗抗體滴度相同;pVAX-N35HP+A3組IL-4水平達(dá)到165.74 pg/μl,高于商品化滅活疫苗組;IFN-γ水平達(dá)到342.67 pg/μl,高于商品化滅活疫苗組;淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果顯示,pVAX-N35HP+A1組具有最高CD3~+CD4~+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù),為24.37%,略低于商品化滅活疫苗組;pVAX-N35HP組具有最高CD3~+CD8~+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù),達(dá)到45.21%,高于商品化滅活疫苗組T細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。表明pVAX-N35HP+A1、pVAX-N35HP+A2和pVAX-N35HP+A3可引起小鼠較強的細(xì)胞免疫和體液免疫,具有良好的免疫效果。選擇小鼠免疫效果較好的pVAX-N35HP+A1、pVAX-N35HP+A2和pVAX-N35HP+A3免疫仔豬,進(jìn)行豬體免疫效果評價。免疫后仔豬每周前腔靜脈采血,分離血清進(jìn)行中和性抗體和細(xì)胞因子等檢測,35天時無菌分離外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行T細(xì)胞亞類鑒定,同時準(zhǔn)備攻毒保護(hù)試驗,攻毒毒株為PRRSV GD株,攻毒劑量2×10~5TCID_(50)。攻毒后每天檢測仔豬直腸體溫,觀察仔豬健康狀態(tài),14天后剖殺豬只,采集心、肝、脾、肺、腎、腹股溝淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)進(jìn)行病毒載量檢測,制作肺部組織病理切片。結(jié)果顯示,pVAX-N35HP+A1組和pVAX-N35HP+A3組具有最高的中和抗體滴度,達(dá)到1:18,低于商品化滅活疫苗組,但統(tǒng)計差異不顯著(p0.05);pVAX-N35HP+A1具有最高的IFN-γ水平,達(dá)到227.37 pg/μl,是pVAX-N35HP組1.22倍,但統(tǒng)計學(xué)差異不顯著(p0.05),高于商品化滅活疫苗組,統(tǒng)計學(xué)差異顯著(p0.05);pVAX-N35HP+A3組IL-4水平最高,為136.77 pg/μl,高于商品化滅活疫苗組,且統(tǒng)計學(xué)差異極顯著(p0.01);pVAX-N35HP+A1組CD3~+CD4~+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)為36.16%與商品化滅活疫苗組統(tǒng)計學(xué)無差異(p0.05);pVAX-N35HP+A3組CD3~+CD8~+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)達(dá)到62.37%,略高于商品化滅活疫苗組,統(tǒng)計學(xué)無差異(p0.05);攻毒后每日觀察仔豬狀態(tài),各免疫組體溫及健康狀態(tài)均好于陰性對照組;攻毒后14天,檢測組織內(nèi)病毒載量,肺部檢測結(jié)果顯示pVAX-N35HP+A1組最低,為2.14×10~3 copies/g,低于商品化滅活疫苗組,pVAX-N35HP組、pVAX-N35HP+A2組和pVAX-N35HP+A3組高于商品化滅活疫苗組但處于相同數(shù)量級。頜下淋巴結(jié)檢測結(jié)果顯示pVAX-N35HP+A1組最低,為7.25×10~3 copies/g,低于商品化滅活疫苗組。腹股溝淋巴結(jié)檢測結(jié)果顯示pVAX-N35HP+A1組最低,為8.70×10~3 copies/g,低于商品化滅活疫苗組。肺部病理切片結(jié)果顯示各免疫組肺部結(jié)構(gòu)均好于陰性對照組。pVAX-N35HP+A3可顯著提高仔豬體內(nèi)細(xì)胞免疫和體液免疫水平,強毒攻擊時顯示良好的保護(hù)效果,可作為預(yù)防和保護(hù)仔豬免受高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的候選疫苗,為未來的疫苗研制提供參考。
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:S858.28
【圖文】:

親水性,蛋白,重組質(zhì)粒


優(yōu)化后(圖 2.1)蛋白親脂性相比優(yōu)化前(圖2.1A)更強,可能更有利于 GP3、GP5 蛋白的表達(dá),密碼子優(yōu)化成功。圖 2.1 蛋白親水性分析Fig. 2.1 Protein hydrophilicity analysis1.3.2 重組質(zhì)粒 pVAX-N35HP 的構(gòu)建及酶切鑒定質(zhì)粒 pVAX-N35HP 構(gòu)建過程如圖 2.2,pVAX-N35HP 重組質(zhì)粒經(jīng) Xba I、HindIII 雙酶切,獲得 1 504 bp 的目的片段(圖 2.3)。測序驗證,重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。

