【摘要】：蒙古羊及其亞種廣泛分布在我國長江以北,蒙古高原及中亞地區(qū),具有耐寒、耐粗飼和肉質鮮美等優(yōu)良特征。因其繁殖力較低,影響了蒙古羊體系的生產效率。本研究采集蘇尼特羊260只(其中經產單羔羊183只,經產雙羔羊77只)作為試驗樣本,同時采集烏珠穆沁羊36只、呼倫貝爾羊(大尾型)、呼倫貝爾羊(小尾型)、小尾寒羊與湖羊各30只,研究樣本總數為416只。利用PCR-RFLP及直接測序技術,挖掘和分析蘇尼特羊GDF9基因存在的突變位點及其對蘇尼特羊產羔數的影響,并對其進行遺傳多樣性分析、生物信息學分析和功能性驗證。結果表明:(1)在蘇尼特羊群體GDF9(生長分化因子9,Growth differentiation factor 9)基因中發(fā)現11個SNP(單核苷酸多態(tài)性,Single nucleotide polymorphism),在這11個突變位點中有兩組突變位點屬于連鎖不平衡(Linkage disequilibrium,LD),分別為LD1(g.41770932CT SNP+g.41771134AG SNP+g.41771380CT SNP)和LD2(g.41771007GT SNP+g.41771305AG SNP+g.41771380CT SNP),且g.41770718TG SNP與LD1在產雙羔母羊群體中呈一定的相互連鎖;關聯性分析結果表明,g.41770718TG(P0.01)、LD1(P0.001)、p.Ser347Phe(P0.05)和c.1525AG SNP(P0.01)與蘇尼特羊平均產羔數顯著相關;(2)雙熒光素酶對啟動子活性分析表明,g.41770932CT SNP在LD1中起主要作用,并且在啟動子上游-177bp處為GDF9的核心啟動子;G等位基因在-118處(g.41770718TG SNP)可使GDF9啟動子活性下降,而T等位基因在-332處(LD1的g.41770932CT SNP)可使其啟動子活性上升,當G和T等位基因同時存在于-118和-332,同樣使啟動子活性上升。上述結果表明,g.41770932CT SNP(LD1)位點可以顯著影響GDF9基因的表達量,且與蘇尼特羊產羔數顯著相關。
【學位授予單位】：內蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S826
【圖文】：

圖 1-2 BMP15 和 GDF9 同源二聚體與 GDF9：BMP15 異二聚體作用于卵丘細胞模式圖[58]Figure1-2 Models for BMP15 and GDF9 homodimers and GDF9:BMP15 heterodimers in regulating cumulusgranulosa cell functions[58]2.1.2 GDF9 對卵子成熟的作用GDF9 不僅在卵巢發(fā)育初級發(fā)揮關鍵作用，還調控卵子成熟的一些發(fā)育事件。在牛的 IVF期間，用外源重組的 GDF9 蛋白對 COC 進行處理，發(fā)現其囊胚率有明顯提升[59]。在小鼠[60-61]、山羊[62]和豬[63]等物種當中，均發(fā)現了類似的現象。體外成熟的卵母細胞可能無法分泌能夠維持卵母細胞減數分裂成熟的卵母細胞因子。例如，在小鼠的體外成熟卵中，BMP15 要明顯少于體內成熟的 COC[64]。GDF9 可以促進卵母細胞中細胞核（質）成熟以及谷胱甘肽過氧化物酶 1（Glutathioneperoxidase1）的表達，并且可以預防透明帶硬化[64]。所以，GDF9 有利于 IVM 中卵母細胞的發(fā)育。上述研究表明，GDF9 在卵巢及卵泡發(fā)育中均發(fā)揮重要作用。

內蒙古大學 碩士研究生論文序后，一共檢測到了 11 個 SNP，其中有 9 個位于轉錄起始位點上游的 1000bp 以內，分別位于-118bp（g.41770718T>GSNP）、-332bp（g.41770932C>TSNP）、-349bp（g.41770949C>TSNP）、-407bp（g.41771007G>T SNP）、-534bp（g.41771134A>G SNP）、-705bp（g.41771305A>G SNP）、-780bp（g.41771380C>T SNP）、-799bp（g.41771399C>T SNP）、-822bp（g.41771422T>C SNP）的位置；另外兩個分別位于外顯子的 1040bp（p.Ser347PheSNP）處和 3’UTR163bp（c.1525A>GSNP）處（圖 3-1 和圖 3-2）。在所有的突變位點當中，g.41770932C>T、g.41771007G>T 和g.41771134A>G SNP 已有報道[83]，但只發(fā)現了 g.41771134A>G SNP 具有顯著的關聯性。結果表明，GDF9 基因 SNP 發(fā)生位置主要集中于啟動子區(qū)域。

30圖 3-2 GDF9 基因各 SNP 測序結果Figure 3-2 The results of sequencing of each SNPs in GDF9關聯性分析718T>G SNP 的關聯性分析特羊、小尾寒羊、湖羊、呼倫貝爾羊（大尾型和小尾型）以及烏珠穆沁

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本文編號：2744813