【摘要】：雞馬立克氏病(Marek's disease,MD)和雞傳染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是危害我國養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展的兩種重要的免疫抑制病,其廣泛流行給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗是控制MD和IBD的主要手段。目前MD主要通過血清1型弱毒疫苗預(yù)防。用于預(yù)防IBD的疫苗主要是傳統(tǒng)活疫苗和滅活疫苗,但傳統(tǒng)疫苗不僅易于受到母源抗體的干擾,而且IBD中等毒力活疫苗可以造成一定程度的法氏囊損傷和免疫抑制,因此迫切需要研制更加安全有效的新型IBD疫苗。本研究對我國IBDV超強(qiáng)毒(wIBDV)分離株的遺傳變異、抗原性和致病性進(jìn)行了分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),我國wIBDV毒株正在發(fā)生持續(xù)性進(jìn)化。與我國早期wIBDV分離株相比,我國2000年后分離的vvIBDV毒株的基因組A、B節(jié)段均有一定程度的變異發(fā)生;我國vvIBDV毒株與歐洲wIBDV參考毒株的抗原性無顯著差異;目前wIBDV毒株的致病性有增強(qiáng)趨勢。wIBDV HLJ0504毒株是目前我國的wIBDV流行毒株。雞馬立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)弱毒疫苗株是構(gòu)建重組活載體疫苗的理想載體。為了構(gòu)建表達(dá)IBDV VP2基因的重組MDV活載體疫苗,本研究將MDV血清1型弱毒疫苗814株基因組DNA分段插入Fosmid粘粒,構(gòu)建了 814株基因組粘粒文庫;在此基礎(chǔ)上,選取粘粒組合,建立了 MDV 814疫苗株多片段粘粒拯救系統(tǒng)。將eGFP基因表達(dá)盒分別插入MDV 814 株基因組不同位點,拯救獲得5株穩(wěn)定表達(dá)eGFP的重組病毒。經(jīng)鑒定,5株重組病毒的復(fù)制特性與原疫苗株病毒基本一致;eGFP基因在UL區(qū)三個位點的表達(dá)水平無顯著差異,高于US2位點,US10位點的表達(dá)水平最低。將wIBDV HLJ0504株的VP2基因分別插入MDV 814株基因組的UL41、US2、US10位點,獲得3株表達(dá)VP2基因的重組MDV(r814UL41VP2、r814US2VP2 和 r814US10VP2)。其中,r814US2VP2免疫SPF雞后,能夠?qū)IBDV和wMDV的攻毒提供完全保護(hù)。通過r814US2VP2(命名為rMDV-VP2株)最小免疫劑量試驗,確定了該疫苗的使用劑量為2000PFU/羽份。rMDV-VP2疫苗對wIBDV的保護(hù)效果與商品化Vaxxitek HVT-IBD疫苗相當(dāng),優(yōu)于IBD中毒力活疫苗;rMDV-VP2疫苗對wMDV的保護(hù)效果與商品化MDV血清1型弱毒疫苗相當(dāng),顯著優(yōu)于Vaxxitek HVT-IBD疫苗。rMDV-VP2疫苗對不同的wIBDV分離株都能提供高效免疫保護(hù),可以用于不同品種的商品蛋雞和地方品種雞。rMDV-VP2疫苗的免疫保護(hù)可以覆蓋IBDV的易感期(3-8周齡),并具有至少6個月的抗體持續(xù)期。rMDV-VP2疫苗對靶動物和非靶動物均是安全的;rMDV-VP2疫苗的水平傳播能力極低,無垂直傳播現(xiàn)象;疫苗株病毒免疫雞后的排毒水平極低,在使用環(huán)境中不存在該疫苗株病毒及其病毒DNA的殘留。綜上所述,rMDV-VP2疫苗安全有效,可以作為一種IBD-MD重組二聯(lián)活疫苗用于IBD和MD的預(yù)防。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士后
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65
【圖文】：

國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士后出站報告邐第一章典毒株、超強(qiáng)毒株和變異毒株。上世紀(jì)８０年代，美國首次分離Ｄ的變異株，相繼美國之后，中美洲［１３］和澳大利亞％也有變異株的。歐洲在］９８７年報道了邋ＩＢＤＶ超強(qiáng)毒株（ｖｖＩＢＤＶ）的出現(xiàn)［１５］。逡逑我國的ＩＢＤＶ毒株最早于１９８２年報道，分離于北京（ＣＪ８０１株＃。８０年代末和９０年代初期，ＩＢＤＶ變異株和超強(qiáng)毒株開始在我國，給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［１６，１７］。我國９０年代分離ＩＢＤＶ毒株的毒力介于歐洲ｖｖＩＢＤＶ參考毒株和經(jīng)典毒株之間；與ｖｖＩＢＤＶ參考毒株相比，我國ｖｖＩＢＤＶ基因組Ｂ節(jié)段發(fā)生了一定的，在遺傳進(jìn)化樹上處于一個獨立的分支［１９］。然而，隨著ＩＢＤ疫苗的使用，我國ｖｖＩＢＤＶ也在發(fā)生不斷的變異，具有毒力增強(qiáng)的趨勢［２Ｑ］。逡逑

ｗＩＢＤＶ最先在比利時出現(xiàn)，隨后在歐洲大陸迅速蔓延１８］，傳到英國、逡逑愛爾蘭，在很短的時間內(nèi)又傳至日本、以色列、南非。然后傳至東歐和逡逑亞洲，后來非洲、南美洲也開始有ｗＩＢＤＶ的流行（圖１．１）。ｗＩＢＤＶ逡逑雖然抗原性和經(jīng)典株一樣，但其致死率很高，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的損逡逑失，而且由于變異和環(huán)境等各種因素的影響，在有些地區(qū)，該病的疫苗逡逑免疫效果并不理想［９，１Ｑ】。逡逑１．１．２我國ｗＩＢＤＶ的流行趨勢逡逑ＩＢＤＶ共有兩個血清型，即對雞有致病力的血清Ｉ型和無致病力的逡逑血清ＩＩ型。利用病毒中和試驗（ＶＮ）可以區(qū)分兩個血清型，但是不能逡逑用熒光抗體和ＥＬＩＳＡ加以區(qū)分。兩種血清型之間不存在免疫交叉保護(hù)作逡逑用［１１，１２＾血清Ｉ型ＩＢＤＶ根據(jù)ＳＰＦ雞的致死率和病毒中和試驗又可分為逡逑１逡逑

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本文編號：2737540