示意圖,疫苗,質(zhì)粒,過程


圖 2.2 DNA 疫苗重組質(zhì)粒構(gòu)建過程示意圖Fig. 2.2 Construction of recombinant DNA vaccine圖 2.3 pVAX-N35HP 酶切結(jié)果A. λ—EcoT14 B. marker: DL2000 C. pVAX-N35HP 質(zhì)粒 XbaI+HindIII 酶切D. pVAX-N35HP 質(zhì)粒 HindIII 酶切

酶切圖,質(zhì)粒


圖 2.3 pVAX-N35HP 酶切結(jié)果oT14 B. marker: DL2000 C. pVAX-N35HP 質(zhì)粒 XbaI+D. pVAX-N35HP 質(zhì)粒 HindIII 酶切Fig. 2.3 Enzyme-digestion result of pVAX-N35HPcoT14 B. marker: DL2000 C. pVAX-N35HP recombina Xba I+HindIII D. pVAX-N35HP recombinant plasmid enHindIII

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 彭安發(fā);;淺談高致病性豬藍(lán)耳病防治[J];農(nóng)民致富之友;2016年22期

2 任素芳;郭立輝;李為棟;張召坤;李興光;崔寶玉;吳家強;張玉玉;;一個豬場高致病性PRRSV的分離鑒定[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年12期

3 郭華生;;豬高致病性藍(lán)耳病的診斷與防治分析[J];農(nóng)業(yè)與技術(shù);2017年06期

4 鄧煒;歐陽芬;申虹;董偉;;六種致病性大腸桿菌單克隆抗體的制備[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2017年08期

5 唐海波;陳鳳蓮;饒桂波;姜佳佳;孟菲;白安斌;楊磊;吳健敏;;竹鼠源致病性雷氏普羅威登斯菌的分離鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2017年07期

6 任雪楓;;高致病性豬藍(lán)耳病的防治(上)[J];農(nóng)家致富;2017年15期

7 王學(xué)英;;高致病性豬藍(lán)耳病的診斷與防治[J];當(dāng)代畜牧;2014年23期

8 王雪芳;劉以水;宋小勇;敖禮林;;高致病性豬蘭耳病及其綜合防制技術(shù)[J];農(nóng)村實用科技信息;2009年06期

9 馬曉春;;高致病性豬藍(lán)耳病的防控[J];畜牧與飼料科學(xué);2009年05期

10 鄒學(xué)剛;吳繼先;侯國帥;樊靜;趙麗娟;歐洋;鄒華;鄒智勇;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒引發(fā)高熱綜合征病因分析與防治措施[J];中國獸藥雜志;2007年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 肖一紅;馬利宏;李曉靜;邱洪凱;劉岳;于穎;劉寧寧;周恩民;;山東省高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會、中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 肖一紅;呂軍華;聶力;馬曉春;周恩民;;高致病性與傳統(tǒng)型PRRSV鑒別診斷間接ELISA方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 肖一紅;聶麗;楊鳳;王彤彤;王莉莉;高繼明;呂軍華;劉寧寧;劉思當(dāng);周恩民;;高致病性PRRSV對妊娠母豬致病性的研究[A];2012年中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)病理學(xué)分會暨中國病理生理學(xué)會動物病理生理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

4 郭亞輝;郭堅華;;水稻條斑病菌保藏13年的致病性檢驗[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文摘要集[C];2005年

5 郭亞輝;郭堅華;;水稻條斑病菌保藏13年的致病性檢驗[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文集[C];2005年

6 陳仕龍;黃梅清;林天龍;江斌;莊向生;陳少鶯;;應(yīng)用單抗鑒別高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 鄭杰;寧宜寶;劉業(yè)兵;邱立新;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的診斷與防制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 肖燕;安同慶;田志軍;韋天超;姜一峰;周艷君;彭金美;仇華吉;童光志;;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染后豬肺泡巨噬細(xì)胞的差異轉(zhuǎn)錄基因文庫的構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

9 程旭;沈欣悅;劉加圣;劉梅;徐玲霞;韋玉勇;周生;戴亞斌;;鴨源坦布蘇病毒對不同禽種的致病性初步觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

10 趙明軍;吳志明;閆若潛;王東方;趙雪麗;劉梅芬;;鑒別高、低致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒二重?zé)晒舛縍T-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 李惠鈺;抗擊致病性流感 我國已做好藥物儲備[N];科學(xué)時報;2011年

