【摘要】：目的:溶血曼氏桿菌(Mannheimia haemolytica)是引起運輸熱(shipping fever)的主要致病菌。該菌是一種機會性致病菌,當宿主遭受到運輸、環(huán)境應激、呼吸道病原感染等情況時會導致抵抗力下降,進而細菌迅速增殖引起菌血癥,在受感染的牛只中引起出血性、纖維素性肺炎。近年來,隨著新疆肉牛業(yè)的發(fā)展,頻繁性地調運牛只,由運輸壓力引發(fā)致病病原感染導致調運牛只死亡的數(shù)量日趨增多,給肉牛的調運帶來較大的經濟損失。2017年4月,新疆某牛場在調運的一批肉牛中疑似爆發(fā)巴氏桿菌感染,造成近30余頭發(fā)病牛死亡,為查明致肉牛病死原因,本研究采集兩頭病死牛心、肝、脾、肺組織進行病原體的分離鑒定及部分生物學特性研究,為該疾病的診斷及有效預防控制提供病原學基礎。方法:無菌采集病死牛心血、肺臟、肝臟、脾臟病變組織,進行涂片染色鏡檢、細菌分離培養(yǎng)、生化檢測、血清型和PCR鑒定;通過活菌計數(shù)法和菌液吸光光度法測定各個分離株的生長曲線并將其比較;參照白細胞毒素LktC、外膜脂蛋白相關基因PlpB、gs60、轉鐵蛋白結合蛋白相關基因tbpB、鐵結合蛋白相關基因fbpA、參與糖酵解相關基因gapA、參與復制相關基因dnaN、參與四型菌毛相關基因ptfA及粘附相關基因fimA基因序列設計特異性引物,并以分離株的DNA為模板進行PCR擴增;通過腹腔注射小鼠,測定7株分離菌株的小鼠半數(shù)致死量(LD_(50));分別采用紙片擴散法和試管法對菌株進行了19種抗菌藥物及5種常用化學消毒劑的敏感性檢測。結果:分離獲得7株分離株,命名為Mh1至Mh7。分離株的形態(tài)及生長特性、生化鑒定及PCR鑒定結果與溶血曼氏桿菌特性一致;其血清型鑒定為莢膜血清A2型溶血曼氏桿菌。分離菌均含有四型菌毛相關基因ptfA、參與復制相關基因dnaN、白細胞介素相關基因LktC三種毒力基因。分離株Mh1、Mh2、Mh3、Mh4、Mh5、Mh6、Mh7對小鼠的LD_(50)分別為2.25×10~(8.50)、1.30×10~(8.33)、3.45×10~(7.83)、1.60×10~(8.00)、3.60×10~(7.83)、2.65×10~(8.17)、1.90×10~(8.33)。所以菌株均對氨芐西林、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、頭孢拉定、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢噻吩、新霉素、萬古霉素、替米考星等大部分抗菌藥物具有較強敏感性;Mh3、Mh4、Mh5三株菌株均在0.02%次氯酸鈉、0.1%氫氧化鈉、0.01%碘液和0.01%過氧乙酸消毒液中1 min可全部被殺死。結論:引起某牛場肉牛運輸熱的病原為莢膜血清A2型溶血曼氏桿菌;7株分離株主要攜帶ptfA、dnaN、LktC三種毒力基因,對小鼠均有較強的致病性;分離株對大部分市場常用抗生素及化學消毒劑敏感。試驗結果進一步確定了該牛場肉牛死亡的病因,為疾病的有效防治提供了科學依據(jù),同時也豐富了新疆致肉牛運輸熱溶血曼氏桿菌的生物學特性研究。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23
【圖文】：

LKT遺傳結構

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【參考文獻】

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本文編號：2735265