【摘要】：ETS(E-twenty six)轉(zhuǎn)錄因子家族在多種生物學(xué)過(guò)程中扮演重要的角色,包括細(xì)胞增殖,分化,遷移,凋亡以及腫瘤的發(fā)生。Etv5(ETS variant 5)是ETS轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,它在精原干細(xì)胞,腫瘤細(xì)胞以及睪丸,卵巢等組織中廣泛表達(dá),與動(dòng)物不育,前列腺癌,子宮內(nèi)膜癌等多種發(fā)育過(guò)程及疾病發(fā)生密切相關(guān)。然而,Etv5在小鼠胚胎干細(xì)胞(m ESCs)中發(fā)揮的作用及機(jī)制尚未有明確的報(bào)道。本研究旨在確定Etv5在m ESCs中的表達(dá)特點(diǎn),研究Etv5在mESCs中的調(diào)控功能,為探究mESCs多能性調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。本研究主要獲得以下結(jié)果:1.Etv5在不同細(xì)胞系和組織中的表達(dá)譜分析利用Bio-GPS數(shù)據(jù)庫(kù),比較了Etv5在不同細(xì)胞系和組織中的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)Etv5在多能干細(xì)胞和肺組織中高表達(dá);應(yīng)用Chip-seq數(shù)據(jù)庫(kù)分析了Etv5在mESCs和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)中的轉(zhuǎn)錄活性,發(fā)現(xiàn)Etv5在m ESCs中的轉(zhuǎn)錄活性更高;最后,通過(guò)RT-qPCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)Etv5在干細(xì)胞中的表達(dá)更高。2.Etv5對(duì)mESCs多能性的影響本研究建立了Etv5敲低mESCs(Etv5 KD mESCs),通過(guò)Ap染色,免疫熒光,RT-qPCR以及Western Blot等方法比較了Etv5敲低組和對(duì)照組的多能性差異,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在細(xì)胞形態(tài),AP染色程度,多能基因表達(dá)等方面并沒(méi)有明顯差異。3.Etv5對(duì)lncRNA H19的調(diào)控作用本研究通過(guò)lncRNA高通量測(cè)序分析,比較了Etv5敲低組和對(duì)照組lncRNA的表達(dá)差異。通過(guò)散點(diǎn)圖和熱圖分析,共找到16個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs,包括7個(gè)上調(diào)lncRNAs,9個(gè)下調(diào)lncRNAs。通過(guò)RT-qPCR檢測(cè),分析了Etv5敲低組,Etv5回補(bǔ)組以及對(duì)照組中Etv5和H19的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)Etv5和H19的表達(dá)負(fù)相關(guān)。4.Etv5對(duì)FGF/ERK信號(hào)通路以及Gata6的調(diào)控作用本研究建立了Etv5敲除mESCs(Etv5 KO mESCs),通過(guò)RT-qPCR和Western Blot檢測(cè),發(fā)現(xiàn)Etv5敲除實(shí)驗(yàn)組中Fgfr2和Gata6的表達(dá)明顯下調(diào);同時(shí),ERK磷酸化(pERK)水平明顯降低。利用PD抑制劑(PD0325901)處理mESCs,通過(guò)時(shí)間依賴性和濃度依賴性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)pERK受抑制后,Etv5的表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論:本研究確定了Etv5在mESCs中的特異性高表達(dá),證明了Etv5敲低對(duì)多能性維持沒(méi)有顯著的影響。證明了Etv5對(duì)H19的負(fù)調(diào)控作用;研究了Etv5通過(guò)FGF/ERK信號(hào)通路調(diào)控Gata6的表達(dá),介導(dǎo)mESCs的原始內(nèi)胚層分化。本研究豐富Etv5在mESCs中的調(diào)控功能,為研究胚胎早期發(fā)育過(guò)程中調(diào)控機(jī)制提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S814
【圖文】：

圖 1-1 Ets 家族結(jié)構(gòu)及成員Fig 1-1 The structure and members of Ets family物學(xué)功能/PU.1 是造血細(xì)胞特定的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑，可以促進(jìn)造血祖細(xì)胞分Gangenahalli et al., 2005)。PEA3 亞家族作為成 FGF 信號(hào)通路的1 一起參與胚胎發(fā)育過(guò)程中神經(jīng)元的特異分化過(guò)程(Ladle an生過(guò)程中，Ets 蛋白可以通過(guò)多種信號(hào)通路，激活 ECM 降解相的浸潤(rùn)和遷移(Taki et al., 2006)。tv5 的生物功能5 是維持小鼠精原干細(xì)胞自我更新和增殖能力的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子定和精子發(fā)育(Eo et al., 2011; Eo et al., 2012; Tyagi et al., 2009)號(hào)通路的下游效應(yīng)物，可以促進(jìn)成體干細(xì)胞的自我更新以及癌, 2012; Monge et al., 2007)。

圖 2-1 lncRNA 的作用機(jī)制(Wang and Chang, 2011)Fig 2-1 The mechanism of lncRNA號(hào)分子cRNA 能夠響應(yīng)來(lái)自細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的信號(hào)，作為特定信號(hào)通路的調(diào)節(jié)劑，lncRNA Kcnq1ot1 和 Air 可以在等位基因的啟動(dòng)子染色質(zhì)區(qū)聚集，以式調(diào)控組蛋白的修飾，引起等位基因的沉默(Mohammad et al., 2009)。在控網(wǎng)絡(luò)中，lncRNA lincRNA-p21 可以結(jié)合到 P53 下游基因的調(diào)控區(qū)，通 K（hnRNP-K）的富集，抑制靶向基因的表達(dá)(Huarte et al., 2010)。餌分子些 lncRNA 可能充當(dāng)分子誘餌的作用，它可以誘導(dǎo)某些蛋白、RNA 或者特定的區(qū)域，發(fā)揮生物功能，有些誘餌分子還可以成為蛋白或 miRNA 的通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制，發(fā)揮調(diào)控功能。lncRNA DANCR 競(jìng)爭(zhēng)性誘捕 miR-372，促進(jìn) ROCK-1 介導(dǎo)的骨肉瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移(Wang et al., 2018)。向作用

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳曉敏;張棟棟;駱健俊;陳潤(rùn)生;;長(zhǎng)非編碼RNA研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2014年10期

2 肖曉輝;溫海霞;劉國(guó)藝;;Ets轉(zhuǎn)錄因子家族的研究進(jìn)展[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年02期

本文編號(hào)：2728550