2 記者 田帆;歐盟宣布暫停從加拿大進(jìn)口家禽[N];新華每日電訊;2004年

3 張亞麗;H7N9病毒的高致病性分析[N];醫(yī)學(xué)參考報·災(zāi)害救援醫(yī)學(xué)頻道;2015年

4 晏國政;山西采取多種措施應(yīng)對高致病性豬藍(lán)耳疫情[N];瓜果蔬菜報.農(nóng)業(yè)信息周刊;2009年

5 晉江市動物疫病預(yù)防控制中心供稿;加強督促檢查 抓好高致病性疫病[N];福建科技報;2008年

6 ;高致病性動物病原微生物實驗室生物安全管理審批辦法[N];農(nóng)民日報;2005年

7 李慶輝 楊麗雪;嚴(yán)看死守 確保不發(fā)生疫情[N];唐山勞動日報;2006年

8 山西恒豐強動物藥業(yè)有限公司廣州公司 高懷濤;高致病性豬藍(lán)耳病的防控[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2007年

9 高彥生;馬來西亞半島發(fā)生高效致病性禽流感(續(xù)報6)[N];中國畜牧報;2004年

10 通訊員 何秉寧;我州高致病性禽流感防控工作扎實開展[N];大理日報(漢);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 盧萌;中國Treacher Collins綜合征病例表型分析和遺傳學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

2 袁靜;H9N2亞型禽流感北京燕雀分離株的致病性及傳播力研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2017年

3 張亞妮;谷胱甘肽與銅綠假單胞菌致病性及抗生素抗性的關(guān)系研究[D];西北大學(xué);2009年

4 何青;PRRSV不同致病性毒株非結(jié)構(gòu)蛋白誘導(dǎo)靶細(xì)胞細(xì)胞因子差異表達(dá)的分子基礎(chǔ)[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 徐鳳琴;高致病性PRRSV雙抗夾心ELISA抗原檢測試劑盒的研制及基因工程疫苗的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 袁率珍;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒及其非結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)控細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 姜一峰;高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒強弱毒毒力差異的分子基礎(chǔ)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

8 王琦;J亞群禽白血病病毒致病性增強的分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

9 趙巖;Ⅳ型分泌系統(tǒng)在高致病性2型豬鏈球菌引發(fā)鏈球菌中毒性休克綜合征中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 王立林;豬繁殖與呼吸綜合征病毒不同致病性毒株抑制β-干擾素表達(dá)的差異及其分子機(jī)制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙冠宇;表達(dá)高致病性豬藍(lán)耳病GP3、GP5基因DNA疫苗構(gòu)建及實驗免疫研究[D];吉林大學(xué);2019年

2 李洋;一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及其基因組特性和致病性分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

3 李汀;雞致病性沙門氏菌分離鑒定及毒力島核心基因多重PCR方法建立[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

4 沈盛縣;CD100促進(jìn)大皰性類天皰瘡致病性自身抗體產(chǎn)生的作用及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

5 王珊;綠膿桿菌的分離鑒定與致病性研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

6 高嘉聰;我國部分地區(qū)PRRSV遺傳變異分析及NSP9氨基酸突變對PRRSV致病性的影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

7 司冠;向日葵黑莖病病菌鑒定及種質(zhì)資源抗性篩選[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

8 劉優(yōu)招;香港海鷗菌感染宿主的流行病學(xué)調(diào)查、致病性及基因組序列分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

9 李麗琴;高致病性豬藍(lán)耳病弱毒疫苗與滅活苗免疫特性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

10 郝曉芳;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及分子流行病學(xué)分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年



本文編號:2745712

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/2745712.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶2cf16***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
欧美av人人妻av人人爽蜜桃| 91欧美日韩中在线视频| 老司机精品国产在线视频| 精品亚洲av一区二区三区| 扒开腿狂躁女人爽出白浆av | 欧美日韩高清不卡在线播放| 亚洲最新中文字幕一区| 亚洲中文字幕在线乱码av| 午夜资源在线观看免费高清| 亚洲综合色婷婷七月丁香| 亚洲欧美日本成人在线| 亚洲欧美日韩国产成人| 日韩一级一片内射视频4k| 久久偷拍视频免费观看| 色婷婷成人精品综合一区| 丰满人妻一二区二区三区av| 日本和亚洲的香蕉视频| 欧美午夜色视频国产精品| 在线懂色一区二区三区精品| 中文人妻精品一区二区三区四区 | 国产麻豆视频一二三区| 在线欧美精品二区三区| 五月婷婷欧美中文字幕| 欧美日韩国产精品第五页| 国产乱久久亚洲国产精品| 国产精品日韩欧美第一页| 绝望的校花花间淫事2| 国产一级二级三级观看| 欧美多人疯狂性战派对| 欧美日韩国产免费看黄片| 99热九九在线中文字幕| 色好吊视频这里只有精| 午夜国产精品国自产拍av| 精品一区二区三区三级视频| 一区二区免费视频中文乱码国产| 少妇人妻一级片一区二区三区| 国产一区欧美一区二区| 少妇在线一区二区三区| 国内胖女人做爰视频有没有| 国产精品免费视频专区| 91亚洲国产—区=区a|