【摘要】：抗菌藥物敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)(折點(diǎn))可為檢測(cè)病原菌耐藥性,確定耐藥率、耐藥水平提供關(guān)鍵的解釋標(biāo)準(zhǔn)。折點(diǎn)包括:野生型折點(diǎn)(CO_(WT))、臨床折點(diǎn)(CO_(CL))以及藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)折點(diǎn)(CO_(PD))。目前被廣泛認(rèn)可的制定折點(diǎn)的組織機(jī)構(gòu)有:美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)和歐洲抗菌藥物敏感性試驗(yàn)委員會(huì)(EUCAST)。我國尚未設(shè)立折點(diǎn)制定機(jī)構(gòu),因此在實(shí)際應(yīng)用中只能參考國外制定的折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)際上我國獸醫(yī)臨床的用藥模式、細(xì)菌的耐藥水平及耐藥程度與國外的并不完全一致,因此,迫切需要建立符合我國自身情況的判定標(biāo)準(zhǔn)。大腸桿菌是黏菌素的靶細(xì)菌之一,而黏菌素對(duì)大腸桿菌的體外藥效學(xué)數(shù)據(jù)相對(duì)比較匱乏,這些數(shù)據(jù)是制定黏菌素對(duì)大腸桿菌折點(diǎn)的重要依據(jù)。CO_(WT)或流行病學(xué)折點(diǎn)(Ecoff)作為細(xì)菌耐藥性表型監(jiān)測(cè)的判定標(biāo)準(zhǔn),在最終折點(diǎn)沒有建立之前,對(duì)細(xì)菌耐藥性的發(fā)現(xiàn)和發(fā)展能起到預(yù)警作用。mcr-1是近年來發(fā)現(xiàn)的由質(zhì)粒介導(dǎo)的編碼黏菌素耐藥性的基因,ISApl1序列的存在有利于mcr-1的轉(zhuǎn)移及捕獲其它可移動(dòng)元件,因此,分析mcr-1在黏菌素耐藥性中的作用對(duì)于進(jìn)一步研究其分子耐藥機(jī)制及其耐藥性的防控有重要的意義。本研究通過采集我國主要省市規(guī)�；B(yǎng)豬場(chǎng)的豬肛門拭子,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)、分離、純化和鑒定,最后成功分離出1222株豬源大腸桿菌。采用微量肉湯稀釋法,測(cè)定黏菌素對(duì)豬源大腸桿菌臨床分離株的最小抑菌濃度(MIC);采用體外藥效學(xué)試驗(yàn)方法研究黏菌素對(duì)致病性豬源大腸桿菌的最小殺菌濃度(MBC)、抗菌后效應(yīng)(PAE)、最小防突變濃度(MPC)和突變選擇窗(MSW)。結(jié)果表明,黏菌素對(duì)豬源大腸桿菌為殺菌型抗菌藥(MBC=1~4MIC),具有體外PAE,且MSW較寬。藥敏結(jié)果表明,目前我國豬源大腸桿菌對(duì)黏菌素的敏感性偏低,耐藥問題較嚴(yán)重,通過繪制黏菌素對(duì)這些菌株的MIC值分布直方圖,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定黏菌素對(duì)豬源大腸桿菌的CO_(WT)/Ecoff為16μg/mL。本研究選擇從河南地區(qū)篩選出的56株黏菌素耐藥菌株(MIC≥8μg/mL),對(duì)其耐藥性產(chǎn)生與轉(zhuǎn)移的可能性等進(jìn)一步分析。首先采用PCR方法檢測(cè)介導(dǎo)黏菌素耐藥的mcr-1基因,其中有35株(62.50%)黏菌素耐藥菌擴(kuò)增出mcr-1基因。采用PCR-mapping方法對(duì)上述35株陽性菌mcr-1周圍的環(huán)境進(jìn)行分析,探討其轉(zhuǎn)移的能力及其捕獲其它可移動(dòng)元件的可能性。共檢測(cè)出三種不同的基因環(huán)境,20株大腸桿菌在mcr-1上下游均存在ISApl1序列,7株只在mcr-1的上游有ISApl1序列,8株在mcr-1周圍未發(fā)現(xiàn)ISApl1序列。采用藥敏紙片法檢測(cè)mcr-1陽性大腸桿菌的耐藥表型,結(jié)果表明,這些菌株耐藥譜較廣,同時(shí)我們還擴(kuò)增出其他耐藥基因,如:NDM-1、CTX-M-15、AAC(3)-IV、Ant(3″)-I和AAC(3)-II,與其耐藥表型基本一致。綜上所述,目前我國豬源大腸桿菌對(duì)黏菌素敏感率偏低,耐藥問題較嚴(yán)重,在黏菌素耐藥菌株中介導(dǎo)黏菌素耐藥的mcr-1基因檢出率較高,同時(shí)在mcr-1陽性菌株中還發(fā)現(xiàn)與其他耐藥基因共存的現(xiàn)象,確定黏菌素對(duì)豬源大腸桿菌的CO_(WT)/Ecoff為16μg/mL。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.612
【圖文】：

技術(shù)路線圖

圖 3-1 大腸桿菌在麥康凱和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的分離結(jié)果Figure 3-1 The results of E.coli separation by MAC and EMB.1.2 革蘭氏染色鏡檢將選擇性培養(yǎng)基（EMB/MAC）初步分離出的，疑似為大腸桿菌的單一菌落，進(jìn)行革蘭

【參考文獻(xiàn)】

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4 張留t

本文編號(hào)：2727875