【摘要】：H9N2亞型禽流感(Avian Influenza,AI)是由H9N2亞型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)引起的家禽、野鳥(niǎo)和部分哺乳動(dòng)物感染的一種低致病性傳染病,可導(dǎo)致雞群的產(chǎn)蛋下降、呼吸道癥狀和免疫抑制疾病,特別是引起商品肉雞的混合感染。自1994年首次在廣東發(fā)現(xiàn)該病以來(lái),已在我國(guó)流行20年,如今已成為養(yǎng)雞場(chǎng)的一種常見(jiàn)的多發(fā)病。研究表明,H9N2在持續(xù)的免疫壓力下,不僅導(dǎo)致病毒基因不斷發(fā)生突變,產(chǎn)生較多的免疫逃避現(xiàn)象,而且H9N2作為內(nèi)基因供體在新型禽流感病毒演化中發(fā)揮著重要的作用。本研究包括以下三個(gè)方面:一、8株H9N2亞型AIV的分離鑒定、序列測(cè)定和全基因組序列分析采集山東、河北等省份送檢的疑似H9N2亞型AIV感染的家禽氣管,肺臟等組織,處理后接種雞胚分離病毒,以血凝和血凝抑制試驗(yàn)結(jié)合RT-PCR鑒定病毒,共分離8株H9N2亞型AIV病毒,分別命名為A/chicken/SD/YT07/2010(簡(jiǎn)寫(xiě)YT07)、A/Chicken/SD/SIX/2010(SIX)、A/Chicken/SD/S2/2005(S2)、A/Chicken/SD//2009(DY)、A/Chicken/SD/FX/2013(FX)、A/Chicken/SD/HK01/2013(HK01)、A/Chicken/SD/905F1/2013(905F1)和A/Chicken/HB/CZ/2013(CZ)。參照Genebank中H9N2亞型AIV的基因序列,設(shè)計(jì)了10對(duì)引物用于擴(kuò)增8株病毒的全基因組序列;利用MEGA5.1軟件對(duì)其8個(gè)基因各自繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)并進(jìn)行分析,同時(shí)與歐亞經(jīng)典毒株BJ94、Y280、F98、G和與北美經(jīng)典毒株Wisconsin 66、Y439的氨基酸序列進(jìn)行比較。系統(tǒng)發(fā)育研究表明:除NA、NS、PB1基因較為保守外,其它5個(gè)基因編碼的蛋白表現(xiàn)為遺傳演化多樣性。8株病毒的NA、NS和PB1基因均屬于F98-like;HA基因均屬于歐亞譜系,其中有2株為BJ94-like,6株為S2-like。NP和PA基因中除1株為BJ94-like,其余均屬于F98-like;PB2基因中1株為F98-like,1株為BJ94-like,其余6株均G1-like;M基因除1株為BJ94-like,其余均為G1-like。表明H9N2亞型禽流感病毒流行毒株的8個(gè)片段發(fā)生了不同程度的重排現(xiàn)象,產(chǎn)生了多種基因型的H9N2病毒。二、HA基因遺傳演化及其變異頻率探討采用源于課題組測(cè)序、從Gene Bank上下載的國(guó)內(nèi)雞源H9N2流行毒以及包括7株經(jīng)典毒株共計(jì)183株病毒序列,利用Lasergen7.1和Mega5.1等軟件,對(duì)其HA基因進(jìn)行系統(tǒng)演化、分子特征和變異頻率分析。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,近二十年的雞源H9N2流行株分屬于BJ94、Y280和S2等譜系,優(yōu)勢(shì)流行株的分布與年代密切相關(guān)。氨基酸序列比較顯示,H9N2病毒不同譜系之間具有各自的特征,且存在著明顯的氨基酸變異積累。以Ck/BJ/1/1994 HA基因?yàn)閰⒄?1994~2014年間,H9N2流行株核苷酸和氨基酸的年均進(jìn)化率分別為5.78×10-3和4.25×10-3。其中,2010~2014年的核苷酸(氨基酸)年均進(jìn)化率為4.9×10-3(5.32×10-3),明顯高于2006~2009年的4.4×10-3(3.7×10-3),更顯著高于疫苗推廣初期1998~2005年的0.74×10-3(0.50×10-3)。H9N2疫苗株和流行毒株的不匹配是病毒變異頻率加快的重要原因。三、H9N2亞型AIV基因作為供體基因在新型H5N2重組病毒中的作用對(duì)本試驗(yàn)室分離的三株H5N2亞型AIV(A/chicken/Shijiazhuang/1209/2013,A/chicken/Chiping/0321/2014和A/chicken/Laiwu/0313/2014)進(jìn)行序列比對(duì)和基因進(jìn)化分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),其NA基因與A/chicken/Qianzhou/12/2010(H9N2)的NA基因的核苷同源率達(dá)到98.6%-98.9%;另余五個(gè)內(nèi)部基因,PB2,PB1,PA,NP和NS基因分別與A/chicken/Qianzhou/12/2010(H9N2),A/chicken/Jiangsu/Q3/2010(H9N2),A/chicken/Shandong/397/2010(H9N2),A/chicken/Zhejiang/611/2011(H9N2)和A/chicken/Qianzhou/12/2010(H9N2)相應(yīng)基因高度同源,該研究表明表明H9N2病毒基因作為供體基因在重組病毒中扮演著重要性的角色。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 賀番;曹瑞兵;郝永清;;禽流感病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的分子生物學(xué)特性與功能[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年04期

2 何后軍,戴益民,付光華;禽流感病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué));2004年02期

3 朱建國(guó),陸蘋(píng);禽流感病毒核蛋白研究進(jìn)展[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2003年01期

4 陳福勇，夏春;禽流感A/雞/北京/1/96(H9N2)株核蛋白基因克隆和序列分析[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);1999年02期

5 王澤霖;劉巖;李建麗;陳少渠;楊大光;柴麗娜;;H9N2亞型禽流感病毒抗原性變異的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年03期

6 陳伯倫，張澤紀(jì)，陳偉斌;禽流感研究I．雞A型禽流感病毒的分離與血清學(xué)初步鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;1994年10期

本文編號(hào)：2734569