【摘要】：隨著人們生活水平的日益提高,牛奶早已成為一種非常重要的營(yíng)養(yǎng)食品,而人們對(duì)牛奶品質(zhì)的要求也越來(lái)越高。奶牛乳腺炎則是限制牛奶品質(zhì)的一個(gè)重要的瓶頸。奶牛乳腺炎通常指的是由于病原微生物的感染而使奶牛乳腺組織產(chǎn)生的炎癥的統(tǒng)稱(chēng)。乳腺炎的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)的顯著下降,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究采用對(duì)金黃色葡萄球菌攻毒乳腺組織及攻PBS組織進(jìn)行miRNA表達(dá)譜及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,篩選出其表達(dá)下調(diào)的miRNA和表達(dá)上調(diào)的目的基因,驗(yàn)證候選miRNA與免疫基因的靶向關(guān)系及其在乳腺上皮細(xì)胞系中的相關(guān)功能。1miR-145在牛乳腺上皮細(xì)胞系(Mac-T)中的功能研究為探究miR-145在Mac-T中的功能,我們?cè)贛ac-T中過(guò)表達(dá)和干擾miR-145,并檢測(cè)其過(guò)表達(dá)和干擾效果。效果顯著后應(yīng)用Elisa和EdU檢測(cè)Mac-T幾種細(xì)胞因子的分泌水平變化及細(xì)胞增殖能力變化。結(jié)果顯示:miR-145在牛乳腺上皮細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)情況下可以顯著降低白細(xì)胞介素12的分泌量和腫瘤壞死因子α的分泌量,顯著增加干擾素γ的分泌量。與此同時(shí),過(guò)表達(dá)miR-145后牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖能力被抑制。2 miR-145靶基因的預(yù)測(cè)及靶基因FSCN1的識(shí)別由金黃色葡萄球菌攻毒的乳腺組織轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)結(jié)果,結(jié)合TargetScan、miRanda以及PicTar三個(gè)microRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)出數(shù)個(gè)候選靶基因。并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)(Western Blot)和雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)(Luciferase)多重驗(yàn)證篩選出miR-145的靶基因。結(jié)果顯示:miR-145過(guò)表達(dá)或抑制表達(dá)后,FSCN1的mRNA表達(dá)均發(fā)生顯著變化,并且miR-145過(guò)表達(dá)可以引起FSCN1蛋白表達(dá)的顯著下調(diào)。FSCN1基因mRNA3'UTR存在確實(shí)的miR-145的靶向結(jié)合位點(diǎn),并且下調(diào)FSCN1的活性。故miR-145可靶向調(diào)控FSCN1。3 FSCN1在Mac-T細(xì)胞中的功能研究采用RNA干擾法來(lái)對(duì)Mac-T細(xì)胞系中FSCN1的表達(dá)進(jìn)行干擾,熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證設(shè)計(jì)的siRNA敲降效果顯著后,用Elisa檢測(cè)Mac-T細(xì)胞系細(xì)胞因子的分泌情況以及EdU增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖狀況。從而闡明FSCN1對(duì)Mac-T細(xì)胞系這兩項(xiàng)功能的影響。結(jié)果顯示:FSCN1的敲降可以使白細(xì)胞介素12的分泌量發(fā)生顯著上調(diào),而腫瘤壞死因子α的分泌量卻顯著下調(diào)。4全文結(jié)論金黃色葡萄球菌感染的乳腺組織,機(jī)體開(kāi)啟自我防護(hù)產(chǎn)生炎癥,Bta-miR-145表達(dá)下調(diào),從而釋放了其對(duì)FSCN1基因的干擾作用,FSCN1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞增殖力圖恢復(fù)細(xì)菌侵襲后損壞的乳腺細(xì)胞組織。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S858.23
【圖文】：

揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文構(gòu)并含有成熟ｍｉＲＮＡ，結(jié)構(gòu)具有３’端多聚腺苷酸化和５’端帽，在ＲＮａｓｅｌｌｌ酶Ｄｏｒｓｈａ作用下，與ＤＧＣＲ８結(jié)合形成蛋此蛋白復(fù)合物剪切為約７０ｎｔ的小片段ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。并在轉(zhuǎn)運(yùn)質(zhì)中，與Ｄｉｃｅｒ酶結(jié)合蛋白將ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ切割成長(zhǎng)度約為２２速在細(xì)胞質(zhì)中解螺旋，其中一條鏈為成熟的ｍｉＲＮＡ，另一解［４７，４８］具體過(guò)程參考圖１－１。逡逑

緒欣邋ｍｉＲ－１４５靶向尸篇／調(diào)控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探討ｐ長(zhǎng)的�。遥危粒郏担�，５５１。ＲＮＡ沉默中ｍｉＲＮＡ作為一個(gè)介導(dǎo)分子。針對(duì)大部白，ｍｉＲＮＡ幾乎涉及到動(dòng)物所有的發(fā)育及病理過(guò)程。ＭｉＲＮＡ的生物起源的控制的，它的異常調(diào)節(jié)通常和一些人類(lèi)癌癥有關(guān)［５６—５８］。它通過(guò)ＲＮＡ編，尿苷化和腺苷�；�，ＲＮＡ降解作用來(lái)對(duì)其本身進(jìn)行修飾『５＿。對(duì)于ｍｉＲ正常途徑包括那些不依賴(lài)Ｄｒｏｓｈａ和Ｄｉｃｅｒ的途徑。逡逑ＲＮＡ沉默中，ｍｉＲＮＡ是通過(guò)與目標(biāo)基因的堿基配對(duì)發(fā)揮功能，然而ＡＧＯ通過(guò)誘導(dǎo)翻譯，ｍＲＮＡ脫腺苷化和ｍＲＮＡ降解來(lái)完成［６１＆。ｍｉＲＮＡ結(jié)合ｍＲＮＡｓ的３’非編碼區(qū)，在ｍｉＲＮＡ的５＇末端幾個(gè)個(gè)堿基是重要的識(shí)別位種子序列”（圖１－２）。ｍｉＲＮＡ下游核苷酸都可以與靶基因配對(duì)［６３，６４１。超過(guò)６０碼基因至少存在一個(gè)保守的ｍｉＲＮＡ結(jié)合位點(diǎn)，考慮到有幾個(gè)不保守的結(jié)，大部分蛋白編碼基因可能受幾個(gè)ｍｉＲＮＡ共同調(diào)控逡逑

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本文編號(hào)：2739740